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International journal of odontostomatology

versão On-line ISSN 0718-381X

Int. J. Odontostomat. vol.6 no.1 Temuco abr. 2012

http://dx.doi.org/10.4067/S0718-381X2012000100008 

Int. J. Odontostomat., 6(1):59-64, 2012.

 

Identificación de Colágeno I y III con Picrosirius Red/ Polarización en el Estroma de Tumores Salivales

 

Identification of Type I and III Collagen by Picrosirius Red/Polarization of Tumoral Salivary Stroma

 

Maria Elena Samar; Rodolfo Esteban Ávila; Onell Gabriela Asis; Ismael Fonseca & Alberto Corball

Facultad de Ciencias Médicas. Facultad de Odontología. Fundación para la Educación, Investigación y Prevención de Cabeza y Cuello (FUNDACYC). Córdoba, República Argentina.

Dirección para correspondencia:


RESUMEN: El estroma juega un rol importante en los procesos tumorales de invasión y metástasis. Las fibras de colágeno tipo I son el principal componente estructural del estroma en distintos tumores. Sin embargo, hay muy pocos estudios en los tumores de glándulas salivales. Basándonos en estos antecedentes el objetivo de la presente comunicación fue estudiar las características del colágeno con Picrosirius red/polarización en tumores benignos y malignos de glándulas salivales para evaluar su posible rol en los mecanismos de progresión tumoral. Cortes histológicos de adenoma pleomórfico, carcinoma adenoide quístico y carcinoma epitelial mioepitelial se colorearon con H/E y Picrosirius red y se examinaron con microscopio de polarización. La birrefringencia del colágeno con Picrosirius/polarización resultó diferente en el estroma de los tumores malignos (carcinoma adenoide quístico y carcinoma epitelial mioepitelial), con predominio de colágeno I, en comparación con el tumor benigno (adenoma pleomórfico), con predominio de colágeno III. El diferente perfil de coloración en las fibras colágenas producidas en el estroma de los tumores analizados podría relacionarse con diferentes mecanismos de expansión tumoral, los que fueron poco estudiados en los tumores de glándulas salivales. Más estudios son necesarios para obtener resultados más concluyentes que contribuyan al diagnóstico, pronóstico y tratamiento.

PALABRAS CLAVE: glándulas salivales, tumores, colágeno, picrosirius, polarización, birrefringencia.


ABSTRACT: The stroma plays an important rol in tumoral invasion and metastasis. Type I collagen is the main structural component of the stroma in several tumors. However, there are few studies on salivary gland tumors. Based on this background the objective of the present communication was to study collagen characteristics with picrosirius red/polarization on malignant and benign tumors of salivary glands to evaluate its posible rol in the tumoral progression mechanism. Histological sections of pleomorphic adenoma, adenoid cystic carcinoma and epithelial/myoepithelial carcinoma were stained with H/E and picrosirius red and were studied with polarization microscope. Collagen birefringence with Picrosirius/polarization was different in the malignant tumor stroma (adenoid cystic carcinoma and epithelialmyoepithelial carcinoma), with predominance of type I collagen, compared with a benign tumor (pleomorphic adenoma), with predominance of type III collagen. The different staining profile in collagen fibers produced in the benign and malignant stroma tumors analized could be related with different tumoral expansion mechanism, which were scarce studied on the salivary glands tumors. More studies are needed to obtain more conclusive results to contribute to diagnosis, prognosis and treatment.

KEY WORDS: salivary glands, tumors, collagen, picrosirius, polarization, birefringence.


INTRODUCCIÓN

Vistas al microscopio óptico, las fibras de colágeno presentan acidofilia con H/E; se colorean de azul con la técnica tricrómica de Masson y de verde con la técnica tricrómica de Mallory (Samar et al., 2004). Pero estos métodos tintoriales no diferencian los distintos tipos de colágeno. Por el contrario, la tinción con Picrosirius red y su posterior análisis con microscopía de polarización nos posibilita demostrar selectivamente diferentes tipos de colágeno (Aparna & Charu, 2010; Coleman, 2011).

Junqueira et al. (1978, 1979) y Montes & Junqueira (1991) relatan en sus trabajos de referencia que el estudio de la biopatología del colágeno tuvo un significativo avance con las técnicas de inmunohistoquímica y Picrosirius red-polarización.

Con Picrosirius red/polarización, las fibras de colágeno I y III muestran birrefringencia debido a que sus unidades submicroscópicas se orientan en dirección al eje de la fibra (López-Mínguez et al., 2006).

