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Ciencia e investigación agraria

versión On-line ISSN 0718-1620

Resumen

BARRA, Macarena; SALAZAR, Erika; BELTRAN, María  y  SAGREDO, Boris. Método simple y robusto de extracción de ADN para análisis a gran escala de genotipos con alto contenido de polifenoles, como son variedades nativas de Solanum tuberosum and Zea mays. Cienc. Inv. Agr. [online]. 2012, vol.39, n.3, pp.593-601. ISSN 0718-1620.  http://dx.doi.org/10.4067/S0718-16202012000300019.

La extracción de ADN de alta calidad es esencial para realizar estudios a nivel molecular, en diversas especies con abundancia de polifenoles en sus tejidos, como ocurren en las variedades tradicionales de papa y maíz, que dificultan una buena extracción de ADN genómico. Los polifenoles interfieren en la amplificación del ADN durante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), lo que dificulta realizar estudios de marcadores moleculares basados en PCR. Este artículo describe un protocolo simple y robusto de aislamiento de ADN aplicado a variedades tradicionales de papa y maíz obteniéndose una concentración alta, de gran pureza y calidad. El método desarrollado se basa en el de Krizman et al. (2006), con modificaciones, probándose en hojas de papa y hojas jóvenes de maíz. El método propuesto se comparó con un kit comercial de extracción de ADN y tres métodos descritos para extracción de ADN de plantas: uno descrito para plantas con altos contenidos de polifenoles (Keb-Llanes et al., 2002), un segundo descrito para Solanaceas y otras planta herbáceas (Fulton et al., 1995), y el método de Krizman et al. (2006) original basado en el uso de bromuro de cetyltrimethylammonio (CTAB)-y carbón activado. Mediante este método es posible aislar ADN desde genotipos de papa y maíz, con altos contenidos de polifenoles, y obtener ADN de alta calidad que puede ser utilizado para su uso en técnicas moleculares que involucren la reacción de PCR y el corte con enzimas de restricción. El método es de corta duración, similar a la del kit comercial, pero de menor costo. La cantidad de ADN de maíz extraído es superior al utilizar el método propuesto, en comparación con los otros métodos probados.

Palabras clave : Carbón activado; DNA genómico; extracción de DNA; polifenoles.

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