SciELO - Scientific Electronic Library Online

 
vol.31 número1DIAGNÓSTICO, CLÍNICA Y TRATAMIENTO DE LA FENILQUETONURIA (PKU)MINERALIZACION OSEA EN PACIENTES CON INSUFICIENCIA HEPÁTICA índice de autoresíndice de materiabúsqueda de artículos
Home Pagelista alfabética de revistas  

Servicios Personalizados

Revista

Articulo

Indicadores

Links relacionados

Compartir


Revista chilena de nutrición

versión On-line ISSN 0717-7518

Rev. chil. nutr. v.31 n.1 Santiago abr. 2004

http://dx.doi.org/10.4067/S0717-75182004000100004 

 

Rev Chil Nutr Vol. 31, N° 1, Abril 2003, pags. 33-38

ARTÍCULOS ORIGINALES

ACTIVIDAD DE DISTINTAS PRESENTACIONES COMERCIALES DE SACCHAROMYCES BOULARDII

COMPARATIVE ACTIVITY OF DIFFERENT COMERCIAL PRODUCTS CONTAINING SACCHAROMYCES BOULARDII

 

Claudia Acevedo G., Jaime Romero O., Romilio Espejo T.

Laboratorio de Biotecnología, Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos (INTA), Universidad de Chile.

Dirección para correspondencia


SUMMARY

Saccharomyces boulardii is a yeast employed in the treatment of diarrhea. We present here the results of a study measuring the relative activity of this yeast in four different formulations available in Chile. The activity was assessed by determining both the number of live cells after re-hydrating the products and the growth observed in the product suspended in culture medium. In each experience the product Perenterylâ showed a faster growth, reaching maximum cell density values three to five hours earlier that the other products. Though the total number of cells was practically the same in each product, the number of live cells was larger in the product Perenterylâ

Key words: probiotics, saccharomyces, diarrhea.


RESUMEN

Saccharomyces boulardii es una levadura recomendada para la prevención y el tratamiento de la diarrea. Se presentan los resultados de la comparación de la actividad relativa de varias presentaciones de esta levadura disponibles en Chile. La comparación se realizó midiendo: i) la rapidez de crecimiento en el producto suspendido en un medio de cultivo y ii) el número de células vivas después de re-hidratar los productos. En las diferentes experiencias, la presentación Perenterylâ mostró un crecimiento más rápido, alcanzando los valores máximos de concentración de células alrededor de tres a cinco horas antes que los otros productos. Aunque el número total de células fue prácticamente igual en todas las presentaciones, el número de células vivas fue muy superior en las presentaciones Perenterylâ.

Palabras claves: probióticos; saccharomyces; diarrea.


INTRODUCCIÓN

Saccharomyces boulardii es una levadura de la especie S. cerevisae [1, 2], recomendada para la prevención y el tratamiento de la diarrea. Diversos estudios han demostrado su eficacia en el tratamiento de la diarrea causada por Clostridium difficile [3], la colitis asociada a tratamientos con antibióticos [4]y en la enfermedad de Crohn [5]. También puede reducir la incidencia de diarrea de los viajeros (traveler's diarrea) [6]y prevenirlas en pacientes alimentados por sonda nasogástrica [7]. Aprovechando su actividad inhibitoria de entero patógenos y sus características anti-diarreicas, ha sido también utilizado en el tratamiento de la diarrea en niños [8]. Se ha demostrado que esta levadura tiene adicionalmente un efecto trófico sobre el intestino delgado de individuos normales [9]. El mecanismo exacto por el cual esta levadura previene o alivia la diarrea no está claro. Se estima que su acción se debe principalmente a su rápido crecimiento el que disminuiría la concentración de otros microbios al competir eficientemente por los diversos nutrientes requeridos por los microorganismos. El efecto trófico sobre el intestino delgado parece ocurrir por la liberación de espermina y espermidina [10]. Diversos estudios han demostrado que el tratamiento con S. boulardii es seguro y bien tolerado [3, 11]. Sin embargo, hay algunos reportes de casos esporádicos de fungemia asociada a la administración oral de este organismo a pacientes en estado crítico, con catéter a la vena o con severas quemaduras [12-14]. Por esto se recomienda no abrir las cápsulas o sobres cerca de pacientes con un catéter venoso central.

En Chile existen actualmente varias presentaciones de S. boulardii que contienen la misma masa de levadura (250 mg por sobre o cápsula). Sin embargo, la efectividad de estos productos depende principalmente de la rapidez con la que se alcanza una concentración crítica de levadura en el tracto intestinal. Ésta, a su vez, depende de la cantidad de células vivas y de la rapidez de crecimiento de estas células. Para comparar actividad de presentaciones disponibles en Chile, se determinó el número de células vivas y la rapidez de crecimiento, en cuatro formulaciones para niños con la levadura, además un aromatizante, dos en cápsulas y otras dos en sobres.

MATERIAL Y MÉTODO

Se utilizaron cuatro presentaciones de S. boulardii: Perenteryl, Merck (cápsulas de 250 mg), Presentación cápsulas B (cápsulas de 250 mg), Perenteryl Pediátrico, Merck (sobre con polvo aromatizado de 250 mg), Presentación sobre C (sobre con polvo aromatizado de 250 mg). Todos estos productos se encontraban dentro de su período de eficacia, a más de ocho meses de su fecha de vencimiento.