Por otro lado, el adenoma pleomórfico, el carcinoma epitelial mioepitelial y el carcinoma adenoide quístico son tumores de las glándulas salivales formados por células epiteliales ductales y mioepiteliales acompañadas de producción de estroma (colágeno, proteoglucanos, glucoproteínas, etc) por parte de estas última células (Ávila et al., 2008; Ellis & Auclair, 2008; Samar et al., 2009; Samar et al., 2010a, b).

Actualmente, hay un creciente interés en relación a los componentes del estroma y su papel en la amplificación o inhibición de la proliferación celular (De Weber & Mareel, 2003; Kakkad et al., 2010).

El estroma juega un rol importante en los procesos tumorales de invasión y metástasis. Las fibras de colágeno Tipo I son el principal componente estructural del estroma en distintos tumores, como los que se desarrollan en mama y próstata (Kakkad et al.).

Sin embargo, hay muy pocos estudios sobre el estroma y colágenos en los tumores de glándulas salivales, que corresponden a menos del 2% de todas las neoplasias humanas (Samar et al., 2009). En relación al colágeno presente en estos tumores y estudiado con Picrosirius, hemos encontrado en las bases consultadas (PUBMED, SCOPUS, LILACS) sólo un trabajo, realizado por Allon et al. (2006). Estos autores estudiaron las diferencias estromales del colágeno en un grupo de tumores salivales con similar histopatogénesis y diferente comportamiento biológico para evaluar su posible aplicación como herramienta diagnóstica.

Basándonos en estos antecedentes el objetivo de la presente comunicación fue estudiar las características del colágeno con Picrosirius red/polarización en los tumores benignos y malignos mencionados anteriormente, para evaluar su posible rol en los mecanismos de progresión tumoral.

MATERIAL Y MÉTODO

Se analizaron los siguientes tumores epiteliales benignos y malignos de glándulas salivales humanas con diferenciación mioepitelial (Tabla I). Los casos, pertenecientes al archivo de la Fundación para la Educación, Investigación y Prevención en Cabeza y Cuello (FUNDACYC), Córdoba, Argentina, fueron reevaluados confirmándose los diagnósticos.

Los adenomas pleomórficos se clasificaron en celular y mixoide según Ellis & Auclair. Los casos de carcinoma adenoide quístico se clasificaron en Grados I, II o III siguiendo los criterios histopatológicos establecidos por Seifert & Sobin (1991).

Cortes histológicos de 5 µm de espesor de biopsias incluidas en parafina se colorearon con H/E como protocolo de rutina y con la tinción histoquímica modificada de Picrosirius red (Sirius red F3B o Rojo directo 80, Aldrich) (Samar et al., 2004; Borges et al., 2007; Aparna & Charu).

Los cortes coloreados con Picrosirius se examinaron con microscopio de polarización NIKON ECLIPSE LV 100POL. La observación de las fibras colágenas con este método permite diferenciar colágeno Tipo I (birrefringencia naranja amarillenta a naranja y rojo) y Tipo III (birrefringencia verde o verdoso amarillenta).

RESULTADOS

A- Hematoxilina/Eosina

Adenoma pleomórfico: en cortes histológicos de este tumor benigno observamos una apariencia histológica polimorfa, con células ductales y mioepiteliales ordenadas en nidos sólidos, conductos y láminas, coexistiendo con áreas estromales hialinizadas, condroides y mixoides. Las zonas mixoides se caracterizaban por presentar una abundante acumulación de glucosaminoglucanos en tanto que las características de las zonas condroides eran las de un tejido cartilaginoso hialino atípico. Sobre la base de su apariencia histológica clasificamos los casos analizados en tipo celular (n=2) y mixoide (n=3) en relación al predominio del componente epitelial o de los elementos mixoides o mucocondroides (Fig. 1A y B).

 

Carcinoma adenoide quístico: los casos de este tumor maligno presentaron células epiteliales y mioepiteliales ordenadas en estructuras cribiformes, ductales y sólidas en proporción variable. El componente cribiforme estaba constituido por espacios semejantes a estructuras quísticas, rodeados por células tumorales que se continuaban con el estroma neoplásico (Fig 2A). En el componente tubular predominaban las estructuras epiteliales tumorales de aspecto ductal (Fig 2B). Cordones densamente celula-res de tamaño variable constituían el componente sólido (Fig 2C). Tres casos correspondieron a carcinoma adenoide quístico grado II y 2 a grado III, según la clasificación de Seifert & Sobert.

Fig. 2. Carcinoma adenoide quístico. A. Componente quístico. H/E. 400x.
B. Componente tubular. H/E. 400x. C. Componente sólido. H/E. 400x.


