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Biological Research

versão impressa ISSN 0716-9760

Biol. Res. v.37 n.4 supl.A Santiago  2004

http://dx.doi.org/10.4067/S0716-97602004000500009 

 
XLVII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Chile

XLVII

REUNIÓN ANUAL DE LA
SOCIEDAD DE BIOLOGÍA DE CHILE

XVI Reunión Anual de
la Sociedad de Botánica de Chile

23 al 26 de noviembre 2004
Gran Hotel Pucón

Sociedades Participantes

Sociedad de Microbiología de Chile
Sociedad de Genética de Chile
Sociedad de Ecología de Chile

Auspiciadores

EQUILAB
POLYSCIENCE MEDICA S.A.

Patrocinantes

D.R.I. CONICYT
DID, UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE MEDICINA, UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS, P. UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CHILE
FUNDACIÓN CHILENA PARA BIOLOGÍA CELULAR
ICBM, FACULTAD DE MEDICINA, UNIVERSIDAD DE CHILE
UNIVERSIDAD DE CONCEPCIÓN
ALFABETA ARTES GRÁFICAS

 

 

CONFERENCIA

 

Conferencia Inaugural

"Systems Biology": el Nuevo Desafío Juan A. Asenjo Centro de Ingeniería Bioquímica y Biotecnología, CIByB Departmento de Ingeniería Química, Instituto Milenio de Estudios Avanzados en Biología Celular y Biotecnología, CBB Universidad de Chile Beauchef 861, Santiago, Chile. juasenjo@ing.uchile.cl

El análisis sistémico de los sistemas biológicos entrega una dimensión adicional y una cantidad muy importante de nuevo conocimiento, solo en la presencia de herramientas que permitan estructurar, ordenar y seleccionar la gran cantidad de información generada. Esto incluye el reciente desarrollo de la genómica, la proteómica, la genómica funcional y la metabolómica que hacen necesaria la creación, generación y utilización de nuevos modelos matemáticos y computacionales. Además, estos modelos han comenzado a proporcionar una poderosa herramienta para predecir el comportamiento de sistemas biológicos, lo que tiene gran impacto, tanto en el desarrollo de conocimiento fundamental, como de nuevas aplicaciones. Se discutirán y presentarán algunos ejemplos como la regulación génica de vías metabólicas, y cómo, en un cultivo celular, solo midiendo parámetros extracelulares, mediante la utilización de un modelo matemático y computacional fenomenológico, es posible "medir" el comportamiento intracelular.

From Physiology to Ecosystems: How Species Influence Ecosystem Function
Belovsky, G. E. Environmental Research Center, University of Notre Dame, Notre Dame, IN 46556, USA

Conservation of biodiversity is often justified with claims that particular species (ecosystem structure) are critical for maintaining ecosystem processes (ecosystem function), such as nutrient cycling and net primary production (NPP). An example of how ecosystem structure can control ecosystem function is observed in western Montana (USA) rangelands where grasshoppers accelerate nutrient cycling and thereby increase NPP by as much as 20% in some habitats, or decelerate nutrient cycling and thereby decrease NPP by as much as 10% in others. To understand how structure differentially influences function, physiological, behavioral, population and community ecological information are needed for the plants and animals composing the system. Knowing how different plants grow with different nutrient availabilities, why different plants are preferentially fed on by herbivores, and which herbivores are most abundant given interspecific competition and predation are critical for understanding how ecosystem structure affects function and why biodiversity is important to conserve.

THE USE OF GENETIC MARKERS IN CONSERVATION
Stephan M Funk, Institute of Zoology, Zoological Society of London, London NW1 4RY, Uk. Stephan.funk@ioz.ac.uk

Conservation genetics mainly aims to identify patterns of population differentiation, to identify and distinguish the underlying ultimate and proximate processes creating these patterns, to identify genetic threats for declining, small and fragmented populations and to aid the development of management strategies, which best preserve adaptive variation and future evolutionary trajectories of populations and species. Over the last decade, theoretical and technical advances have led to a sharp increase in the application of molecular genetic techniques for conservation. The explosive growth was first triggered by the development of the polymerase chain reaction (PCR). Subsequently, technical advances evolved from manual electrophoresis of PCR products to semi-automated and now automated sequencing and genotyping. Development of theoretical models and statistics, notably Bayesian statistics, allowed stepping beyond purely descriptive analysis of genetic data by fine-scale analysis of population processes in space and time. Technical and theoretical advances together have recently triggered a shift from the investigation of neutral genetic variation, using genetic markers such as mitochondrial control region sequences and genotyping of nuclear microsatellite variation, to the investigation of detrimental and adaptive genetic variation at expressed loci. These advances have lead to an increase of mean numbers of samples and genetic markers per study and to the application of more sophisticated analysis methods. Today, the majority of conservation genetic investigations are based at well funded, well equipped and well staffed laboratories in highly developed countries. However, little attention has been given to the development of low-cost genetic marker systems for conservation genetics and biodiversity monitoring in developing countries. This lecture gives an introduction to the newest technical and theoretical advances in conservation genetics and discusses implications for application of conservation genetic methods in Chile.

 

Conferencia premio

bios-chile-sociedad de biología de chile

NODRIZAS DE LA MONTAÑA: LAS PLANTAS EN COJÍN Y SU IMPORTANCIA EN LA MANTENCIÓN DE LA DIVERSIDAD EN UN AMBIENTE EXTREMO.

(Nurses of the mountain: cushion plants and their importance in the maintenance of the diversity in an extreme environment). Cavieres, L.A. ECOBIOSIS, Departamento de Botánica, Universidad de Concepción. lcaviere@udec.cl

Los ambientes de alta montaña se caracterizan por sus extremas condiciones ambientales. En estos ambientes se ha sugerido que cualquier modificación microambiental que genere micrositios menos rigurosos que su entorno proporcionaría sitios adecuados para el establecimiento de las especies. Las plantas que crecen en forma de cojín son una de las formas de vida mejor adaptadas a estos ambientes extremos, ya que su particular arquitectura, con crecimiento rastrero y entrenudos cortos, permite la generación de condiciones microclimáticas muy particulares entre y bajo su dosel. Estos microclimas facilitan el establecimiento de otras especies de plantas, generando lo que se conoce como efecto nodriza. Este efecto nodriza permite la mantención una mayor riqueza de especies de lo que se esperaría. Experimentos de supervivencia y mediciones ecofisiológicas demuestran que la mitigación térmica y la provisión de humedad son los principales factores que favorecen el reclutamiento sobre los cojines. No obstante este efecto nodriza es importante solo en los extremos de gradientes altitudinales, lo cual repercute en los patrones de distribución altitudinal de las especies. Al facilitar la coexistencia de especies y modificar los patrones de distribución, las plantas en cojín serían claves para la mantención de la diversidad en la alta montaña.
Agradecimientos: FONDECYT 1030821 y F ICM P02-051.

The Lomas Formations: Nature's Desert Laboratory (Las formaciones de Lomas: un laboratorio natural en el desierto). Michael O. Dillon. The Field Museum. Chicago, IL 60605, USA. dillon@fieldmuseum.org

Islands are systems that have long interested students of evolution and biogeography. In addition to oceanic islands, "virtual islands" exist within continental ecosystems. One such archipelago is presented by the lomas formations: communities that exist as isolated islands or "oases" of vegetation within the Atacama and Peruvian Deserts arrayed as a series of nearly 100 isolated communities ("islands") spanning over 3500 kms. To explain observed patterns within the coastal deserts, hypotheses have been formulated to account for processes associated with past climates, including the onset of El Niño conditions, effects of glacial cycles and sea-level changes. As yet, appropriate phylogenetic data are not available for most members of the lomas formations, but our studies in Nolana (Solanaceae) are focused on reconstructing a molecular phylogeny for the over 80 species of Nolana distributed throughout the lomas formations of Peru and Chile. The analysis of this monophyletic group has allowed for an examination of evolution patterns in observable adaptive morphological characters and physiological traits such as seed dormancy patterns, enhanced water use capabilities, or accelerated maturation and flowering. The same data that allows for examination of ecological and morphological adaptations may also be used in interpreting biogeographic patterns. Preliminary molecular phylogenies suggest that Nolana migrated from Chile, into Peru on multiple occasions. Examples of evolutionary relationships in monophyletic groups within the lomas formations will be presented and connections between the Galápagos Island endemic, N. galapagensis and mainland species.

 

CONFERENCIA

DR. HERMAN NIEMEYER

Biosíntesis de los antibióticos nucleosídicos puromicina y A201A en los Streptomyces productores: Bioquímica, Genética y regulación. Antonio Jiménez, Centro de Biología Molecular "Severo Ochoa". CSIC/UAM. Universidad Autónoma. Cantoblanco. 28049 Madrid. España.

Los antibióticos nucleosídicos constituyen un amplio grupo de compuestos producidos por microorganismos del suelo. Algunos de ellos tienen aplicación en medicina, veterinaria y agricultura. Como ejemplos modelo se están analizando las rutas biosintéticas de puromicina y A201A de Strptomyces alboniger y Streptomyces capreolus, respectivamente. El "cluster" (pur) genético determinante de la ruta de biosíntesis de puromicina se aisló en un fragmento de DNA de 13 kb y se expresó de un modo regulado en los organismos heterólogos Streptomyces lividans y Streptomyces griseofuscus. La secuencia de este "cluster" permitió identificar diez ORFs, cuyas secuencias deducidas sugirieron las correspondientes funciones fisiológicas. Ninguna de ellas presentaba similitud con genes reguladores. Experimentos de rotura génica, clonaje y expresión génica han permitido caracterizar los productos de ocho de estos genes, incluyendo dos determinantes de autorresistencia, así como proponer una ruta biosintética de puromicina. Los genes pur 6 y pur10 contienen un codon TTA, extremadamente raro en Streptomyces, que desempeña una función reguladora a nivel de traducción. Se decodifica mediante un tRNALeu específico, determinado por el gen bldA, que se transcribe en el metabolismo secundario. La expresión regulada de pur en S. lividans es dependiente de bldA. A201A contiene la estructura N6,N6-dimetil-3'-amino-3´-desoxiadenosina también presente en puromicina. El "cluster" (ata) genético determinante de la ruta de biosíntsis de A201A se aisló en un fragmento de unas 35 kb que se expresó tras su integración en el cromosoma de S. lividans. Estudios de similaridad sugieren la posible función fisiológica de los productos deducidos de sus 34 ORFs. De hecho, esto se ha comprobado en varios de los genes similares a los correspodientes del cluster pur que determinan la ruta biosintética de la estructura química común en A201A y puromicina. Así, ataP3, ataP5, ataP4, ataP10 y ataP7, complementan los correspondientes mutantes de pur en S. alboniger. Además, dos ORFs de ata determinan auto-rresistencia. Curiosamente, no se ha detectado ningún gen regulador, ni la presencia de tripletes TTA en todas estas ORFs.

Simposios

 

Simposio Fondap-MIFAB

Biología de la enfermedad de Alzheimer

Coordinador:
N. Inestrosa

HUMANIZACIÓN DEL PÉPTIDO-b-AMILOIDE (Ab) DEL Octodon degu, UNA POSIBLE EXPLICACIÓN DEL PRIMER MODELO NATURAL DE LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER (Humanization of the amyloid-b-peptide (Ab) of Octodon degu, a possible explanation of the first natural model of the Alzheimer´s disease). Nibaldo C. Inestrosa y Waldo Cerpa. Centro FONDAP de Regulación Celular y Patología "Joaquín V. Luco", Instituto MIFAB, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.

Los marcadores neuropatológicos de la enfermedad de Alzheimer (EA), que incluyen las placas seniles y los ovillos neurofibrilares, no se encuentran presentes en los cerebros de roedores. Nuestro laboratorio ha reportado que el roedor silvestre Octodon degu expresa la forma neuronal de la proteína precursora del amiloide (APP695) mostrando depósitos tanto intra- como extracelulares del péptido-b-amiloide (Ab); además este roedor presenta depósitos intracelulares de proteína tau y ubiquitina, una fuerte reacción de astrogliosis y neuronas piramidales ricas en acetilcolinesterasa (AChE). La alta homología (97,5%) que existe entre la secuencia peptídica del Ab de degu y el Ab humano es probablemente la causa de la aparición de marcadores de EA en los roedores, siendo este proceso dependiente de la edad del roedor. Los resultados obtenidos indican que el roedor Octodon degu después de cierta edad constituye el primer modelo de roedor silvestre que muestra la características neurodegenerativas asociadas a la EA.

LAS NEURONAS RICAS EN ACETILCOLINESTERASA (NRACHE) EN LA CORTEZA CEREBRAL: DESDE EL HOMBRE AL Octodon degu (Acetylcholinesterase rich-neurones in the cerebral cortex: from the men to the Octodon degu). Ricardo R. García, Juan F. Montiel, Aldo U. Villalón, Mario A. Gatica y Francisco Aboitiz. Departamento de Psiquiatría y Centro de Investigaciones Médicas, P. Universidad Católica de Chile.

