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Revista chilena de anatomía

Print version ISSN 0716-9868

Rev. chil. anat. vol.18 n.2 Temuco  2000

http://dx.doi.org/10.4067/S0716-98682000000200005 

ASPECTOS MORFOLÓGICOS Y CITOQUÍMICOS DE LAS CÉLULAS SANGUÍNEAS
DE Salminus maxillosus Valenciennes, 1840 (CHARACIFORMES, CHARACIDAE)

MORPHOLOGICAL AND CYTOCHEMISTRY OBSERVATIONS IN BLOOD CELLS OF Salminus
maxillosus
Valenciennes, 1840 (CHARACIFORMES, CHARACIDAE)

* Veiga, M. L. 
**  Egami, M. I. 
* Ranzani-Paiva, M. J. T. 
*** Rodrigues, E. L. 

 

 

 

VEIGA, M. L.; EGAM I, M. I.; RANZANI-PAIVA, M. J. T. & RODRIGUES, E. L. Aspectos morfológicos y citoquímicos de las células sanguíneas de Salminus maxillosus Valenciennes, 1840 (Characiformes, Characidae). Rev. Chil. Anat., 18(2):245-250, 2000.

RESUMEN: Las características morfológicas de sangre periférica del pez Salminus maxillosus fueron descritas usando microscopía de luz. Para demostrar el comportamiento citoquímico de las células sanguíneas del pez en estudio, fueron aplicados métodos específicos para la detección de cuatro tipos básicos de componentes macromoleculares, de naturaleza química diferente: carbohidratos, lípidos, proteínas enzimáticas y estructurales. Fueron observados 6 tipos de células: eritrocitos, trombocitos, monocitos, linfocitos, neutrófilos de los tipos I y II y eosinófilos. Los trombocitos y los neutrófilos de los tipos I y II presentaron glucógeno en el citoplasma. Los neutrófilos del tipo II presentan gránulos sudanófilos y mieloperoxidasa. Además presentan, reacción difusa intensa para proteínas en el citoplasma. Los eosinófilos muestran reacción intensa en sus gránulos.

PALABRAS CLAVE: 1. Salminus maxillosus; 2. Células sanguíneas; 3. Morfología; 4. Citoquímica. INTRODUCCIÓN

El análisis de los aspectos morfológicos y citoquímicos de las células sanguíneas de ejemplares de Salminus maxillosus, se realizó con la finalidad de identificar algunos de sus componentes fundamentales, para que sirvan como un parámetro indicativo de la función, del tipo celular y del estado de higuidez del animal. Trabajos acerca de la morfología de las células sanguíneas de peces brasileños son escasos, aún más lo son los estudios citoquímicos de los constituyentes celulares. Sin embargo, en los últimos años el número de estudios relacionados con el tema ha aumentado.

Así, en relación al estudio de los elementos figurados de la sangre de diferentes especies de peces, podemos citar varios trabajos que tratan de la morfología (IMAGAWA et al., 1989; NAKAMOTO et al., 1991; RANZANI-PAIVA, 1995; SCHÜTT et al., 1997 y UEDA et al., 1997.

Se pueden encontrar, además, trabajos que involucran aspectos citoquímicos, relativos a la detección de glucógeno, IMAGAWA et al.; SCHÜTT et al.; UEDA, 1993 y HAMERS, 1995, de la mieloperoxidasa, IMAGAWA et al.; NAKAMOTO et al; SCHÜTT et al. y UEDA; de lípidos, SCHÜTT et al.; UEDA et al.; ELLIS, 1976; SARAS-QUETE & GUTIÉRREZ, 1982 y DOGGETT et al., 1987 y, finalmente, de proteínas en general, como la hemoglobina o las proteínas básicas de los gránulos citoplasmáticos (UEDA; RIBEIRO, 1978 y PARISH et al., 1986).

Entre las especies de peces características de los ríos brasileños, el Salminus maxillosus presenta una creciente importancia económica y ecológica, lo que ha creado la necesidad de efectuar un mayor estudio, intentando obtener datos que puedan ser utilizados en la mantención de esta especie en el ambiente natural, como también ser desarrollado en cautiverio y además de su utilización para futuras investigaciones experimentales en el campo de la Hematología Comparada. Así, nos propusimos estudiar los aspectos morfológicos y citoquímicos de las células de sangre periférica de Salminus maxillosus.