La microscopía ser realizó en un microscopio Nikon provisto con una cámara Kodak, con la que se obtuvieron las fotos, con epi-iluminación utilizando el flash de la cámara.

El crecimiento se midió en frascos Erlermeyer de 3 litros conteniendo un litro de medio de cultivo esterilizado al autoclave. La composición del medio de cultivo fue la siguiente: Peptona 2.5 g, D-glucosa 5.0 g, Extracto de levadura 3.0 g. NaCl 0.5 g, por litro de agua destilada y ajustado a pH 7.0. Cada frasco se inoculó con el total del contenido en cada cápsula o sobre, correspondiente a 250 mg de S. boulardii. La incubación se realizó a 37 ºC con agitación orbital a 150 revoluciones por minuto y la densidad celular se determinó midiendo la extinción de luz a 620 nm, utilizando como blanco medio sin inocular. El crecimiento se siguió por un total de 28 horas.

El número de células viables se determinó por el Número Más Probable (NMP). Se realizaron tres réplicas de diluciones seriadas 1:10 para cada muestra y se determinó el número de tubos positivos y negativos en la dilución mayor que no mostraba crecimiento en ninguno de los tres tubos y en las dos diluciones anteriores. Con estos valores se determinó el NMP, utilizando tablas elaboradas para este objeto [15]. El número de células totales se determinó contando las células al microscopio en una cámara Neubauer.

La comparación de la actividad se realizó utilizando la media geométrica en el caso de de número de células. Para la comparación de las curvas de crecimiento se empleó el tiempo medio para alcanzar la fase de crecimiento logarítmico y la fase estacionaria.

RESULTADOS

Aspecto al microscopio. Con el objeto de definir las características generales de cada presentación, se determinó inicialmente su aspecto y forma por examen al microscopio. La figura 1 muestra fotos representativas obtenidas con un objetivo 10X y epi-iluminación. En general los productos Perenteryl aparecen en agregados más pequeños que en las otras dos presentaciones. Esta apariencia podría estar reflejando el método de secado por liofilización empleado en la elaboración de Perenteryl[16].


Crecimiento de las presentaciones en cápsulas. El crecimiento de cada producto en cápsula se comparó midiendo el aumento de las células por el incremento en la absorbancia, al incubar a 37 ºC con agitación. En cada caso se suspendieron 250 mg de S. boulardii (el contenido total en una cápsula) en el medio de cultivo indicado en material y métodos. Se realizaron dos series de experiencias simultáneamente. La figura 2 presenta los valores obtenidos para las dos series de experiencias de cada presentación, donde se compara el crecimiento de los productos en cápsulas, entre 0 y 24 horas. En las dos series de experiencias la presentación Perenteryl mostró un crecimiento más rápido, alcanzando los valores máximos alrededor de cinco horas antes que el otro producto.


Crecimiento de las presentaciones en sobres. El crecimiento de cada producto en las presentaciones pediátricas en sobre se comparó en la misma forma descrita para las presentaciones en cápsula. La figura 3 presenta los valores obtenidos para las dos series de experiencias de cada presentación. En las dos series de experiencias la presentación Perenteryl mostró un crecimiento más rápido, aunque las diferencias fueron menores a las observadas con los productos en cápsulas. En este caso, Perenteryl alcanzó los valores máximos tres a cinco horas antes que el otro producto.


Número de células totales y células vivas en las diferentes presentaciones. Como otra forma de comparar la actividad entre las presentaciones, se midió el número de células totales y de células vivas en cada una. El número de células totales se determinó al microscopio y el número de células vivas por el Número Más Probable (NMP), cultivando las células en el mismo medio utilizado para comparar la velocidad de crecimiento. Se realizaron dos series de determinaciones para cada presentación, al igual que para la comparación del crecimiento. Los resultados se presentan en los cuadros I y II.


En ningún caso se observó una diferencia significativa en el número de células totales. Sin embargo, el número de células vivas en las cápsulas de Perenteryl fue entre 2 a 10 veces superior al contenido en el otro producto. Para sobres, el contenido de células vivas en Perenterylâ fue entre 1000 a 10 veces mayor al observado en el producto alternativo.

DISCUSIÓN

Los resultados obtenidos indican que la cantidad de células vivas y la rapidez de crecimiento fueron superiores en las presentaciones Perenterylâ a las medidas en otras dos presentaciones de S. boulardii disponibles en Chile. Aunque el mecanismo de acción de S. boulardii es múltiple, se acepta que su acción se debe, entre otros, a sustancias inhibitorias de enteropatógenos o a competencia con ellos. En ambos casos, la eficiencia dependerá principalmente de la rapidez con que S. boulardii alcance una concentración efectiva en el intestino. Ha sido demostrado que la recurrencia de la infección por Clostridium difficile, es significativamente menor en pacientes con una mayor concentración de S. boulardii en las heces[17]. Ésta a su vez dependerá de varios factores, principalmente del número de células vivas y de la rapidez con que éstas se revitalicen en el intestino. Estos dos parámetros adquieren mayor relevancia al considerar que las células de S. boulardii en el intestino están siendo continuamente lavadas por el flujo en el tracto digestivo, fuertemente aumentado en casos de diarrea. Una menor cantidad de células vivas iniciales y una revitalización más lenta, en estas condiciones, podría resultar en que no se alcance la concentración de S. boulardii efectiva.