La corteza cerebral de primates adultos tiene una clase particular de neuronas conocida como NRAChE. Estas se localizan en los estratos piramidales del neocortex y exhiben una intensa reacción histoquímica en el pericarion y en los segmentos proximales de sus procesos. Las NRAChE son vulnerables a la Enfermedad de Alzheimer y colocalizan con placas seniles y ovillos neurofibrilares en el estrato piramidal supragranular. Mediante técnicas histológicas y morfométricas estudiamos la densidad y el tamaño de las NRAChE en el neocortex humano y de O. degus considerando que en este roedor se han pesquisado previamente placas seniles y ovillos neurofibrilares.
En cerebro humano adulto, las NRAChE muestran consistentemente: i) una densidad mayor en el estrato 3 de las áreas heteromodales de asociación; ii) una asimetría de tamaño interhemisférica restringida al área 45 de Brodmann. Por su parte, en O. degus, en contraste a lo descrito en otros roedores, las NRAChE se detectan en animales adultos en el estrato 3 del neocortex de asociación, mientras que su densidad y tamaño es menor a aquella encontrada en el cerebro humano.
La asimetría de tamaño encontrada podría asociarse a la lateralización funcional relacionada al procesamiento de la sintaxis y reflejar un papel no colinérgico de la AChE. A su vez, el hallazgo de NRAChE en O. degus adultos puede constituir una evidencia adicional para proponer a este roedor como un modelo natural para la Enfermedad de Alzheimer.

 

LA DISTROFIA NEURONAL INDUCIDA POR EL PÉPTIDO-b-AMILOIDE (Ab) Y SUS AGENTES MODULADORES (The neuronal dystrophy induce by the amyloid-b-peptide (Ab) and its modulator agents). Alfredo Lorenzo. Instituto de Investigación Médica Mercedes y Martín Ferreira, Córdoba - Argentina

La Enfermedad de Alzheimer (EA) es una patología neurodegenerativa caracterizada por la presencia de placas de amiloide b (Ab) y distrofia neuronal. La distrofia neuronal sería causal de gran parte del deterioro cognitivo en la patología, sin embargo su mecanismo es desconocido. Recientes evidencias indican que las fibras de Ab (fAb) inducen alteraciones morfológicas que asemejan a la de las neuritas distróficas en la EA. Esas alteraciones neuríticas son mediadas por la formación de adhesiones focales aberrantes con activación de proteínas como paxilina y FAK. Se desconoce la identidad de las proteínas neuronales que pueden funcionar como potenciales receptores de las fAb y mediar la activación de esas proteínas de adhesión focal. Evidencias de nuestro laboratorio sugieren que APP podría participar activamente en ese proceso. Las fibras de Ab (fAb) se unen a APP en la superficie celular. En neuronas, la interacción con las fAb aumenta la vida media de APP y promueve su acumulación en la superficie, fundamentalmente en las adhesiones focales aberrantes de las neuritas distróficas. La distrofia neurítica sería un evento temprano y característico de la degeneración inducida por fAb ya que no se observan con otros estímulos tóxicos. Neuronas deficientes en APP son menos sensibles al efecto tóxico de fAb mientras que la sobreexpresión de APP induce muerte en neuronas primarias, pero no en el neuroblastoma B103. En conjunto nuestros resultados sugieren que la interacción de fAb con APP jugaría un rol central en el proceso de distrofia y muerte neuronal en la EA.

PARTICIPACION DE LOS MIEMBROS DE LA FAMILIA DEL LDL-R EN EL PROCESAMIENTO Y FUNCIÓN DEL APP Y EN LA DEPURACIÓN DEL PEPTIDO Ab (Role of the LDL-R family membersin the processing and function of APP and the depuration of the Ab peptide). María Paz Marzolo. Centro FONDAP de Regulación Celular y Patología "Joaquín V. Luco", P. Universidad Católica de Chile.

El precursor de la proteína del amiloide (APP) es un elemento central en la Enfermedad de Alzheimer (EA). Una característica de la EA es la presencia de depósitos extracelulares de agregados del péptido Ab en las placas seniles de la corteza cerebral. Aun cuando estas acumulaciones de Ab están también presentes en individuos de avanzada edad pero normales, la presencia de ellos sería una de las primeras etapas en la patogenia de la EA, que conducirían a la disfunción y muerte neuronal. Un desbalance entre los mecanismos de producción normal y de depuración de Ab, serían claves en determinar la posibilidad de inducir la agregación y la formación de fibras. Dentro de este delicado balance, aparecen cumpliendo un papel importante los receptores de la familia del LDL-R, especialmente LRP, el que se expresa en el sistema nervioso. Polimorfismos en LRP y en uno de sus ligando más importantes, apolipoproteína E y a2-macroglobulina, se han asociado a la aparición de EA tardía. LRP regula el procesamiento del APP, aumentando la generación de Ab y al mismo tiempo regula la función nuclear del dominio intracelular derivado del corte de APP por la g-secretasa. Por otra parte, LRP con sus ligandos participaría en la depuración del péptido ya que tanto apoE, como apoJ y a2-macroglobulina forman complejos con el péptido soluble que son luego endocitados y degradados intracelularmente, dependiente de LRP. Otro receptor de esta familia, ApoER2 que se expresa en neuronas, presenta polimorfismos asociados a la EA. Hemos indagado la función que este receptor tendría en el procesamiento de APP y producción de Ab, encontrando que su expresión regula la producción del péptido de manera dependiente de la capacidad endocítica del receptor. Interesantemente, ApoER2 a diferencia de LRP, se asocia a microdominios de colesterol y glicoesfingolípidos en la membrana celular, de manera análoga al APP, sugiriendo que este receptor puede tener un papel aún más determinante que el LRP en el procesamiento de APP, el cual es dependiente de los niveles de colesterol de la célula.

 

EL PROYECTO BIODIVERSIDAD DE AYSÉN: UN MODELO DE TRABAJO COOPERATIVO PARA LA CONSERVACIÓN DE LA BIODIVERSIDAD

Coordinadoras:
C. Rubio y W. Quilhot

PROYECTO BIODIVERSIDAD DE AYSÉN: UN MODELO DE INVESTIGACIÓN. (Biodiversity Aysén: a model for research). Torres-Mura, J. C., Castro, D. y Howorth, R. Museo Nacional de Historia Natural, Santiago; Conaf Aysén y Raleigh International, Londres.

La región de Aysén cuenta con una amplia superficie bajo régimen de "Area Silvestre Protegida del Estado". Para su manejo y protección se necesita adecuada información científica y técnica. El proyecto, ejecutado en el Parque Nacional Laguna San Rafael, y las Reservas Nacionales Guaitecas, Katalalixar, Jeinimeni y Lago Cochrane tuvo como objetivos a) aumentar el conocimiento de la biodiversidad, b) mejorar la capacidad de gestión de CONAF a través del manejo de información y de técnicas de monitoreo, c) establecer vínculos con las comunidades locales a través de la educación ambiental y d) diseminar los objetivos y logros del proyecto a una amplia audiencia. Se desarrollaron 18 líneas de investigación que abarcaron diferentes ecosistemas, se involucraron más de 50 investigadores, además de guardaparques y jóvenes voluntarios. El proyecto generó colecciones, presentaciones a reuniones, recomendaciones de manejo, publicaciones científicas y de difusión, etc. Capacitó a los guardaparques en ciencias biológicas, técnicas de monitoreo y manejo de información; la información generada fue estandarizada e ingresada en un SIG para su uso en la gestión de las ASP. A través de un "Centro móvil de educación ambiental" se trabajó con las comunidades de la región; además se apoyó la creación de "consejos consultivos locales" para el manejo participativo de las ASP. Proyecto liderado por CONAF XI Región, Raleigh International, Natural History Museum de Londres y Museo Nacional de Historia Natural de Santiago.
Financiado por la Unión Europea.

FLORA DE LA RESERVA NACIONAL LAGO JEINIMENI, XI REGIÓN DE AYSÉN. (Flora of the of RN Lago Jeinimeni in Region XI, Aysén, Chile). Rojas, G. y Saldivia, P., Museo Nacional de Historia Natural. Patrocinado por CONAF XI Región, Raleigh International, Museo Nacional de Historia Natural, Natural History Museum London, WCMC-UNEP y Unión Europea.

Se presentan los resultados de un estudio Flora que se está realizando en la Reserva Nacional Lago Jeinimeni. El producto de tres exploraciones es la identificación de 232 especies que corresponden a 139 géneros y 59 familias. Las mayores riquezas florísticas son para los ambientes de estepa (105 especies) y bosque de lenga (79 especies). Las familias mejor representadas son Asteraceae (46), Poaceae (14), Fabaceae (13) y Scrophulariaceae (11); los géneros con mayor número de especies son: Senecio con 10 especies y 'Nassauvia, Perezia, Berberis, Ranunculus y Valeriana con 5 especies.
La forma de vida es dominada por herbáceas alcanzando un 76,82%, con una comunidad de arbustos del 18,88%. El 77,25% corresponden a Magnoliopsidas, y el 17,17% a Liliopsidas.
Se extiende el rango de distribución de varias especies: Valeriana moyanoi Speg., especie nueva para el territorio chileno; Viola aff. auricolor Skottsberg, conocida para Argentina; Botrychium dusenii (Christ) Alston, amplía su rango de distribución Norte; Werneria pygmaea Gill. ex H. et A., y Olsynium frigidum (Poepp.) se extienden su distribución hacia el Sur. Se encuentran 11 especies en alguna categoría de conservación. El 87,6% de la flora es autóctona de Chile.
Se agradece al Sr. Benjamín Molina, guardaparque, Reserva Nacional Lago Jeinimeni.

 

RIQUEZA FLORÍSTICA DE LA RESERVA NACIONAL TAMANGO. XI REGIÓN, CHILE. (Floristic richness of Tamango National Reserve. XI Región, Chile). Tomé, A. & Teillier, S. Escuela de Ecología y Paisaje, Universidad Central. Santiago de Chile.

La Reserva Nacional Tamango ocupa unas 7.000 ha situadas entre los 200 y los 1.700 msnm. Posee un clima de tendencia oceánica, registrándose unos 800 mm de precipitaciones/año. La vegetación corresponde a comunidades del bosque caducifolio de Aysén y de la estepa patagónica.
Dada la ausencia de publicaciones sobre la riqueza de su flora, el objetivo del trabajo fue contribuir a su conocimiento, con el fin de mejorar la calidad de la información disponible.
El área fue visitada dos veces, realizándose colectas dirigidas a cada tipo de vegetación, incluyendo los humedales.
La riqueza alcanza a 204 especies, no encontrándose ninguna en categorías de conservación. Un 20% son advenas, las que dan cuenta de la antropización en algunos sectores. Las formas de vida de Raunkiaer muestran que 129 especies son hemicriptófitas; 32, fanerófitas y 20, terófitas, destacando entre estas el dominio de las advenas.
Una comparación con el PN Laguna San Rafael muestra un 18% de similitud y con la RN Jeinimeni, un 66%.
Si bien, la reserva fue creada con el fin de proteger al huemul, los resultados muestran que para la conservación de la flora regional se trata de tres áreas complementarias, lo que justifica, desde un nuevo punto de vista, su inclusión en el SNASPE.
Agradecemos a CONAF XI Región, Iniciativa Darwin.

FLORA MARINA BÉNTICA DE LA REGIÓN DE AYSÉN, SU DISTRIBUCIÓN Y AFINIDADES BIOGEOGRÁFICAS. (The benthic marine algal flora from Aysen, its distribution and Biogeographical affinities). Ramírez, M.E. Laboratorio Algas Marinas, Museo Nacional de Historia Natural, Casilla #787. Santiago-Chile: mramirez@mnhn.cl

La Flora Marina bentónica de la remota región de los fiordos de la Patagonia de Chile, ha sido hasta ahora escasamente conocida. Esta área costera se extiende desde la Isla de Chiloé (43ºS) hasta Tierra del Fuego (54-55ºS) e incluye varias áreas silvestres protegidas, entre las que destaca el Parque Nacional Laguna San Rafael. El presente estudio da cuenta de los principales biotopos marinos y de la Flora marina bentónica del área costera de la Región de Aysén, entre el Archipiélago de Los Chonos y la Reserva Nacional de Katalalixar. El estudio incluyó 251 sitios de muestreo realizados entre 1998 y 2003. Los resultados indican la presencia de 114 especies de macroalgas (19 Chlorophyta; 26 Phaeophyceae y 69 Rhodophyta). Biogeográficamente, la Flora marina de Aysén comprende los mismos 5 elementos biogeográficos que caracterizan la costa de Chile, siendo el componente subantártico el de mayor significancia (49%). Aun así, un análisis de similitud entre esta Flora y la Flora de más al Norte y más al Sur la caracterizan como más cercana a la Flora del Centro-Sur de Chile que a la Flora de Magallanes y Tierra del Fuego. Un análisis de los patrones de distribución de estas macroalgas establece como factores claves la salinidad y la exposición al oleaje.

BIOGEOGRAFÍA DE LÍQUENES DE AYSÉN, CHILE. (Lichen biogeography in Aysén, Chile). Quilhot, W. y Rubio, C. Departamento de Ciencias Químicas y Recursos Naturales, Facultad de Farmacia, Universidad de Valparaíso, Chile. Casilla 5001 Valparaíso wanda.quilhot@uv.cl

Por su ubicación geográfica y la variedad de hábitats que la caracterizan, en la Región de Aysén se desarrolla una diversa y rica flora liquénica con afinidades biogeográficas con diferentes zonas del país y del mundo. El análisis de los patrones de distribución de las especies, 271 taxa de macrolíquenes, revela afinidades con la flora liquénica de los bosques valdivianos, de bosques y estepas magallánicas, cordillera central, Fray Jorge, Juan Fernández y el altiplano. Las afinidades con elementos antárticos son apreciables, el 22% de las especies de Aysén están presentes en Antártica e islas subantárticas. El 20% de los taxa son endémicos del sur de América del Sur; los géneros con mayor número de elementos endémicos incluyen a Pseudocyphellaria, Menegazzia, Protousnea y Sticta. Los elementos cosmopolitas alcanzan el 12%, los elementos bipolares el 13% y los elementos australes el 11% del total de especies registradas a la fecha. Los elementos circumpolares, pantropicales, paleotropicales, autralásicos están representados por un reducido número de especies. Hypogymnia bitteri y Xanthoparmelia stenophylloides constituyen nuevos registros para Chile, Degelia flabellata y Leptogium britannicum lo son para América del Sur.
Proyectos Biodiversidad de Aysén, Unión Europea, y DIPUV 27/2003, Universidad de Valparaíso.