MATERIAL Y MÉTODO

Fueron utilizados 16 ejemplares de S. maxillosus, capturados en el río Mogi-Guazu, próximo a la Cachoeira de Emas (21º 58' S - 47º 26'W, altitud de 560m), Municipio de Pirassununga, São Paulo. Las muestras de sangre periférica fueron recolectadas por punción caudal, realizada próxima a la aleta anal, siendo 1,0 ml destinado a la realización de frotis sanguíneos, utilizados para análisis morfológico y citoquímico.

Los frotis fueron sometidos a la tinción (ROSENFELD, 1947) y tratados con métodos citoquí-micos específicos para la detección del glucógeno (McMANUS, 1946); de la mieloperoxidasa (JACOBS, 1958); de lípidos (LISON, 1960) y de proteínas en general (MAZIA et al., 1953).

RESULTADOS

Morfológicos: Los eritrocitos (Fig. 1), presentan forma elíptica, núcleo central con cromatina condensada, constituida por heterocromatina. El citoplasma presenta acidofilia y ocupa gran parte de la célula. Son encontradas también algunas células con núcleo vesiculoso, presentando cromatina laxa y citoplasma con variación en el grado de acidofilia. Se observan también, escasas células con núcleo vacuolizado o picnótico.

Los trombocitos (Fig. 1a) presentan forma elíptica o esférica con núcleo globoso, de color violeta y cromatina en forma de heterocromatina. En la mayoría de ellos, el citoplasma es escaso y no es posible su observación. Cuando es visible, el citoplasma es hialino, con discreta basofilia en la periferia y mayor volumen en los polos de las células.


Fig. 1. Fotomicrografías de frotis de sangre periférica mostrando: a) Trombocito (*) y linfocito (<<); b) Neutrófilo tipo I; c) Neutrófilo tipo II; d) Eosinófilo; e) Monocito. En las fotomicrografias cada leucocito se encuentra rodeado por eritrocitos. Tinción por el método de Rosenfeld. Aumento 1600x.

Fueron observadas dos poblaciones celulares con características morfológicas distintas y clasificadas como neutrófilos tipos I y II. Los neutrófilos del tipo I (Fig. 1b), son células de tamaño medio que presentan núcleo excéntrico, esférico, con cromatina condensada en grumos; con citoplasma claro, de aspecto esponjoso, que presenta una fina granulación de color salmón y gránulos azurófilos grandes y pequeños. Los neutrófilos tipo II (Fig. 1c), se muestran, en general, como células esféricas grandes, con núcleo excéntrico y cromatina en grumos, con lóbulos de aspecto irregular. El citoplasma presenta cuerpos basófilos distribuidos homogéneamente en toda su extención y, a veces, algunas vacuolas y gránulos azurófilos.

Los eosinófilos (Fig. 1d), generalmente son células pequeñas en relación a los neutrófilos, con núcleo esférico o lobulado excéntrico, de cromatina laxa y nucléolos aparentes. Muestran elevada relación núcleo/citoplasma. El tamaño de la célula varía de acuerdo con la cantidad y tamaño de los gránulos eosinófilos acumulados en el citoplasma. Los gránulos, presentan forma esférica, en bastón recto o curvo, dispuestos por todo el citoplasma.

Los monocitos (Fig. 1e), presentan forma esférica con expansiones citoplasmáticas, gran núcleo excéntrico con cromatina laxa y nucléolos evidentes, pudiendo presentar acentuadas incisuras. El citoplasma presenta basofilia, con gránulos azurófilos pequeños y dispersos.

Los linfocitos (Fig. 1a), en general esféricos, muestran gran variación en cuanto a la forma y tamaño, siendo por esto clasificados en linfocitos grandes y pequeños. Los linfocitos grandes presentan cromatina condensada en grumos y escaso citoplasma basófilo, con prolongaciones, presentando expansiones terminales y pocos gránulos azurófilos grandes próximos al núcleo. Los pequeños linfocitos presentan cromatina condensada homogénea y citoplasma basófilo escaso, desprovisto de gránulos y con algunas prolongaciones.

Citoquímicos: Entre todos los tipos celulares analizados, solamente los trombocitos, los neutrófilos de los tipos I y II presentan glucógeno en el citoplasma (Fig. 2a,b). Solamente los neutrófilos del tipo II presentan gránulos sudanófilos y mieloperoxidasa positivos (Fig.2 c,d). Los neutrófilos tipo II presentan, en el citoplasma, reacción difusa fuertemente positiva para proteínas. Los eosinófilos muestran reacción intensamente fuerte en sus gránulos (Fig. 2e).