Carcinoma epitelial mioepitelial: en el caso estudiado se observaron formaciones ductales, algunas con apariencia quística, delimitadas por una doble capa celular, epitelial interna y mioepitelial externa (Fig. 3).

Fig. 3. Carcinoma epitelial
mioepitelial. H/E. 400x.

B- Picrosirius red:

a- Sin polarización: el estroma de todos los tumores analizados se coloreó de una tonalidad rojiza, no pudiéndose diferenciar colágeno I y III (Figs. 4A, 5A y 6A).

Fig. 4. Adenoma pleomórfico tipo mixoide. A. Tejido mixocondroide. Picrosirius
red/sin polarización. 400x. B. Tejido mixocondroide.
Picrosirius red/polarización. 400x.

b- Con polarización: Adenoma pleomórfico: en el estroma se demostró la presencia de abundantes fibras colágenas Tipo III con un rango verde-amarillo verdoso, y escaso colágeno I naranja rojizo dentro de las áreas condromixoides y en la matriz vecina al componente celular. Las fibras colágenas Tipo III se agrupaban en haces entrelazados (Fig. 4B).

Carcinoma adenoide quístico: en los componentes Carcinoma epitelial mioepitelial: la matriz extracelular sólido, tubular y cribiforme había un franco predomi-mostró birrefringencia naranja y rojiza debido a la prenio de colágeno Tipo I, con birrefringencia naranja y sencia de colágeno Tipo I, con escasas áreas de rojiza. Las fibras se distribuían en haces arremolina-birrefringencia verde-amarillo verdoso (colágeno III) dos (Fig. 5B). (Fig. 6B).

DISCUSIÓN

Si comparamos la cantidad de estroma observamos que difiere de un tipo de tumor salival a otro e incluso dentro de un mismo tipo de tumor de acuerdo a su subtipo histológico, por ejemplo el adenoma pleomórfico en sus variedades celular y mixoide (De Weber & Mareel).

Por otra parte, en el perfil de colores del colágeno observado con Picrosirius/polarización, el patrón resultó diferente en el estroma de los tumores malignos (carcinoma adenoide quístico y carcinoma epitelial mioepitelial) en comparación con el tumor benigno (adenoma pleomórfico). Tanto en el carcinoma adenoide quístico como en el carcinoma epitelial mioepitelial fue evidente el predominio de la birrefringencia naranja y rojiza (colágeno Tipo I) sobre la verde y verdoso amarillenta (colágeno Tipo III).

Koening et al. (2006) demostraron que el colágeno Tipo I reduce la adhesión celular y aumenta la proliferación tumoral en el cáncer pancreático.

Similares resultados fueron reportados por Araújo et al. (2009) en el carcinoma ex - adenoma pleomórfico de glándulas salivales, Li et al. (2010) en el carcinoma gástrico y Cheng & Leung (2011) en cáncer de próstata y ovario.

Sin embargo, Allon et al. describieron resultados diferentes a los nuestros, con una alta prevalencia de birrefringencia verde-amarilla en el carcinoma adenoide quístico y el adenocarcinoma polimorfo de bajo grado y amarillo-naranja en el adenoma pleomórfico. Estos autores sugieren que las fibras colágenas estaban laxamente empaquetadas en los tumores salivales más agresivos, compuestas probablemente por colágeno III, intermedio o colágeno patológico, lo que facilitaría la invasión a tejidos adyacentes y el desarrollo de metástasis.

Por el contrario, nuestros resultados preliminares acuerdan con investigadores que asocian la presencia de colágeno Tipo I con el comportamiento invasor de las células epiteliales tumorales ya que en los tumores malignos estudiados demostramos con Picrosirius red /polarización una birrefringencia más alta, característica del colágeno Tipo I.

El diferente perfil de coloración en las fibras colágenas producidas en el estroma de los tumores benignos y malignos analizados podría estar relacionado con diferentes mecanismos de expansión tumoral, los que fueron poco estudiados en los tumores de glándulas salivales.

Más estudios de casos y su control clínico y epidemiológico son necesarios para obtener resultados más concluyentes que contribuyan al diagnóstico, pronóstico y tratamiento.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Subsidio SECYT 214/10. Secretaría de Ciencia y Tecnología. Universidad Nacional de Córdoba, Argentina.

Dirección para correspondencia:

María Elena Samar

Facultad de Ciencias Médicas
Facultad de Odontología.
Fundación para la Educación Investigación y Prevención de
Cabeza y Cuello (FUNDACYC)
Catamarca 1546 (5000)
Córdoba
ARGENTINA

Email: samarcongreso@gmail.com.

Recibido : 19-11-2011
Aceptado: 27-12-2011