 

Gradientes en Ecología funcional de plantas y animales ¿aportes a la teoría?

Coordinadores:
L. Cavieres
F. Bozinovic

¿TIENE SENTIDO ESTUDIAR GRADIENTES LATITUDINALES PARA LA ECOLOGÍA DE ESPECIES DE PLANTAS? (Is it meaningful to study latitudinal gradients for plant species ecology?) Gianoli, E. ECOBIOSIS, Departamento de Botánica, Universidad de Concepción. Casilla 160-C, Concepción, Chile.

Uno de los patrones biogeográficos más conspicuos y menos discutibles es el gradiente latitudinal de diversidad de especies. Sin embargo, a partir de generalizaciones gruesas habitualmente derivadas de observaciones de especies de mamíferos y aves, y convertidas en reglas o principios cuya validez general es discutible, la "mirada latitudinal" ha permeado otras escalas de organización biológica. En particular, se ha establecido cierta tradición de estudiar patrones de distribución latitudinal para responder preguntas de la ecología de una especie. En este marco histórico-teórico, el presente trabajo tiene dos objetivos principales: 1) Discutir la validez de las generalizaciones a escala de especie en la dimensión latitudinal, y 2) Cuestionar la utilidad del concepto gradiente latitudinal para responder preguntas de la ecología de especies de plantas, presentando evidencias empíricas que incluyen datos de especies nativas chilenas. Parte de la argumentación que se presenta se basa en que la escala de heterogeneidad ambiental relevante para los procesos ecológicos y evolutivos de las especies de plantas es significativamente más fina que los gradientes latitudinales de factores abióticos, si los hay.
FONDECYT 1030702

VARIACIONES ALTITUDINALES EN ESTRATEGIAS DE GERMINACION DE SEMILLAS. (Altitudinal variations in seed germination strategies). Cavieres, L.A. ECOBIOSIS, Departamento de Botánica, Universidad de Concepción. lcaviere@udec.cl

Teóricamente, hacia mayores altitudes la reproducción sexual sería menos importante que la reproducción asexual, por lo que la formación de bancos de semillas persistente (BSP) debiera disminuir con la altitud. Numerosos estudios han documentado la presencia de semillas en suelos alpinos. Sin embargo, no es del todo claro si estas semillas en el suelo son solo la expresión de las frías condiciones del suelo que favorecen una prolongada persistencia de las semillas o son el resultado de un proceso selectivo en la latencia de las semillas. Para abordar esta interrogante investigamos la variación altitudinal en la formación de BS en la hierba perenne Phacelia secunda. Se utilizó un sistema de encierros recíprocos con semillas colectadas a 4 niveles altitudinales en los Andes de Chile central. Las semillas colectadas a baja altitud no tendrían la capacidad de formar un BSP ya que la gran mayoría de las semillas germina el primer año, y de las que no germinan un bajo porcentaje permanece viable. Las semillas de mayor altitud, en cambio, tienen la capacidad de formar BSP pues solo algunas semillas germinan después de un año, y en aquellas que germinan un alto porcentaje permanece viable. Un análisis a nivel comunitario demuestra que proporcionalmente más especies forman BSP a mayores altitudes. En consecuencia, y contrariamente a los esperado, la capacidad de formar BSPs se incrementa con la altitud.
Agradecimientos: FONDECYT 2950072 y F ICM P02-051.

Variación de historia de vida en clinas geográficas: Patrones, mecanismos y procesos microevolutivos. (Life-history variation in geographic clines: patterns, mechanisms and microevolutionary process). Lardies M.A. Departamento de Ecología, Pontificia Universidad Católica de Chile.

Los gradientes ambientales son comunes en la naturaleza y tienen un efecto principal sobre los patrones fenotípicos. Los animales que presentan amplias distribuciones geográficas hacen frente a grandes diferencias ambientales entre hábitats, lo cual en principio, es posible debido a diferencias genéticas y/o plasticidad (flexibilidad) fenotípica.
Los rasgos de historia de vida son considerados las medidas más claras de adecuación biológica de un organismo en la naturaleza. Sobrevivencia, tasa de crecimiento, fecundidad, edad de madurez y tamaño de la progenie son rasgos que exceden el nivel individual afectando primariamente la ecología evolutiva de los organismos. Utilizando modelos de estudio de diferentes sistemas (i.e. terrestres y marinos) como también con distintas estrategias vitales, mostraré cómo la variación intraespecífica en rasgos de historia de vida es ubicua en comparaciones clinales a lo largo de Chile. Posteriormente, desarrollaré cómo la variación fisiológica dentro de la historia de vida de un organismo puede tener profundas implicancias sobre la adecuación biológica. Si queremos realizar interpretaciones evolutivas de los patrones de variación de historia de vida se requiere una distinción entre variación genotípica y variación fenotípica ambientalmente inducida, para ello presentaré estudios de jardines comunes y de genética cuantitativa de distintas poblaciones de un organismo modelo en una clina latitudinal en Chile. Los resultados enfatizan la importancia de una aproximación integrativa para el estudio del fenotipo e ilustra como rasgos de historia de vida y fisiológicos están unidos a través de funciones organísmicas comunes.
FONDECYT 3040042

Gradientes en ecología funcional de plantas y animales: ¿aportes a la teoría? (Gradients in the functional ecology of plants and animals: theoretical contributions?). Bozinovic, F. CASEB & Departamento de Ecología, P. Universidad Católica de Chie, Santiago, Chile. Email: fbozinov@bio.puc.cl

La Sociedad de Botánica de Chile y la Sociedad de Ecología de Chile han decidido aunar esfuerzos y organizar un simposio común con el fin de integrar en un problema general las aproximaciones disciplinarias de los miembros de ambas Sociedades.
En este Simposio discutiremos el problema de gradientes espaciales y clinas en ecología, las reglas que están detrás de estos gradientes y cómo estudiarlas. Nuestra aproximación será taxa y ambiente independiente, será conceptual, y buscaremos y discutiremos diferencias y similitudes entre diferentes sistemas ecológicos y taxonómicos. Analizaremos diferentes niveles de organización, - i.e. desde individuos a comunidades e intentaremos llegar a conclusiones generales orientadas a verificar cuál es el aporte de los estudios de gradientes geográficos a los diferentes cuerpos teóricos de la ecología.
Fondap 1501-0001 (Programa 1)

Diversidad geogrÁfica de invertebrados marinos: patrones y procesos causales (Diversity patterns of marine invertebrates: patterns and causal processes) Fernández, M. ECIM y CASEB, Departamento de Ecología, Pontificia Universidad Católica de Chile, Casilla 114-D, Santiago.

Los patrones de diversidad de especies son un fenómeno muy estudiado pero pobremente entendido, particularmente en sistemas marinos. Se compararon los patrones diversidad de 6 taxa de invertebrados marinos que exhiben diferentes modos de desarrollo larval a lo largo de la costa de Chile y 2 taxa con desarrollo planctotrófico en la costa argentina. Se evaluó el efecto de la temperatura sobre la diversidad de cada grupo. La diversidad en taxa que muestran exclusivamente desarrollo directo aumentó monotónicamente hacia altas latitudes mientras que en los taxa que muestran exclusivamente desarrollo planctotrófico disminuye hacia altas latitudes. Los taxa que no exhiben un único modo de desarrollo larval (tanto especies de desarrollo directo como planctónicas) mostraron un aumento abrupto de la diversidad entre los 40 y los 45ºS. La temperatura es un excelente predictor de la diversidad a escala geográfica para ambos modos de desarrollo, operando de forma diametralmente opuesta en taxa con desarrollo planctotrófico o directo. Nuestras evidencias de laboratorio sugieren que las especies de desarrollo directo podrían verse negativamente afectadas a bajas latitudes debido al aumento de los costos asociados al cuidado parental. Por otro lado, existen evidencias en la literatura que las especies con fases larvales podrían verse afectadas a bajas temperaturas, especialmente aquellas con larvas planctotróficas.
Financiamiento: Fondecyt 1020860 y Fondap-Fondecyt 1501-0001 (Programa 4)

 

TALLER DE BIOÉTICA:

CLONACIÓN HUMANA CON FINES TERAPÉUTICOS

Coordinador: M. Santos

Miguel Allende(1), Manuel Santos(2,4); Carlos Valenzuela(3,4); (1) Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, (2) Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile, (3) Facultad de Medicina, Universidad de Chile, (4)Comité de Ética y Bioética, Sociedad de Biología de Chile

Recientemente se dio a conocer un reporte que muestra la clonación del primer ser humano (al estado embrionario) (Hwang et al., Science 303(5664):1669-1674, 2004). Ello ha impactado profundamente el ambiente científico y a la sociedad entera. Se trata de un acontecimiento científico importante y de gran impacto a nivel bioético.
La clonación con fines terapéuticos intenta generar células troncales (stem) clonadas que sirvan para obtener células diferenciadas, que a su vez, permitan reemplazar células dañadas en variadas patologías, tales como Enfermedad de Alzheimer, Enfermedad de Parkinson, Diabetes, Infartos cardíacos, etc. Para ello se recurre a células troncales obtenidas de embriones en el estado de blastocisto (4º-5º día de desarrollo), con la consiguiente destrucción de los embriones o de tejidos adultos (médula ósea, cordón umbilical, etc.). Inglaterra aprobó recientemente la clonación terapéutica y en nuestro país, ella está en pleno debate en el Parlamento. Desde la perspectiva bioética, la pregunta fundamental relacionada con aquello que la tecnología ofrece, se refiere a si ¿es éticamente lícito realizarlo?
En este taller se debatirá acerca de los hallazgos científicos y bioéticos relacionados con la clonación humana con fines terapéuticos, desde una perspectiva pluralista.

MESA REDONDA-SOCIEDAD DE BOTÁNICA DE CHILE

BOSQUES NATIVOS DE CHILE: ¿Es posible intervenir con fines madereros?

Coordinador: L. Cavieres

ANÁLISIS HISTÓRICO Y PERSPECTIVAS PARA UN USO MADERERO DEL BOSQUE NATIVO DE CHILE CENTRAL: EL CASO DE LA VII REGIÓN (Historical analyses and perspectives for a timber use of the native forests of Central Chile: the case of VII Region). San Martín, J. M. Aguilera y M. Vázques, Universidad de Talca y Corporación Nacional Forestal, VII Región.

El Bosque Nativo ha tenido un importante protagonismo en diferentes actores vinculados con el uso, la ecología, la conservación y el turismo.
La VII Región incluye bosques nativos que difieren en su composición, estructura, posición espacial, superficie y estados de desarrollo y de conservación. Estos bosques, históricamente, dieron espacio a la agricultura y ganadería con un uso para madera y biocombustible. Entre las especies aprovechadas estuvieron Austrocedrus chilensis, Nothofagus alpina, N. glauca, N. obliqua y N. alessandrii.
Prospecciones recientes muestran bondades físico-mecánicas de la madera de N. glauca, por ejemplo, sugiriendo nuevas propuestas para uso en construcción. Los bosques que, actualmente, ofrecen una perspectiva extractiva son aquellos que, dinámicamente, representan una condición primaria y secundaria adulta. Para ello con el Proyecto de Conservación y Manejo Sustentable del Bosque Nativo (PCMSBN) se busca implementar prácticas de manejo silvícolas principalmente en especies como N. glauca y N. obliqua.
La superficie y biovolumen reducido del bosque nativo adulto de la VII Región no contribuye en niveles económico-sociales significativos. Por el contrario, requiere de esfuerzos para su recuperación así como incentivos para la conservación y protección.
Agradecimientos a la Universidad de Talca y a la Corporación Nacional Forestal, VII Región.

MANEJO SILVÍCOLA CON FINES MADEREROS Y DESARROLLO POSTERIOR DE LOS BOSQUES DE LENGA EN MAGALLANES. (Silvicultural management for timber production and following growth of lenga forests in Magallanes). Schmidt, H. (Fac. de Ciencias Forestales, Universidad de Chile)

Resumen: El sistema silvicultural que se aplica en los bosques de lenga en Magallanes es el de cortas de protección. Desde 1992 a la fecha se han intervenido del orden de 30.000 ha con este sistema. En la presentación se muestra en qué consiste un manejo silvicultural y el desarrollo de los bosques 8 años después de la intervención.
La evaluación se hizo en 2.860 ha de bosques cosechados en el año 1994 por las principales empresas forestales de la región. En ellos se midieron las existencias antes de la intervención, la magnitud de la cosecha, las pérdidas causadas por viento, el crecimiento de los árboles en el dosel de protección y el establecimiento y el crecimiento de la regeneración.
En promedio las existencias en los bosques antes de la intervención fue de 620 m3/ha y la intensidad de la cosecha de 46%. En el dosel de protección se perdieron 110 m3/ha por viento. El crecimiento en diámetro de los árboles en el dosel de protección aumentó de 1,8 - 2,3 mm/año antes de la intervención, a 2,4 - 4,0 mm/año después.
La evolución de la regeneración, en general fue favorable. La densidad fluctuó entre 100.000 a 600.000 plantas/ha y la altura de la regeneración dominante en los bosques cosechados en el continente oscila entre 56 y 110 cm. En Tierra del Fuego la altura de las plantas fue de solo 21 cm, debido al ramoneo de los guanacos.
Palabras clave: lenga, Nothofagus pumilio, cortas de protección, regeneración, Magallanes.