Fig. 2 - Fotomicrografía de frotis de sangre periférica mostrando reacción positiva para glucógeno en neutrófilo tipo I (a) y neutrófilo tipo II (b). Neutrófilos tipo II con reacción positiva para la detección de mieloperoxidasa (c) y de lípidos (d). Reacción de Azul de Bromofenol fuertemente positiva en los gránulos citoplasmáticos de eosinófilo (e). Coloración nuclear con hematoxilina de Carazzi. Aumento 1600x.

DISCUSIÓN

En vertebrados inferiores es conocido el hecho de que todos los tipos de células sanguíneas presentarían núcleo, inclusive los eritrocitos. Estos tienen forma ovalada, elíptica o esférica y citoplasma altamente acidófilo. Los eritrocitos presentaron variación en su propiedad de tinción, de acuerdo con la maduración de los mismos (RANZANI-PAIVA).

En cuanto a los trombocitos, hace unos años se realizó una revisión bibliográfica acerca de las diferentes formas de trombocitos encontradas en la literatura (GARDNER & YEVICH, 1969. KALASHNIKOVA (1976) relacionó la forma de los trombocitos a los diferentes estadios de desarrollo de los mismos. ELLIS afirmó que los distintos aspectos morfológicos dependen del grado de estress sufrido durante la captura. Morfología similar a los trombocitos de la especie en estudio fueron observadas en otras especies de peces (IMAGAWA; RANZANI-PAIVA y UEDA et al.)

Concordante con nuestros hallazgos, fue referida la existencia de dos tipos de neutrófilos en otras especies de peces (DAVIES & HAYNES, 1975 y KREUTZMANN, 1976). Neutrófilos similares a los del tipo I, del pez en estudio, fueron también descritos en otras especies (RIBEIRO, WINREB, 1963 y PAGE & ROWLEY, 1983). De la misma manera, los peces con neutrófilos semejantes a los del tipo II fueron observados por DOGGETT et al., quienes clasificaron este tipo de célula como granulocito tipo I; RANZANI-PAIVA observó núcleos con pequeño grado de segmentación; SCHÜTT et al., observaron gran cantidad de gránulos citoplasmáticos y UEDA et al., difirieron sólo por la ausencia de vacuolas citoplasmáticas.

Eosinófilos de morfología similar a la observada por nosotros, fue encontrada en diferentes especies, con pequeñas variaciones en la forma y tamaño del gránulo (NAKAMOTO et al.; UEDA et al.; DOGGETT et al. y PARISH et al.).

La presencia de granulocitos del tipo basófilo en sangre periférica de S. maxillosus, no fue observada en esta especie de pez, lo que también fue verificado en otras especies HAMERS; DOGGETT et al.; ALEXANDER et al. y BARBER et al. NALAVADE & VARUTE, 1973, sugirieron que en algunas especies, tal célula no presentaría la metacromasia característica, ocasionada por la heparina, un glicosaminoglicano ácido sulfatado, porque los gránulos estarían constituidos por un precursor, la fotoheparina, insuficientemente sulfatada para producir metacromasia.

Dando continuidad a la discusión relativa a los diferentes tipos de leucocitos circulantes, se observó morfología semejante a las descritas en mamíferos y en diversas especies de peces tanto polinucleares como mononucleares (NAKAMOTO et al; SCHÜTT et al. y UEDA et al.) y de linfocitos RANZANI-PAIVA; SARASQUETE & GUTIÉRREZ y ALEXANDER et al.).

En relación al método PAS, tanto los trombocitos como los neutrófilos tipos I y II, presentaron positividad a la detección de glucógeno. En diversas especies, la morfología y la positividad al PAS se asemejan a nuestros resultados, tal como en los trombocitos de Cyprinus carpio (IMAGAWA); trombocitos y neutrófilos de Oreochromis niloticus (UEDA); neutrófilos de Pleuronectes platessa (ELLIS); Pimelodus maculatus (RIBEIRO); Halobatracus didactylus SARASQUETE & GUTIÉRREZ y Oreochromis mossambicus DOGGETT et al. La identificación del glucógeno en las células sanguíneas es importante, pues su presencia está intimamente ligada al abastecimiento de energía para la realización de la fagocitosis (LEE et al.).