Fuente de Financiamiento: Merck S.A. (La empresa no tuvo influencia en el diseño, recolección de los análisis, interpretación de los datos, ni en la preparación, revisión y aprobación del manuscrito).

 

REFERENCIAS

[1] Mitterdorfer G, Mayer HK, Kneifel W, Viernstein H. Clustering of Saccharomyces boulardii strains within the species S. cerevisiae using molecular typing techniques. J Appl Microbiol 2002;93(4):521-30.        [ Links ]

[2] McCullough MJ, Clemons KV, McCusker JH, Stevens DA. Species identification and virulence attributes of Saccharomyces boulardii (nom. inval.). J Clin Microbiol 1998;36(9):2613-7.        [ Links ]

[3] McFarland LV, Surawicz CM, Greenberg RN, et al. A randomized placebo-controlled trial of Saccharomyces boulardii in combination with standard antibiotics for Clostridium difficile disease. JAMA 1994;271(24):1913-8.        [ Links ]

[4] Surawicz CM, Elmer GW, Speelman P, McFarland LV, Chinn J, van Belle G. Prevention of antibiotic-associated diarrhea by Saccharomyces boulardii: a prospective study. Gastroenterology 1989;96(4):981-8.        [ Links ]

[5] Plein K, Hotz J. Therapeutic effects of Saccharomyces boulardii on mild residual symptoms in a stable phase of Crohn's disease with special respect to chronic diarrhea--a pilot study. Z Gastroenterol 1993;31(2):129-34.        [ Links ]

[6] Kollaritsch H, Holst H, Grobara P, Wiedermann G. [Prevention of traveler's diarrhea with Saccharomyces boulardii. Results of a placebo controlled double-blind study]. Fortschr Med 1993;111(9):152-6.        [ Links ]

[7] Bleichner G, Blehaut H, Mentec H, Moyse D. Saccharomyces boulardii prevents diarrhea in critically ill tube-fed patients. A multicenter, randomized, double-blind placebo-controlled trial. Intensive Care Med 1997;23(5):517-23.        [ Links ]

[8] Saavedra J. Probiotics and infectious diarrhea. Am J Gastroenterol. 2000;95(1 Suppl):S16-S18        [ Links ]

[9] Jahn HU, Ullrich R, Schneider T, et al. Immunological and trophical effects of Saccharomyces boulardii on the small intestine in healthy human volunteers. Digestion 1996;57(2):95-104.        [ Links ]

[10] Buts JP, De Keyser N, De Raedemaeker L. Saccharomyces boulardii enhances rat intestinal enzyme expression by endoluminal release of polyamines. Pediatr Res 1994;36(4):522-7.        [ Links ]

[11] Muller J, Remus N, Harms KH. Mycoserological study of the treatment of paediatric cystic fibrosis patients with Saccharomyces boulardii (Saccharomyces cerevisiae Hansen CBS 5926). Mycoses 1995;38(3-4):119-23.        [ Links ]

[12] Pletincx M, Legein J, Vandenplas Y. Fungemia with Saccharomyces boulardii in a 1-year-old girl with protracted diarrhea. J Pediatr Gastroenterol Nutr 1995;21(1):113-5.        [ Links ]

[13] Viggiano M, Badetti C, Bernini V, Garabedian M, Manelli JC. [Saccharomyces boulardii fungemia in a patient with severe burns]. Ann Fr Anesth Reanim 1995;14(4):356-8.        [ Links ]

[14] Zunic P, Lacotte J, Pegoix M, et al. [Saccharomyces boulardii fungemia. Apropos of a case]. Therapie 1991;46(6):498-9.        [ Links ]

[15] Collins C.H.; Lyne P.M.; Grange J.M. Microbiological Methods. 6 ed. Butterworth & Co.; 1989.        [ Links ]

[16] Schwenzer B. Sacaharomyces boulardii. Deutsche Apotheker Zeitung 1998;(11)        [ Links ]

[17] Elmer GW, McFarland LV, Surawicz CM, Danko L, Greenberg RN. Behaviour of Saccharomyces boulardii in recurrent Clostridium difficile disease patients. Aliment Pharmacol Ther 1999;13(12):1663-8.        [ Links ]

 

Dirigir la correspondencia a:

Profesor Romilio Espejo T.
Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos (INTA). Universidad de Chile.
Avda. El Líbano 5524. Macul, Santiago.
Teléfono: 6781426
Fax: 2214030
E-mail: respejo@inta.cl
Este trabajo fué recibido el 24 de Enero de 2004 y aceptado para ser publicado el 31 de Marzo de 2004.
 

Creative Commons License Todo el contenido de esta revista, excepto dónde está identificado, está bajo una Licencia Creative Commons