MESA REDONDA-Chile hacia el Desarrollo Tecnológico

Coordinador: Juan Segura Aguilar, Director, Sociedad de Biología de Chile.

Objetivos: El directorio de la Sociedad de Biología de Chile comprendiendo el crucial trance histórico en que se encuentra nuestro país, de asumir la enorme tarea que implica pasar de ser un país exportador de bienes naturales a un país productor y exportador de tecnología, hemos decidido realizar una mesa redonda, discusión titulada "Chile hacia el desarrollo tecnológico" dentro de la reunión anual de la Sociedad de Biología de Chile. El objetivo de esta mesa redonda es abrir una discusión en la sociedad chilena acerca de la estrategia que nuestro país debe asumir para lograr el enorme desafío que implica pasar a ser un país productor de tecnología. En esta mesa redonda hemos invitado a los principales actores que representan nuestra sociedad.
Temas de discusión: A) El papel de la industria chilena en el desarrollo tecnológico; (B) El papel del Estado en el desarrollo tecnológico.
Invitados:
• Roberto Hojman, CONICYT
• Sergio Lavandero, Presidente del Consejo de FONDECYT
• Mariano Ruiz-Esquide Jara, Senador

Incorporaciones

Incorporaciones I

Azúcares y actividad SPS en Deschampsia antarctica Zúñiga-Feest, A1., Inostroza, P1., Vega, M.3, Bravo, L.A.2, Corcuera, L.J.2
(1)Instituto de Botánica, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile
(2)Departamento de Botánica, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción.
(3) Departamento de Bromatología, Facultad de Farmacia, Universidad de Concepción

Deschampsia antarctica, la única Poaceae nativa de la Antártica Marítima, tolera el congelamiento. Durante el verano, acumula sacarosa(S) en sus hojas (hasta 36% de su peso seco). El mecanismo de acumulación de esta inusual concentración es desconocido. Una alta actividad de sacarosa fosfato sintasa (SPS) (EC: 2.4.1.14), podría explicar esta acumulación. Se estudió el efecto de tres largos de día: corto (SD) (8/16 horas luz/oscuridad), medio (MD) (16/8 h) y largo (LD) (21/3 h) y dos temperaturas, en la actividad SPS y en la concentración de azúcares en D. antarctica. Se comparó su efecto en otras especies de Poacaeae, cultivadas (trigo, avena y cebada) y silvestres (D. caespitosa y D. beringensis). La mayor concentración de azúcares solubles totales (TTS) y S se encontró en el cuello y en las hojas de D. antarctica aclimatadas en LD. TSS, S y actividad SPS fueron mayores en plantas aclimatadas de D. antarctica. La razón S/TSS fue mayor en las especies de Deschampsia. La actividad SPS y el contenido de sacarosa se correlacionaron en hojas de D. antarctica aclimatadas en LD. Posiblemente, la capacidad de aprovechar las condiciones ambientales durante el verano para la síntesis de carbohidratos, sea clave para la sobrevivencia de D. antarctica.
Fondecyt-2000136, Mecesup-UCO-0214

ACUMULACIÓN DE DESHIDRINAS EN RESPUESTA A ESTRÉS ABIÓTICO EN DESCHAMPSIA ANTARCTICA DESV. (Accumulation of dehydrin transcripts and proteins in response to abiotic stress in Deschampsia antarctica Desv.) 1Olave-Concha N, 2Ruiz-Lara S, 1Muñoz X, 1Bravo LA y 1Corcuera LJ. 1Depto. Botánica. Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas. Universidad de Concepción. 2Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología. Universidad de Talca.

Deschampsia antarctica, la única gramínea nativa de la Antártida Marítima, crece expuesta a baja temperatura, al aerosol marino y a vientos desecantes. Se postula que estas plantas responden con la inducción de los genes lea, que codifican para una familia de proteínas denominadas deshidrinas. El análisis Southern mostró más de cuatro bandas, sugiriendo que D. antarctica tiene varios genes para deshidrinas. D. antarctica fue sometida a tratamientos que inducen la acumulación de deshidrinas. Una sonda homóloga para deshidrinas permitió la detección de dos transcritos, uno de 1,0 kb en plantas tratadas con ABA y uno de 1,6 kb en plantas bajo estrés osmótico y salino, sugiriendo que tendría vías de regulación dependiente e independiente de ABA. Un anticuerpo antideshidrina detectó 8 proteínas de 58, 57, 55, 53, 48, 38, 30 y 27 kDa. Su cinética de acumulación indicaría la existencia de una regulación diferencial de ellas. Ensayos de inmunolocalización mostraron que se encuentran asociadas a los haces vasculares y epidermis, tejidos preferenciales de nucleación del hielo. La acumulación de deshidrinas sería uno de los mecanismos que le permiten sobrevivir a la D. antarctica en la Antártida Marítima.
Agradecimientos: Beca CONICYT, FODECYT 2000144.

NODRIZAS NATIVAS FACILITANDO ESPECIES INTRODUCIDAS: Taraxacum officinale Y SU ASOCIACIÓN A PLANTAS EN COJIN EN LOS ANDES DE CHILE CENTRAL. (Native nurses facilitating alien species: Taraxacum officinale and its association with cushion plants in the Andes of central Chile). Molina-Montenegro, M.A. & Cavieres, L.A. ECOBIOSIS, Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Casilla 160-C, Chile.

Se ha postulado que en ambientes de alta-montaña la invasión de especies exóticas sería un proceso raro debido a la rigurosidad del ambiente. En este tipo de ambientes, la presencia de especies nodrizas que generan condiciones ambientales menos rigurosas que su entorno son claves para el establecimiento de las especies nativas. No obstante, estas modificaciones también podrían favorecer el establecimiento de especies introducidas. En este estudio evaluamos si las modificaciones microclimáticas que producen las plantas en cojín en un ambiente de alta-montaña, favorecerían el establecimiento y desempeño ecofisiológico de la especie introducida Taraxacum officinale. Bajo las plantas en cojín los suelos tienen mayor disponibilidad de agua y nutrientes que los espacios abiertos y presentan una menor oscilación térmica. Los individuos de T. officinale que crecen sobre los cojines presentaron una mayor tasa de fotosíntesis y mayor eficiencia del fotosistema II, mayor sobrevivencia, y una mayor producción de semillas. Las plantas en cojín al proporcionar condiciones microclimáticas más benignas que su entorno permiten que los individuos de una especie introducida presenten un menor grado de estrés, manteniendo altas tasas de fotosíntesis y una producción de semillas mayor que en los espacios abiertos, lo cual facilita el proceso de invasión en zonas de alta montaña.
Fondecyt 1030821

Paleobotánica del Triásico superior del río Biobío, Chile. (Upper Triassic palaeobotany of Biobío river, Chile). Leppe, M. Departamento de Botánica, Facultad de Ciencias Naturales, Universidad de Concepción. Patrocinio: Lohengrin Cavieres.

Las floras triásicas chilenas pertenecen al Gondwana Extratropical sur-weste, al estar situado al sur de la paleolatitud de los 30º S durante el Triásico. La mayor parte de los afloramientos triásicos chilenos pertenecen al lapso Cárnico-Rético, pero sobre el 60% de ellos pertenecen al Nórico-Rético (entre 220 y 203±3 millones de años atrás), lo que también los ubica en el rango del Floriano. Al componerse principalmente de depósitos plantíferos florianos, las floras triásicas chilenas se ligan directamente con el tercer evento florístico descrito por Morel, Artabe y Spalletti (2003), y marcan una diferencia sustancial con las floras triásicas argentinas, ya que estas últimas son predominantemente pertenecientes al Cortaderitiano, es decir al rango Ladiniano-Cárnico (entre 233±5 y 220 Ma. atrás).
En la franja de afloramientos triásicos de Chile centro-sur solo se han reconocido elementos pertenecientes al rango Cárnico-Rético, pero el presente trabajo liga indudablemente a la flora del bajo río Biobío (37º5.95´ S-72º53.53´ W), denominados informalmente como Formación Santa Juana, a una serie de eventos en un contexto sinérgico del oeste argentino. En el Triásico del Biobío se encuentran más de 32 localidades fosilíferas, con una diversidad de 53 especies distribuidas en 9 órdenes, 11 familias y 28 géneros, lo que convierte a la flora de este río en la más diversa del centro-sur chileno.
Agradecimientos: Fondecyt 2010105.

Incorporaciones II

CALCIO Y PROTEÍNA G EN LA SEÑALIZACIÓN HIPERTRÓFICA DEL IGF-1 EN EL CARDIOMIOCITO (Calcium and G protein in the hypertrophic signaling of Igf-1 on cardiac myocytes) Carrasco L, Ibarra C, Chiong M, Albornoz F, Díaz-Araya G, Jaimovich E, Lavandero S. FONDAP- CEMC, Universidad de Chile, Santiago, Chile.

Ca2+ es un segundo mensajero clave para la hipertrofia del cardiomiocito. IGF-1, un péptido prohipertrófico y antiapoptótico, al unirse a su receptor (RIGF) activa múltiples vías transduccionales. Sin embargo, se desconoce si Ca2+ media las acciones del IGF-1 y si RIGF está acoplado a una proteína G en el cardiomiocito.
IGF-1 aumentó el Ca2+i e IP3 en forma rápida y transitoria en cultivo de cardiomiocitos, siendo bloqueados por genisteína (100 µM) y AG 538 (50 µM) inhibidores inespecífico y específico de la tirosina kinasa del RIGF, toxina pertussis (PTX 1 µg/mL), bARK-ct (péptido que secuestra las subunidades bg de proteína G), BAPTA-AM (100 µM, quelante de Ca2+i), U73122 (10 µM, inhibidor de fosfolipasa C) y xestospongina C (100 µM, bloqueador del receptor IP3). PTX, bARK-ct, bAPTA-AM y U73122 bloquearon la activación de ERKs inducida por IGF-1, pero no la activación de PKB. BAPTA-AM, PTX y AG538 inhibieron la hipertrofia inducida por IGF-1, determinada por área celular y niveles de la cadena pesada de la b-miosina.
Se concluye que IGF-1 aumenta los niveles intracelulares de IP3 y Ca2+ , efecto que depende del RIGF acoplado a una proteína Gi/o en el cardiomiocito.
FONDAP 1501005. LC y CI becarios doctorado CONICYT. Beca de apoyo de tesis 2002

PARTICIPACIÓN DE Ca2+ Y CREB EN LA APOPTOSIS INDUCIDA POR ESTRÉS OSMÓTICO (Participation of Ca2+ and CREB in apoptosis induced by osmotic stress). Maldonado C, Vicencio JM, Chiong M, Lavandero S. Facultades Ciencias Químicas y Farmacéuticas & FONDAP CEMC, Universidad de Chile.

La pérdida de cardiomiocitos por apoptosis es importante en distintas patologías cardiacas. El estrés hiperosmótico (EH) induce apoptosis del cardiomiocito, desconociéndose la participación del Ca2+ y del factor transcripcional CREB en este proceso.
Los resultados mostraron que EH aumentó los niveles del Ca2+ intracelular en forma rápida y transitoria en cultivos primarios de cardiomiocitos preincubados con fluo-3AM. Este efecto parcialmente mediado por canales de Ca2+ tipo L, receptores de rianodina y la vía fosfolipasa C (PLC)-IP3-receptor IP3. El EH aumentó la fosforilación de CREB en serina-133, efecto bloqueado por PD098059 (inhibidor MEK1), SB20358 (inhibidor p38-MAPK), pero no por LY294002 (inhibidor PI3-K), CsA (inhibidor de calcineurina), KN62 (inhibidor de CaMKII) o por BAPTA-AM (quelante de Ca2+). EH disminuyó la viabilidad celular, aumentó la activación de caspasas 3 y 9 y la fragmentación del DNA. La sobrexpresión de un dominante negativo de CREB (dnCREB) no alteró la apoptosis inducida con EH. IGF-1 también estimuló la fosforilación de CREB con distinta cinética y magnitud. IGF-1 atenuó la apoptosis inducida por EH, siendo este efecto revertido por dnCREB.
Se concluye que EH aumentó el Ca2+i por movilización desde el exterior y de depósitos intracelulares. CREB participaría en la señalización antiapoptótica del IGF-1 en cardiomiocitos expuestos a EH.
FONDAP 1501005. CM becaria doctorado CONICYT.

NFkB en la apoptosis del cardiomiocito activada por estrés hiperosmótico. NFkB in cardiomyocyte apoptosis induced by hyperosmotic stress. Eisner V, Quiroga Q, Criollo A, Chiong M, Díaz-Araya G, Lavandero S. Facultad Ciencias Químicas y Farmacéuticas y Centro FONDAP Estudios Moleculares de la Célula, Universidad de Chile.