Con respecto a la mieloperoxidasa, enzima lisosómica de gran importancia en el desempeño del mecanismo bactericida, conocido como sistema Klebanoff (STEVENS & LOWE) el complejo formado por la mieloperoxidasa, el peróxido de hidrogeno y los iones cloro forman compuestos secundarios originados por la lipoperoxidación de membranas, aumentando consecuentemente la citotoxicidad de esta enzima. La mieloperoxidasa reacciona también con el modulador de la respuesta imunológica de los macrófagos, por la síntesis del factor de necrosis tumoral, de a/b-interferon y del mediador citotóxico de macrófago (LEFKOWITZ, 1992).

Nuestros resultados mostraron neutrófilos positivos a la reacción para detección de la mieloperoxidasa solamente en el tipo II, lo que indica que esta célula tiene funciones bactericida e inmunomoduladora. En otros peces, la morfología y la citoquímica fueron semejantes a nuestros resultados para neutrófilos tipo I (RIBEIRO y PAGE & ROWLEY) y tipo II SCHÜTT et al.; UEDA; ELLIS; SARASQUETE & GUTIÉRREZ y DOGGETT.

En cuanto al método del Sudan Black B, para identificación de lípidos, hubo reacción positiva solamente en los neutrófilos de Pleuronectes platessa (ELLIS) de Oreochromis mossambicus (DOGGETT et al.) y de Halobatrachus didactylus (SARASQUETE & GUTIÉRREZ) en los neutrófilos y eosinófilos de Oreochromis niloticus (UEDA), débil y difusa en linfocitos, monocitos y trombocitos y fuerte en los gránulos de los neutrófilos de Xiphophorus helleri (SCHÜTT). Es importante resaltar que en el presente estudio solamente los neutrófilos tipo II presentaron positividad, lo que prueba la semejanza morfológica y citoquímica en estas células con las descritas en los trabajos citados.

Cuando se aplicó el método del Azul de Bromofenol, se observó reacción positiva en los eritrocitos, en el citoplasma de los neutrófilos del tipo II y en los gránulos de los eosinófilos. En los eritrocitos la reacción positiva se deba probablemente a la presencia citoplasmática de hemoglobina, substancia de naturaleza básica. Se sabe que en mamíferos, los gránulos citoplasmáticos de los neutrófilos y eosinófilos están compuestos por proteínas que participan en la resistencia contra la invasión e infecciones bacterianas (BOSWORTH & ARCHER, 1962 y SPITZNAGEL & CHI, 1963). Entre éstas, podemos citar la proteína básica mayor, enzimas hidrolíticas y peroxidasa. Resultados similares fueron obtenidos en Oreochromis niloticus UEDA que presentó positividad en los eritrocitos y eosinófilos. Nuestros resultados difieren de otros autores (RIBEIRO) posiblemente por la aplicación de metodologías diferentes.

SUMMARY: The blood cells of fish Salminus maxillosus were studied by means of light microscopy and citochemistry techniques. For citochemistry analisis, we used specific methods for detection of 4 basic macromolecules types, that had different chemistry nature: carbohidrates, lipids, proteins enzimatics and structural. Cells that were differentiated were: erythrocytes, thrombocytes, monophils, lymphocytes, neutrophils type I and II and eosinophils. The thrombocytes, and neutrophils type I and II shows glicogen in the cytoplasm. The neutrophils type II revealed sudanophils and mieloperoxid positive granules and difuse weak reaction for proteins in the cytoplasm. The eosinophils shows strong reaction in cytoplasmic granules.

KEY WORDS: 1. Salminus maxillosus; 2. Blood cells; 3. Morphology; 4. Citochemistry.

* Instituto de Pesca _ Secretaria de Agricultura e Abastecimento, São Paulo, Brasil.
** Depto. de Morfología, Disciplina de Histología, UNIFESP/EPM, São Paulo, Brasil.
*** Laboratório de Impacto Ambiental e Histopatologia _ CEUASP, São Paulo, Brasil.

Dirección para correspondencia:
Dr. Marcelo Leite da Veiga
Laboratório de Impacto Ambiental e Histopatologia CEUASP
Estrada Itapecerica da Serra, 5859
CEP 05858-001,
São Paulo - SP
BRASIL
 
  e-mail: marcelov@iae-sp.br

Recibido : 06-07-2000
Aceptado : 17-08-2000

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