El estrés hiperosmótico (EH) gatilla la apoptosis en cultivos primarios de cardiomiocitos, desconociéndose los factores transcripcionales que median las respuestas de muerte o adaptación. En este trabajo se evaluó el papel del NFkB, un factor transcripcional que sensa el estado redox intracelular, en la apoptosis por EH.
Los resultados mostraron que el EH estimuló la fosforilación IKK, degradación de IkBa, movilización al núcleo de p65 y Rel B, sin modificar la distribución subcelular de p50, p52 y cRel. EH estimuló la unión del NFkB a la secuencia kB y activó al gen reportero NFkB-LUX. La presencia del heterodímero p65 y RelB se demostró por Supershift, coinmunoprecipitación y colocalización. EH generó especies reactivas derivadas del oxígeno (ROS), particularmente OH detectado por EPR. N-acetilcisteína y Trolox bloquearon la degradación de IkBa y la unión de NFkB a kB. La inhibición del NFkB por el péptido SN50 o la sobrexpresión de una forma dominante negativa de IkBa (AdIkBa) disminuyeron los niveles basales de sobrevida del cardiomiocito y potenciaron la apoptosis por EH.
En conclusión, EH activó al NFkB a través de la generación de ROS para prevenir la apoptosis del cardiomiocito.
FONDAP 15010006, FONDECYT 1010246, PG106 UCH, Grant Sociedad Chilena de Cardiología, VE, CQ y AC, son becarios CONICYT.

EFECTOS CONDUCTUALES E HISTOLÓGICOS DE LA ADMINISTRACIÓN ENDONEURAL DE NGF: POSIBLES IMPLICACIONES EN EL DOLOR NEUROPÁTICO (Behavioral and histological effects of endoneurial administration of NGF: possible implications in neuropathic pain) Guido Ruiza,d, Dolores Ceballosb y Josep-E Bañosc,d

a Instituto de Farmacia, Universidad Austral de Chile, Casilla 567, Valdivia, Chile.
b Departamento de Biología Celular, Fisiología e Inmunología, Facultad de Medicina, Universitat Autónoma de Barcelona, 08193-Bellaterra, España.
c Departamento de Ciencias Experimentales y de la Salud, Universitat Pompeu Fabra, 08003 Barcelona, España.
d Departamento de Farmacología, Terapéutica y Toxicología, Facultad de Medicina, Universitat Autònoma de Barcelona, 08193-Bellaterra, España.

Diversos datos vinculan la sobreexpresión de factor de crecimiento neuronal al dolor neuropático. En este estudio investigamos si una administración de NGF (1 a 30 ng) reproduce consecuencias conductuales e histológicas de neuropatías periféricas.
Los animales recibieron una inyección de NGF disuelto en tampón fosfato (0,1 M, pH 7,4/ 0,1% de seroalbúmina). La alodinia mecánica fue medida mediante filamentos de Von Frey, y la hiperalgesia térmica mediante la prueba plantar de Hargreaves. Animales inyectados con 1 y 30 ng de NGF fueron prefundidos por vía transcardíaca y los nervios fueron removidos y procesados para microscopia óptica.
La hiperalgesia térmica se constató los días 3 (-1.93 ± 0.72 s) y 5 (-1.93 ± 0.54 s) posinyección de 30 ng NGF (n=12, p< 0.05). Ninguna de las dosis de NGF produjo alodinia mecánica. El día 1 el NGF produjo demielinización de fibras en el sitio de inyección. A partir del día 1, se observaron grupos de pequeños axones encerrados en una célula de Schwann y asociados con fibroblastos, revelando sprouting axonal. Tanto la hiperalgesia térmica como la demielinización-sprouting inducidos por el NGF fueron dosis dependiente (1-30 ng) y el curso temporal de ambos efectos fue similar. La inyección de vehículo no produjo efectos conductuales ni histológicos.
Estos resultados indican que la sobreexpresión de NGF puede inducir sprouting y gatillar el desarrollo de hiperalgesia térmica, pero no de alodinia mecánica, en estados de dolor neuropático periférico.

Incorporaciones III

ESTRUCTURA GENÉTICA POBLACIONAL DEL ASCIDIA PYURA PRAEPUTIALIS (HELLER, 1878) DISTRIBUIDO EN ANTOFAGASTA, AUSTRALIA CONTINENTAL Y TASMANIA BASADO EN ALOENZIMAS Y RFLP. Population genetic structure in ascidian Pyura praeputialis (Heller, 1878) distributed in Antofagasta, Australia and Tasman Island using allozymes and RFLP. Astorga M1., Guiñez R2. Castilla JC2. 1Instituto de Acuicultura. Facultad de Pesquerías y Oceanografía. Universidad Austral de Chile. Puerto Montt. 2Departamento de Ecología. Facultad de Ciencias Biológicas. P. Universidad Católica de Chile. Santiago. Chile.

La ascidia Pyura praeputialis distribuida en Australia, Tasmania y en la Bahía de Antofagasta en Chile correspondería a una especie invasora en la costa chilena, lo cual ha sido demostrado mediante secuenciación de Citocromo Oxidasa I de ADN mitocondrial. Para establecer la estructura genética poblacional de esta especie de amplia distribución se utilizaron dos tipos de marcadores: aloenzimas y fragmentos de restricción de la región ITS de ADN ribosomal. El análisis aloenzimático no mostró estructuración genética poblacional dentro de las poblaciones en Chile y Australia, como tampoco al comparar ambas localidades. Los valores de Fst confirman la ausencia de estructuración poblacional. Los resultados permiten establecer que el flujo génico dentro del rango de distribución de cada costa es alto. No obstante, el análisis de aislamiento por distancia muestra diferenciación entre localidades más distantes dentro de la costa australiana. El análisis de RFLP confirma una ausencia de estructuración poblacional dentro de la bahía de Antofagasta en Chile y Australia continental. Tampoco se observó estructura poblacional entre las localidades de Chile y Australia continental. Sin embargo, la localidad de Hobart en la isla de Tasmania presenta alta estructuración poblacional con las localidades de Australia continental y Chile. Estos resultados, confirman el hecho que la colonización de P. praeputialis corresponde a un evento reciente desde Australia continental hacia las costas de Chile. Además, permiten descartar la localidad de Tasmania como población fuente para la fundación de la nueva población en Chile. La dispersión natural de individuos desde Australia continental hacia la isla de Tasmania en un tiempo evolutivo, con actual ausencia de flujo génico, podría explicar la diferenciación observada.
Se agradece a: FONDAP-FONDECYT 1501-0001 PUC (Proyecto-6) y DID-UACH

PATRÓN MACROECOLÓGICO Y EVOLUCIÓN DEL TAMAÑO CORPORAL Y LA DISTRIBUCIÓN EN EL GÉNERO Trachurus (PERCIFORMES: CARANGIDAE): MÉTODO COMPARATIVO-FILOGENÉTICO EN UNA APROXIMACIÓN BAYESIANA (Macroecological pattern and evolution of the body size and distribution in the genus Trachurus (Perciformes: Carangidae): phylogenetic-comparative method in a Bayesian approach) Hernández, C.E.1, Cárdenas, L.1, Poulin, E.1,2, Marquet, P.1 & Ojeda, F.P.1 1-CASEB, P. Universidad Católica de Chile, Casilla 114-D-Santiago. 2-Departamento de Ciencias Ecológicas, Universidad de Chile, Casilla 653-Santiago.

Entre los patrones macroecológicos posibles de estudiar con el método comparativo está la relación rango de distribución-tamaño corporal. No obstante, la investigación de evolución de rasgos no está libre de la incerteza del árbol filogenético. En el presente estudio usando como modelo el género Trachurus, se evaluó a través de aproximaciones de aleatorización de los datos la existencia y la forma del patrón macroecológico, y con una aproximación Bayesiana con Cadenas de Markov y Monte Carlo los efectos de los procesos macroevolutivos y la incerteza filogenética sobre el patrón. Los resultados sustentan una relación positiva tamaño corporal-rango batimétrico y la presencia de un rango geográfico mínimo viable. Las variables tienen señal filogenética óptima, lo cual sustenta que su cambio depende de los procesos macroevolutivos. En las variables existe mayor probabilidad de evolución gradual. Aunque el cambio del rango de distribución no es constante, observándose mayor probabilidad radiación adaptativa en el rango latitudinal y adaptación especie especifica en el rango batimétrico. Se observa una alta probabilidad de cambio evolutivo correlacionado rango de distribución-tamaño corporal, y se propone un modelo evolutivo teórico para el origen del patrón.

HOMOGENIZACIÓN/DIFERENCIACI ÓN FLORÍSTICA EN UN SISTEMA SUBREGIONAL DE ISLAS BIOGEOGRÁFICAS: PATRONES EN LA INTRODUCCIÓN DE PLANTAS EN CHILE (Floristic homogenization and diferentiation in a sub-regional system of biogeographic islands: patterns in the plant introduction in Chile) S.A. Castro, J.A. Figueroa & F.M. Jaksic. Pontificia Universidad Católica de Chile.

La ruptura de barreras geográficas y relocalización de especies a nivel global están modificando los patrones de distribución biogeográfica, lo que tendría como consecuencia la pérdida de la singularidad biológica (o banalización) y homogenización de la biota terrestre. Sin embargo, escasa evidencia cuantitativa ha sido obtenida respecto del proceso de homogenización biótica a escalas biogeográficas. En este estudio se analizó uno de los componentes de la homogenización biótica: la adición de flora exótica en Chile. Luego de conformar una base de datos actualizada y comparable para la distribución de plantas naturalizadas en Chile continental e islas oceánicas, estudiamos la disminución del endemismo regional y el nivel de similitud composicional de regiones e islas. Los resultados indican que si bien la flora exótica se concentra principalmente en la porción central del territorio continental, la densidad de especies por unidad de área es significativamente mayor en las islas oceánicas que en el continente. Respecto del nivel de endemismo, es posible reconocer que las islas oceánicas han experimentado una disminución porcentual mucho mayor que las regiones continentales. Finalmente, la similitud composicional de las regiones e islas oceánicas de Chile indica que las regiones estudiadas muestran patrones de diferenciación y homogenización a la vez. En relación a este último punto, se propone que los mecanismos causales estarían asociados principalmente a los patrones históricos de colonización y uso de suelo por parte de la población humana, más que al establecimiento y extinción diferencial, como ha sido propuesto recientemente.
Agradecimientos: A.W. Mellon Foundation.

Caracterización molecular de un micovirus de RNA de doble hebra que infecta al hongo fitopatógeno Botrytis cinerea. Cottet, L., Potgieter*, C., Castro, M., Morales, A., Ortiz, S. and Castillo, A. Laboratorio de Virología de Hongos, Departamento de Biología, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile, Casilla 40, Correo 33, Santiago, CHILE. E-mail: acastill@lauca.usach.cl
* Biochemistry Division, Onderstepoort Veterinary Institute, Onderstepoort, 0110 South Africa.

Botrytis cinerea CCg378 posee un micovirus icosaédrico (BcV-1) de 32 nm de diámetro cuyo genoma está constuido por dos moléculas de RNA de doble hebra (dsRNA) de idéntica migración electroforética, pero de distinta secuencia nucleotídica. El dsRNA-1 tiene un tamaño de 2199 pares de bases (pb), mientras que el dsRNA-2 contiene 2219 pb. Se encontró un potencial marco de lectura abierto (ORF) significativo en la hebra codificante de cada segmento; en el dsRNA-1 el ORF generaría un polipéptido de 487 residuos de aminoácidos (desde el nucleótido 104 al 1567; con una masa molecular de 56 kDa) que presenta similitud con una replicasa viral caracterizada en Euprosterna elaeasa, mientras que en el dsRNA-2 codificaría para un polipéptido de 634 residuos aminoacídicos (desde el nucleótido 114 al 2018; con una masa molecular de 70 kDa) que muestra alta similitud con la proteína de la cápside de los micovirus que infectan a Atkinsonella hypoxylon y Fusarium poae. Las dos moléculas de dsRNA poseen una región no traducible (UTR) en ambos extremos de la hebra codificante. En el extremo 3' se encontró una estructura de horquilla, que presenta alta similitud en forma y secuencia con una descrita para el virus L-A que infecta a Saccharomyces cerevisiae y que está involucrada en el proceso de replicación de este. Mientras que en el extremo 5', el UTR (de alrededor de 100 pb) presenta alta similitud entre ambos dsRNAs y posee secuencias repetidas invertidas, capaces de formar estructuras secundarias, que podrían estar involucradas en el proceso de traducción. Los resultados sugieren fuertemente que el virus BcV-1 corresponde a un nuevo miembro de la familia Partitiviridae.
Financiado por FONDECYT 1000077 y DICYT-USACH.

 

EL GEN PARÁLOGO vca1008 ACTÚA COMO FACTOR DE VIRULENCIA DE Vibrio cholerae (The ompU paralogue vca1008 is required for virulence of Vibrio cholerae) Osorio C.G.,1 Martínez-Wilson H.,2 and Camilli A. 2Tufts University Medical School, Tufts University, Boston, Massachusetts 02111,2 y Programa de Microbiología y Micología, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Santiago, Chile1

Para identificar factores de virulencia de V. cholerae que fueran relevantes in vivo, decidimos utilizar la técnica denominada RIVET (recombination-based in vivo expression technology). Para esto, construimos una librería transcripcional genómica de este microorganismo, usando como gen reportero una recombinasa sitio específica denominada TnpR y una cepa de V. cholerae previamente modificada, conteniendo en su genoma el casete genético: res-neo-sacB-res. Esta librería fue inoculada en ratones CD-1 de 5 días de edad, recuperando después de 24 h de infección solo las bacterias que habían colonizado el intestino delgado. Por medio de esta técnica, logramos identificar 40 genes que se inducen selectivamente in vivo y que se encuentran reprimidos in vitro. Uno de estos genes, denominado vca1008, es homólogo a otra porinas bacterianas. Decidimos construir cepas mutantes de V. cholerae para dicho gen y para otras porinas estructuralmente relacionadas (ompU, ompT y vc0972) y estudiar su comportamiento en experimentos de competencia y su crecimiento in vitro. Hicimos además experimentos de complementación para confirmar nuestros hallazgos. Nuestros resultados indican que vca1008 es un factor de virulencia de V. cholerae en ratones neonatos CD-1, pues cepas mutantes para dicho gen están atenuadas 40 veces en relación a su cepa silvestre.
Agradecimientos: Pew Charitable Trust fellowship 2001-2002

Comunicaciones orales

Evolución y Sistemática

UNA APROXIMACIÓN MOLECULAR A LAS RELACIONES FILOGENÉTICAS DE LOS LEPTODACTÍLIDOS CHILENOS (A molecular approach to the phylogenetic relationships of Chilean leptodactylids) Correa, C.1, Méndez, M.1, Núñez, J.2 & Veloso, A.3 1.- Laboratorio de Bioinformática y Expresión Génica, INTA, Universidad de Chile; 2.- Instituto de Zoología, Universidad Austral de Chile; 3.- Laboratorio de Vertebrados, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

La familia Leptodactylidae es el grupo de anfibios más diverso en Chile e incluye 11 géneros y 42 especies. Las hipótesis filogenéticas propuestas para este grupo, basadas principalmente en caracteres osteológicos, establecen que los leptodactílidos chilenos pertenecientes a la subfamilia Telmatobiinae (39 especies), constituyen un grupo basal y monofilético dentro de la familia. Hasta la fecha las relaciones filogenéticas de los telmatobinos no han sido estudiadas utilizando secuencias de DNA. Nuestro estudio se basó en el análisis de secuencias de los genes mitocondriales RNA 12S y RNA 16S para 22 leptodactílidos pertenecientes a diez géneros presentes en Chile. Para estudiar las relaciones de estas especies con respecto a otros grupos dentro de la familia, se incluyeron secuencias disponibles en GenBank de representantes de las cuatro subfamilias actualmente reconocidas: Ceratophrynae, Hylodinae, Leptodactylinae y Telmatobiinae. Para las reconstrucciones filogenéticas se aplicaron los métodos de máxima parsimonia, máxima verosimilitud e inferencia bayesiana. Nuestros resultados sugieren que los telmatobinos no ocupan una posición basal dentro de la filogenia de la familia Leptodactylidae y que no constituyen un grupo monofilético. Se discuten estos resultados con relación a las proposiciones sistemáticas basadas en otros tipos de caracteres.

SISTEMÁTICA Y FILOGEOGRAFÍA DE Abrothrix olivaceus EN CHILE (Systematics and phylogeography of Abrothrix olivaceus in Chile). Rodríguez-Serrano, E. & Palma, R. E. Centro de Estudios Avanzados en Ecología y Biodiversidad, y Laboratorio de Biología Evolutiva, Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile, Casilla 114-D, Santiago.

Recientes estudios de la filogenia de los roedores Sigmodontinos han confirmado el estatus de tribu para todas aquellas formas surandinas antiguamente adscritas al género Akodon. Dentro de este "Clado Andino" encontramos a Abrothrix olivaceus roedor ampliamente distribuido en Chile desde la Primera Región hasta la Duodécima. La literatura tradicional ha reconocido cinco subespecies en base a sutiles diferencias morfológicas y a distribución geográfica. Para evaluar la exclusividad de A. olivaceus particularmente en el área geográfica del Norte Grande, así como la filogeografía a lo largo de su distribución se secuenció la Región Hipervariable I de la región control del ADN mitocondrial. Estos datos fueron analizados filogenética y poblacionalmente. Los resultados sugieren que Abrothrix olivaceus no está presente en el Norte Grande, sino desde la Tercera Región hacia el sur. A. olivaceus aparece como una unidad taxonómica bien estructurada validándose molecularmente la ocurrencia de a lo menos dos subespecies.
Financiamiento: FONDECYT 1030488; FONDECYT-FONDAP-CASEB

HISTORIA EVOLUTIVA DE Oligoryzomys longicaudatus (RODENTIA: SIGMODONTINAE) EN EL SUR DE SUDAMERICA. (Evolutionary history of Oligoryzomys longicaudatus (Rodentia: Sigmodontinae) in southern South America. Boric-Barguetto, D.1, Torres-Pérez, F.1,2 & Palma R.E.1. 1Centro de Estudios Avanzados en Ecología y Biodiversidad y Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile, Casilla 114-D, Santiago. 2Departamento de Zoología, Universidad de Concepción, Casilla 160-C, Concepción. E-mail:dboric@uc.cl.

Oligoryzomys longicaudatus es un roedor sigmodontino con una amplia distribución en Chile y Sur de Argentina. Características ecológicas tales como una alta vagilidad y amplio ámbito hogar, así como epidemiológicas constituyendo el principal reservorio de Andes hantavirus, hacen de esta una especie emblemática dentro de los roedores del Cono Sur. Se realizó un análisis filogeográfico secuenciando 972 pb de la región control del mtDNA para 171 individuos de 27 localidades de Chile y Argentina. A través de análisis Bayesiano se observa que las localidades australes serían las más basales, sin embargo no se observa un claro patrón latitudinal norte-sur. Los análisis poblacionales muestran una ausencia de estructuramiento, alto flujo génico, y una falta de asociación entre los haplotipos y la distribución geográfica. Estos resultados sustentan estudios previos demostrando que una sola especie está distribuida desde la III hasta la XII Región en Chile, ampliando así su rango de distribución en el extremo sur. Los análisis de "mismatch distribution", Tajima y Fu & Li, sugieren que esta especie se encontraría en expansión, lo que habría ocurrido durante el Pleistoceno.
Financiamiento: FONDECYT 1030488; FONDECYT-FONDAP-CASEB; NIH-ICIDR 1 U19 AI45452-01

ANÁLISIS FILOGEOGRÁFICO EN EL CAMARÓN DE RIO Samastacus spinifrons (DECAPODA: PARASTACIDAE) EN CHILOÉ INSULAR Y CHILE CONTINENTAL. (Phylogeographic analysis for the freshwater crayfish Samastacus spinifrons in the Chiloé island and continental Chile). Castro-del Río, V., Palma, R.E. Centro de Estudios Avanzados en Ecología y Biodiversidad, y Laboratorio de Biología Evolutiva, Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile, Casilla 114-D, Santiago.

El camarón de río (Samastacus spinifrons) es una de las cuatro especies de astácidos presentes en Chile. Su distribución se limita a los ríos y lagos entre los 32º y 46ºS en Chile continental y la isla de Chiloé. Con el objetivo de evaluar si la separación geográfica reciente entre Chiloé y Chile continental da cuenta de algún grado de divergencia genética a nivel nucleotídico entre poblaciones de S. spinifrons, se secuenciaron 500 pb del gen mitocondrial 16S. Se realizaron análisis filogenéticos y filogeográficos para evaluar el grado de divergencia genética a nivel nucleotídico entre poblaciones de la isla de Chiloé y el continente. Resultados preliminares no son muy evidentes en demostrar una separación entre las poblaciones insulares y continentales. Sin embargo, poblaciones de camarones más septentrionales evidencian una clara separación de las formas de la Isla de Chiloé, sugiriendo aislamiento por distancia.
Financiamiento: FONDECYT 1030488; FONDECYT-FONDAP-CASEB; Rolf Eichler Meier.

VARIABILIDAD GENÉTICA EN POBLACIONES NATURALES DE ELEGINOPS MACLOVINUS (RÓBALO) PROVENIENTES DE LA 8a REGIÓN (CHILE) MEDIANTE MARCADORES MOLECULARES. (Genetic variability in wild populations of Eleginops maclovinus (róbalo) from 8a region (Chile) by molecular markers). Reyes, F.1; Jara, F.1; Vera, J.1, Hernández, P.1, González, F2. & C. Baeza1. 1Fac. de Cs. Naturales y Oceanográficas. Universidad de Concepción. Chile. 2Departamento de Biología Celular. Fac. de Cs. Biológicas. Universidad de Concepción. Chile.

El Róbalo (E. maclovinus) es una especie de creciente interés económico en el ámbito de la Acuicultura, por este motivo resulta necesario conocer los aspectos genéticos de la especie con el fin de comprender los principios biológicos que subyacen a esta como recurso.
Se evalúan los niveles de variabilidad genética en Poblaciones Naturales de E. maclovinus a través del Polimorfismo detectado por Proteínas (Isoenzimas y Proteína Total), Microsatélites CmrDe4 y CmrDe9 de Dissotichus eleginoides amplificados en Róbalo exitosamente y el Intrón 4/5 del gen de Calmodulina.
En base a evidencias genéticas descritas para peces marinos y aquellas entregadas por el polimorfismo detectado por isoenzimas se espera que no existan diferencias significativas en la composición genética de las poblaciones en estudio.
Se determinó el polimorfismo mediante el uso de isoenzimas y se evaluará este mismo a través de otros marcadores moleculares.
Se agradece al Laboratorio de Genética por el apoyo técnico y profesional.

VARIABILIDAD GENÉTICA EN POBLACIONES DE Diplodon chilensis chilensis GRAY 1828 (HYRIIDAE, BIVALVIA) ASOCIADA A DIFERENTES CUERPOS DE AGUA. Genetic variability in populations of Diplodon chilensis chilensis Gray 1828 (Hyriidae, Bivalvia) associated to different water bodies. Fuentealba, C. González, F. Lab Genética. Depto Biología Celular. Fac Ciencias Biológicas. U de Concepción. Casilla 160-C. Concepción cfuentea@udec.cl, fgonzale@udec.cl

Los bivalvos dulceacuícolas son uno de los componentes principales en ecosistemas poco intervenidos. La eficiente capacidad filtradora les permite ser objeto de estudios destinados al mejoramiento y depuración de las aguas, lo que la hace un elemento atractivo por su potencial papel mitigador en procesos de eutroficación.
En el presente trabajo mediante técnicas electroforéticas se determinan los niveles de variabilidad genética en poblaciones de Diplodon chilensis chilensis asociados con el posible grado de impacto antrópico. Las poblaciones lénticas analizadas corresponden al lago Lleu-Lleu y las lagunas La Posada y Chica de San Pedro, esta última como una de las más intervenidas. Los resultados obtenidos de los análisis morfométricos revelan diferencias significativas entre las poblaciones con valores de prueba P<0.05.
Con respecto al análisis genético se analizaron de forma preliminar 8 sistemas enzimáticos, de los cuales tres resolvieron para 7 loci presuntivos con valores de heterocigosidad (0.24) y polimorfismo (0.85) con desequilibrio Hardy Weinberg para algunos de los loci, evidenciando significativas diferencias entre las poblaciones. Los resultados son discutidos en términos de conservación.
Financiamiento: DIUC 97.031.075-1.0.Eq-1999.Grupo Inv 03-C101

FILOGENIA DE LAS ESPECIES CHILENAS DE SOPHORA L. (FABACEAE), BASADAS EN LOS PATRONES DE DISTRIBUCIÓN DE ALCALOIDES Y LOCI ISOENZIMÁTICOS. Phylogeny of Chilean species of Sophora L. (Fabaceae) based on alcaloid distribution patterns and isozyme loci. 1Ruiz, E., 1Hoeneisen, M., 2González, F., 3Crawford, D., 1Fuentes, G., 1Negritto, M.A. 1Departamento de Botánica, Universidad de Concepción. 2University of Kansas, Lawrence, USA. 3University of Vienna, Austria. 4Departamento de Biología Molecular, Universidad de Concepción.

Los patrones de distribución de 12 alcaloides y la distancia genética de Nei, basados en 12 loci isoenzimáticos fueron usados como caracteres para determinar las relaciones filogenéticas entre las especies chilenas de Sophora L. (Fabaceae). Con los alcaloides aislados se realizó un análisis de parsimonia usando el PAUP 4.0. y considerando a S. linearifolia Griseb. de Argentina como outgroup. La distancia genética de Nei y el fenograma se obtuvieron con el programa Tools For Population Genetic Analyses. Los resultados sugieren que S. cassioides de Chile continental es la especie más estrechamente relacionada a las endémicas S. fernandeziana y S. masafuerana de las islas Juan Fernández. Entre las especies chilenas, S. macrocarpa es la más distante pero la más afín a S. linearifolia de Argentina. Probablemente ambas especies de Juan Fernández se hayan originado a través de un evento de colonización a partir de un ancestro tipo S. cassioides. Además los resultados apoyan la hipótesis de considerar a S. macrocarpa como una especie basal dentro de la Sect. Edwardsia.
Agradecimientos: Dirección de Investigación, Universidad de Concepción, Fondecyt 1960822 y 7960015, NSF.

Ecología de Organismos y poblaciones

LOS EFECTOS POTENCIALES DE PESTICIDA Y DEPREDACIÓN EN POBLACIONES DE LITORIA CHLORIS (ANURA: HYLIDAE) EN DOS ALTITUDES: UNA APROXIMACIÓN MATRICIAL (Potential effects of predation and edosulfan exposure in populations of Litoria chloris (ANURA: HYLIDAE) at two altitudes). Yarrow M., Departamento de Ciencias Ecológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, Casilla 653, Santiago Chile. Patrocinado por Ramiro Bustamante

Hace quince años, el problema de las declinaciones y extinciones en las poblaciones de anfibios, a nivel mundial, llamó la atención de la comunidad científica. Solo recientemente se ha hecho el esfuerzo de examinar varios factores en conjunto y sus posibles efectos sinérgicos en poblaciones de anfibios. El trabajo actual examina los efectos de depredación y la contaminación por el pesticida endosulfato en el estado larval de una rana australiana Litoria chloris. Con datos de la literatura se construyeron ocho matrices de Lefkovitch para representar poblaciones sin tratamiento y poblaciones expuestas a depredación, pesticida, y una combinación de ambos en dos alturas. Estas matrices fueron sometidas a un análisis de elasticidad y un análisis de probabilidad de extinción. Se encontró un efecto deletéreo de la combinación de depredación y pesticida. Sin embargo, no se encontró una mayor sensibilidad de L. chloris en grandes alturas como era de esperar. Se discute los resultados en el contexto de la conservación de L. chloris.

Describiendo la estructura interna del rango de distribución de especies usando una aproximación metapoblacional. (Describing the internal structure of species distribution range.) Samaniego, H. y Milne B. T. Biology Department, University of New Mexico, USA; horacio@unm.edu.

La existencia de límites a la distribución de especies es tema de activa investigación en ecología. Matemáticamente, se ha logrado dar una explicación al límite de distribución desde el punto de vista metapoblacional. Sin embargo, no existe una clara noción acerca de las fuerzas que operan dentro del rango de distribución. Y aunque es claro que una conjunción de factores bióticos cómo abióticos son los que definen la existencia de una especie en determinado lugar. Para que estos modelos dejen de ser simples constructos teóricos abstractos y adquieran valor real para el manejo de nuestra flora y fauna, es importante poder dar cuenta, a lo menos desde un punto de vista teórico, de las posibles configuraciones que pueden adquirir la poblaciones dentro de su rango de distribución.
El objetivo del presente trabajo es estudiar la distribución espacial de los parámetros poblacionales dentro del rango de distribución de una especie de córvido (Gymnorhinus cyanocephalus) en Norteamérica. Se propone, entonces, que es posible determinar la importancia relativa de parámetros metapoblacionales como lo son la tasa de colonización, tasa de extinción y habitabilidad para la existencia de la especie. Por consiguiente, en un contexto espacial, es posible determinar qué parametro adquiere mayor relevancia para la supervivencia de la especie en determinada parte de su rango.
(HS agradece NSF biocomplexity grant (DEB-0083422))

EFECTOS DE LA COMPETENCIA Y DEPREDACIÓN SOBRE LOS HÁBITOS DE UNA POBLACIÓN DE LAGARTIJAS EN UNA COMUNIDAD SEMIÁRIDA DEL NORTE-CENTRO DE CHILE. (Effects of Competition and Predation on the Behaviour of a Lizards Population in a Semiarid Community of Northen-Central Chile). Albiñana, J.1,3; Monárdez J.1; Meserve, P. L.2 & Gutiérrez, J. R.1.Universidad de La Serena, La Serena, Chile1; Northern Illinois University, IL, USA2; Universidad Autónoma de Madrid, Madrid, España 3.

En agosto de 2002 se comenzó un experimento con lagartijas englobado dentro de un proyecto a largo plazo que investiga el rol de los factores bióticos y abióticos en una comunidad semiárida desde 1989.
Estudios preliminares indicaron la tendencia a una mayor actividad de C. palluma en parcelas con exclusión de depredadores desde 1989 pero no en Liolaemus. En este estudio, mediante dos tipos de muestreos de abundancia relativa y actividad, se encontró que hay una mayor actividad de C. palluma dentro de las exclusiones debido a que la competencia por las presas más grandes es mucho más débil y es un refugio seguro para evitar ser depredado. Por otro lado, C. palluma puede estar ejerciendo un efecto compensatorio sobre la depredación de Liolaemus ante la ausencia de otros depredadores. Liolaemus reduce su actividad en los periodos de actividad epígea de C. palluma debido, entre otros factores, a la posibilidad tanto de ser depredados por el Teido como al solapamiento en la dieta con el mismo. Por lo tanto, posiblemente Liolaemus varía sus hábitos pasando más tiempo escondidos y restringiendo sus horas de actividad diaria a las horas cuando C. palluma ya volvió a su refugio.
Agradecimientos: FONDECYT 1030225, National Sciences Foundation

DIFERENCIACIÓN MORFOMÉTRICA EN HERMANOS COMPLETOS de Bufo spinulosus (ANURA: BUFONIDAE): EFECTO DE LA DENSIDAD Y LA TEMPERATURA. (Morphometric differentiation in full sibling individuals of B. spinulosus (Anura: Bufonidae): effect of density and temperature.) Soto, E.R.1, Ravanal, E.1 & Méndez, M.A.1,2. 1Departamento de Ciencias Ecológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. 2Laboratorio de Bioestadística, INTA, Universidad de Chile.

Bufo spinulosus es una especie que presenta una notable variación morfológica en función de la localidad. Para esta especie se ha sugerido que esta variación podría relacionarse con diferencias ambientales en los ambientes donde se verifica su desarrollo larval.
A partir de una sola puesta (hermanos completos) proveniente de la localidad de Chusmiza (19º40' S, 69º 10' W) se realizaron experimentos de jardín común. Las larvas fueron sometidas a cuatro densidades (5, 15, 30 y 45 larvas/600 ml) y dos temperaturas (15º y 25ºC). En los individuos postmetamórficos se evaluó la variación en siete caracteres de la morfología externa.
Se observó el menor tamaño corporal en los individuos sometidos a la densidad y la temperatura más alta. El análisis multivariado (MANOVA) de los valores propios (PCA) asociados al tamaño (PC1) evidenció efectos significativos de la densidad y la temperatura en la variación morfológica. En tanto que existieron diferencias significativas asociadas a la forma (valores propios en PC2) solo para la interacción densidad-temperatura. Estos resultados sugieren que los factores abióticos evaluados pueden ser relevantes en inducir variación en morfológica en esta especie.
E. Soto es becario CONICYT.

PLASTICIDAD FENOTÍPICA DE LA MORFOLOGÍA Y ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DIGESTIVA: EFECTOS DE LA TEMPERATURA Y DIETA EN Caudiverbera caudiverbera. (Phenotypic plasticity of morphology and digestive enzimatic activity: effects of temperature and diet in `Caudiverbera caudiverbera). Castañeda, L. E.1, González, S.2, Sabat, P2. y Nespolo, R.F.1 1Instituto de Ecología y Evolución, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile y 2Departamento de Ciencias Fisiológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. LEC CONICYT; RFN FONDECYT 3030032; PB FONDECYT 1010647.

La metamorfosis anfibia es un evento complejo donde se producen drásticas modificaciones morfofuncionales, que finalizan con la generación de un adulto radicalmente diferente al juvenil. La velocidad e intensidad con la que ocurren estas modificaciones dependen de factores ambientales, entre ellos la temperatura y la calidad de la dieta. Pocos estudios se han centrado en la plasticidad fenotípica de la morfología y la función digestiva durante la metamorfosis. Por esta razón, el objetivo de nuestro trabajo fue evaluar la plasticidad fenotípica de la morfología y actividad enzimática digestiva en respuesta a la aclimatación térmica y a la calidad de la dieta. No encontramos efectos de la dieta en ninguna de las variables medidas (i.e., rigidez fisiológica). Individuos aclimatados a calor presentaron una mayor masa corporal y aceleraron la metamorfosis. En calor, la N-aminopetidasa digestiva presentó una actividad menor, comparada con condiciones de frío y de terreno. Resumiendo, individuos aclimatados en frío presentaron un rápido desarrollo metamórfico y mayor actividad enzimática digestiva, lo que estaría asociado con el desempeño óptimo térmico de la población analizada.

La hipótesis del estrés térmico y del costo de cavar en el roedor subterráneo Spalacopus cyanus (Testing the thermal stress and the cost of burrowing hypotheses in the subterranean rodent Spalacopus cyanus). M. J. Carter, L. A. Ebensperger & F. Bozinovic. Caseb & Departamento de Ecología, Pontificia Universidad Católica de Chile.

Los mamíferos subterráneos poseen tasas metabólicas basales (BMR) bajas. Para explicar este fenómeno existen dos hipótesis. La hipótesis del estrés térmico que predice que una menor BMR masa-independiente reduce el sobrecalentamiento en ambientes de alta humedad y baja convección, y la hipótesis del costo de cavar que establece que una menor BMR permitiría compensar el alto gasto de energía durante las actividades de cavado de madrigueras y forrajeo. En este trabajo sometemos a prueba ambas hipótesis a un nivel intraespecífico. Comparamos siete poblaciones del roedor subterráneo Spalacopus cyanus en diferentes localidades geográficas. Medimos BMR y tasa metabólica durante las actividades de cavado (DMR). Los resultados no apoyaron ni la hipótesis de estrés térmico como tampoco la del costo de cavar. Los individuos fueron capturados en hábitats con climas y condiciones del suelo muy diferentes, sin embargo exhiben BMR y DMR similares cuando son medidos bajo condiciones similares. Tal patrón podría estar relacionado con el origen andino de las poblaciones de S. cyanus.
FONDAP 1501-0001

EFECTO DEL PASO POR EL TRACTO DIGESTIVO DE LA LAGARTIJA LIOLAEMUS BELLII (TROPIDURIDAE) SOBRE LA CUBIERTA SEMINAL DE BERBERIS EMPETRIFOLIA (BERBERIDACEAE) (Gut passage effect of the lizard Liolaemus bellii on seed coats of Berberis empetrifolia) 1Celedón-Neghme, C.L., 1De la Barrera, S. E., 2Negritto, M. A. & 1Victoriano, P. F 1Depto. de Zoología, 2Depto. de Botánica, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción, casilla 160-c, Concepción, Chile. Proy. DIUC203.113.064 -1.0 cotiledonn@yahoo.es

La dispersión de semillas mediada por animales tiene lugar a través de variados mecanismos, dentro de los cuales se encuentra la endozoocoria. La lagartija Liolalemus bellii, que habita en los Andes de Chile Central, ingiere las bayas, frutos carnosos de "zarcilla" (Berberis empetrifolia), dispersando así sus semillas. Con el fin de conocer el efecto del paso por el intestino sobre la cubierta seminal, se realizó un estudio anatómico comparativo entre la testa de las semillas extraídas directamente de frutos de la planta madre (CT) y de aquellas que habían sido ingeridas (TD) por las lagartijas. Para esto, en ambos tratamientos se obtuvieron fotografías con microscopio electrónico de barrido (MEB) de la superficie externa de la testa y se realizaron cortes histológicos los que se observaron bajo el microscopio óptico. El estudio reveló diferencias entre los tratamientos (CT y TD), mostrando un efecto abrasivo del paso por el tracto digestivo de la lagartija en la testa de las semillas. Esta abrasión podría facilitar la entrada de agua y el intercambio gaseoso, lo que eventualmente influenciaría la velocidad de germinación de las semillas con importantes consecuencias ecológicas.

 

LA DISPONIBILIDAD DE ALIMENTO EN EL ESTADO ADULTO REVIERTE EL EFECTO DE LA CRIANZA LARVAL SOBRE LA FECUNDIDAD DE Megacerus eulophus (COLEOPTERA: BRUCHIDAE) EN DOS ESPECIES NATIVAS DE Convolvulus (CONVOLVULACEAE). (Food availability in the adult stage reverts the effect of larval rearing on the fecundity of Megacerus eulophus (Coleoptera: Bruchidae) in two native Convolvulus species (Convolvulaceae)). Suárez, L.H.; Gonzales, WL; González-Teuber, M; Acuña, IS y Gianoli, E. ECOBIOSIS, Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Casilla 160-C, Concepción, Chile.

En coleópteros de semilla el hospedante del estado larval afecta la adecuación biológica del adulto a través del tamaño corporal. En especies que se alimentan durante el estado adulto la disponibilidad de alimento podría revertir el efecto del hospedante larval sobre la adecuación biológica. Evaluamos en el coleóptero nativo Megacerus eulophus, el efecto de dos hospedantes (Convolvulus chilensis y C. bonariensis) y la disponibilidad de alimento del adulto (alimento ad-libitum [miel-polen] y no-alimento) sobre tamaño corporal, longevidad y fecundidad. Hembras criadas en C. chilensis tuvieron mayor tamaño que las criadas en C. bonariensis. Estas últimas fueron más longevas y fecundas en ausencia de alimento. El efecto del hospedante sobre longevidad y fecundidad fue revertido por la disponibilidad de alimento, independientemente del tamaño corporal: En condiciones de alimento ad-libitum, hembras criadas en C. chilensis tuvieron mayor longevidad y fecundidad. Se sugiere que en zonas de coexistencia de hospederos, la disponibilidad de polen/néctar podría ejercer un efecto de balance sobre la preferencia de hospederos en M. eulophus, retardando posibles fenómenos de diferenciación.
FONDECYT 1030702.

Ecología Marina y Dulceacuícola

USO DE HÁBITAT DE PECES NATIVOS EN EL RÍO BIOBÍO. (Habitat use of native fish on the Biobío River). Ortiz, N.1, E. Habit2 y A. García3. 1Facultad Ciencias Naturales y Oceanográficas Universidad de Concepción, 2Unidad Sistemas Acuáticos, Centro Eula-Chile, Universidad de Concepción

La zona media del río Biobío se caracteriza por una alta heterogeneidad ambiental en tramos cortos de río, lo que supone una alta riqueza específica si existiera repartición del uso del espacio a microescala. Analizamos la composición y diversidad ictiofaunística en un segmento del hiporitrón del Biobío (UTM zona 18: 5837994.014 N, 731469.274 W), identificando cinco microhábitat someros según sustrato, velocidad, y profundidad, designados como rápido somero, bolón enfangado, poza, arena y fango. Estos fueron muestreados con pesca eléctrica, haciendo al menos 2 réplicas. Los peces fueron clasificados como juveniles o adultos. La abundancia fue estimada mediante Zippin o Seber-Lecren. Los resultados sugieren una repartición del uso del espacio, con asociaciones de peces de ambientes de menor velocidad y sustrato fino (Cheirodon galusdae, Galaxias maculatus, Geotria australis) y otras de ambientes torrentosos (Trichomycterus areolatus). Basilichthys australis, Percichthys trucha y Geotria australis solo están presentes en estado de juveniles. Bullockia maldonadoi muestra segregación, usando parches arenosos. Diplomystes nahuelbutaensis tiende a la segregación entre juveniles y adultos. La mayor diversidad ocurrió en bolones enfangados, y la menor en ambientes de fango utilizados casi exclusivamente por lampreas. Se sugiere la existencia de repartición del espacio, principalmente a nivel interespecífico. Intraespecíficamente, las mayores diferencias ocurren en especies de hábitos pelágicos.

EVALUACIÓN DE LOS RIESGOS AMBIENTALES PARA LA BIOTA BENTÓNICA PRODUCTO DEL USO DEL TEFLUBENZURON, UTILIZANDO EL MÉTODO DE CUOCIENTE. (Evaluation of environmental risks for benthonic biota, product of use of teflubenzuron, using the quotient method) Chiang G.1, Barra, R.1, Montory M.1 & Encina F.2 1Unidad de Investigación de Sistemas Acuáticos, EULA-Chile Centro de Ciencias Ambientales, Universidad de Concepción, Casilla 160-C, Concepción, Chile. 2Escuela de Ciencias Ambientales, Universidad Católica de Temuco, Casilla 16-D, Temuco, Chile.

Los potenciales impactos del uso de un producto químico contra Caligus sp en el cultivo de salmones han sido llevados a cabo en un estudio teórico. Se usaron los resultados de concentraciones obtenidas anteriormente de modelos multicompartimentales basados en el enfoque de fugacidad, para Teflubenzuron, un inhibidor de la síntesis de quitina. Lo previo muestra que teóricamente el producto presenta efectos potenciales negativos en el ambiente, confinados a los sedimentos bajo las jaulas donde el producto es usado, debido al rápido efecto de dilución producido bajo condiciones dinámicas y la baja solubilidad del Teflubenzuron. De acuerdo a los análisis toxicológicos, las especies potencialmente en riesgo son organismos bentónicos que contienen quitina (crustáceos y poliquetos) y que habitan en áreas bajo y/o en la vecindad de las jaulas. Dadas las concentraciones esperadas y el LC50 para Corophium volutator, se utilizó el Método de Cuociente para estimar el riesgo ambiental del uso de Teflubenzuron en cultivo de peces, las cuales resultan en "condiciones de riesgo" para los crustáceos y especies bentónicas que posean quitina.

EFECTOS ECOLÓGICOS SOBRE MACROINVERTEBRADOS POR USO HIDROELÉCTRICO DE UN LAGO ANDINO REGULADO (CHILE CENTRAL)

(Ecological effects on benthic macroinvertebrates by hydroelectric use in an Andean regulated lake (central Chile) Moya1 C., Valdovinos1 C., Olmos2 V. & Parra1 O.
1Unidad de Sistemas Acuáticos, Centro EULA-Chile, Universidad de Concepción. Casilla 160-C, Concepción, Chile. 2Departamento de Zoología, Universidad de Concepción. Casilla 160-C, Concepción, Chile.

Muchos investigadores han mostrado la importancia de la química del agua como factor estructurador de los ensambles de macroinvertebrados en los lagos. Sin embargo pocos autores han puesto atención a los efectos físicos, como las extremas fluctuaciones de nivel de los lagos. El presente estudio pretende determinar, a través de un estudio comparativo entre un lago regulado (Lago Laja, LL) y un lago no regulado (Lago Icalma, LI) de una zona Andina del Sur de Chile, como las perturbaciones antrópicas del régimen hidrológico natural, han afectado la estructura de las comunidades bentónicas del litoral. Los resultados muestran que LL presentó valores muy bajos de riqueza de especies, abundancia y biomasa en comparación con el LI, y la comunidad estuvo compuesta principalmente por individuos oportunistas como Chironomidae. Los bajos valores en el Lago regulado fueron explicados principalmente por factores en la zona litoral que están conducidos por las variaciones del nivel de las aguas, los cuales llevan a: desecación y congelación de la biota, remoción de las partículas orgánicas del sedimento y ausencia de macrófitas acuáticas.
Agradecimientos: Proyecto FONDECYT 1000526

EFECTO DE LA DEPREDACIÓN Y LA HETEROGENEIDAD DEL HÁBITAT SOBRE EL RECLUTAMIENTO DE CRUSTÁCEOS BRACHIUROS DE LA COSTA DE CHILE CENTRAL. (Effect of predation and habitat heterogeneity on recruitment of brachiuran crustaceans off the central Chilean coast). Pardo L.M., Infante J., Prieto C., Sepúlveda P., Valdivia I. & Ojeda F.P. Centro de Estudios Avanzados de Ecología y Biodiversidad, Departamento de Ecología, P. Universidad Católica de Chile. Casilla 114-D, Santiago.

La selección de hábitat de postlarvas, la migración de reclutas entre hábitats y la mortalidad asociada a cada hábitat han sido descritos como los principales factores que influencian el reclutamiento en crustáceos decápodos. Sin embargo, escasa información existe sobre la importancia relativa que cada factor tiene en determinar la dinámica del reclutamiento y su variación especie-específica. Así, el objetivo del presente estudio es establecer los principales factores que afectan el reclutamiento de un ensamble de brachiuros chilenos. Para esto se confeccionaron unidades experimentales estandarizadas (cajones de concreto), las cuales fueron instaladas en el submareal somero de la costa central. Para evaluar la selección de hábitat y su mortalidad asociada, los cajones fueron llenados con bolones, conchuela y pasto artificial y se utilizaron rejas de acero para excluir depredadores. Paralelamente, muestras periódicas fueron tomadas de cada hábitat para determinar migración mediante un análisis de frecuencia de tallas. Cancer setosus, Paraxanthus barbiger y Taliepus dentatus fueron las especies dominantes del ensamble. Sus postlarvas mostraron preferencias generales por hábitats estructuralmente complejos, en contraste con juveniles tempranos, los cuales exhibieron preferencias hábitat-específicas marcadas. Nuestros resultados indican que la selección de hábitat de juveniles es activa y podría jugar un rol importante en la determinación de los patrones ecológicos de poblaciones adultas de brachiuros. Financiado por FONDAP 1501-001 (CASEB)

Influencia de la experiencia de riesgo de depredación sobre la conducta de exploración del pez intermareal Auchenionchus microcirrhis. (Influence of the experience of predation risk on the exploration behaviour of the intertidal fish Auchenionchus microcirrhis). Rojas1, J.M., Vásquez2 R. y F.P. Ojeda1. 1CASEB, P. Universidad Católica de Chile. Santiago. 2Fac. Ciencias, Universidad de Chile.

Una conducta antidepredatoria corresponde a una estrategia cuyo objetivo es minimizar la probabilidad de encuentro con un depredador. Las decisiones tomadas al respecto estan basadas en información proveniente de experiencias pasadas y del estado presente del individuo y su entorno. El presente trabajo evalúa la influencia de la experiencia de riesgo de muerte sobre la conducta de exploración ambiental del pez Auchenionchus micricirrhis. Individuos de diferente tamaño corporal fueron expuestos a tres niveles de riesgo de muerte por depredación. Cada nivel de riesgo se definió sobre la disponibilidad de refugio y frecuencia de alimentación en presencia de un depredador sin restricción de movimiento. Antes y después del tratamiento, se registró con una cámara de vigilancia la conducta de exploración de cada individuo. El nivel de actividad y la postura corporal fueron usados como descriptores de la respuesta del pez al riesgo de muerte. En general, todos los individuos incrementaron su nivel de actividad y modificaron su estado de alerta. La magnitud de estos cambios, sin embargo, estuvo asociada con el tamaño corporal de cada individuo.
Agadecimientos a: Beca apoyo desarrollo de proyecto de tésis doctoral 2002 y FONDAP 1501-001 (CASEB)

MIGRACIÓN VERTICAL DE LARVAS DE PECES EN LA ZONA COSTERA DE CHILE CENTRAL (Vertical migration of coastal fish larvae off central Chile) Espinoza C.V., Hernández-Miranda, E. y Ojeda, F.P. Centro de Estudios Avanzados en Ecología y Biodiversidad (CASEB) Depto. Ecología. P. Universidad Católica de Chile.

Los peces presentan un ciclo de vida complejo compuesto por cuatro estadios ontogenéticos: huevo, larva, juvenil y adulto. En el presente estudio se determinaron los patrones de distribución y abundancia de los estadios larvales en la columna de agua. Se postula que el mecanismo subyacente a estos patrones sería la migración vertical. Los objetivos fueron (1) reconocer los patrones espacio-temporales en la zona costera de Chile central determinando los posibles factores que estarían involucrados y (2) identificar el tipo de migración vertical en peces de diferentes tipos de hábitat (pelágico, mesopelágico e intermareal). Este estudio fue realizado frente a la localidad de El Quisco, mediante dos tipos de muestreos: espacial, que consistió en una grilla de 18 estaciones muestreadas de día y posteriormente de noche a una profundidad estándar de 15 m. y temporal, que consistió en transectos paralelos ubicados a 0,50 y 1,0 km de la costa, muestreando simultáneamente a tres profundidades (0, 5 y 15m). Los resultados indican que M. gayi y E. ringens presentan migración vertical tipo I, mientras que G. marmoratus y S. sanguineus tipo II. Se discuten las implicancias ecológicas de ambas estrategias y su relación con variables físicas. Financiado por FONDAP 1501-001 (CASEB)

PATRONES ESPACIALES Y TEMPORALES DEL ICTIOPLANCTON EPINEUSTÓNICO DE LA ZONA COSTERA DE CHILE CENTRAL (Spatial and temporal patterns of coastal epineustonic ichthioplankton off central Chile). Morales, P.M., Hernández-Miranda, E. y Ojeda, F. P. Centro de Estudios Avanzados en Ecología y Biodiversidad (CASEB) Depto. Ecología. P. Universidad Católica de Chile.

El presente estudio estuvo orientado a cuantificar espacial y temporalmente el ensamble de larvas de peces de la capa epineustónica de Chile central. El estudio se efectuó entre julio de 1999 y junio de 2001, frente a las localidades de El Quisco y Las Cruces. La recolección de ictioplancton se realizó en 21 cruceros oceanográficos. Cada uno consistió de una serie de 5-7 transectos paralelos a la línea de la costa, abarcando un área de entre 2 y 8 millas naúticas. Para este período de estudio, se registró un total de 19 especies, entre las cuales las familias Cupleidae, Engraulidae, Tripteriigidae y Gobiesocidae fueron las más representativas en ambas localidades. Sin embargo, la especie dominante en ambas áreas fue Odontesthes regia (pejerrey), perteneciente a la familia Atherinidae; se discuten algunas implicancias de este resultado. Se encontró, además, que existen diferencias estacionales y espaciales en cuanto a la abundancia y riqueza de especies en ambos sitios de estudio. Estos hallazgos se comparan con datos obtenidos en la misma zona a mayor profundidad de la columna de agua y se relacionan con eventos oceanográficos de mayor escala espacial.
Financiado por FONDAP 1501-001 (CASEB)

CAMBIOS EN LOS ENSAMBLES DE DIATOMEAS DEL LAGO LAJA PRODUCTO DE LA INTERVENCIÓN ANTRÓPICA

(Changes in diatom assemblages of Laja Lake caused by anthropogenic influence) Cruces, F.1, Urrutia, R.2 & Oscar Parra2. 1Departamento de Botánica, Universidad de Concepción. 2Centro EULA-Chile, Universidad de Concepción

En el último siglo el Lago Laja ha experimentado una fuerte intervención antrópica, tanto en su cuenca como en el cuerpo de agua, debido a la generación de energía eléctrica. Para evaluar si durante este período se han producido variaciones en la comunidad de diatomeas en el lago, se realizó una reconstrucción de los ensambles diatomológicos a través de las valvas preservadas en la matriz sedimentaria. Mediante técnicas de microscopia fotónica y electrónica se identificaron las especies de diatomeas en cada estrato de la columna de sedimento.
Los resultados indican que los ensambles de diatomeas del Lago Laja han sufrido cambios en su composición a través del tiempo, evidenciándose variaciones en las especies dominantes, principalmente a partir del período en que comienza el manejo hidroenergético de este sistema lacustre. Además, los ensambles diatomológicos reflejan un aumento de las especies típicas de ambientes litorales a medida que transcurre el tiempo, lo que estaría asociado a los cambios en el nivel del agua del lago. Por otra parte, durante este período también se observa un aumento de algunas especies consideradas como típicas de ambientes mesotróficos o eutróficos (e.g. Aulacoseira granulata, Stephanodiscus sp.), lo que indicaría un aumento de los nutrientes en el lago.
Agradecimientos: Beca Doctoral CONICYT y DIUC N° 203.310.35-1

 

Botánica Ecológica

EFECTO DE LA HERBIVORÍA SOBRE LA FENOLOGÍA DE ARBUSTOS EN LA ZONA SEMIÁRIDA DEL CENTRO-NORTE DE CHILE. (Effect of herbivory on shrub phenology in the semiarid zone of north-central Chile). Moreno-Chacón, M.1, Gutiérrez, J. R.1,2, Meserve, P. L.3 & Cea, A.1. 1Departamento de Biología, Universidad de La Serena, 2Centro de Estudios Avanzados en Zonas Áridas (CEAZA). 3Department of Biological Sciences, Nothern Illinois University, USA.

La herbivoría puede tener diversos impactos sobre las plantas, pudiendo afectar la sobrevivencia, crecimiento, fecundidad y otros aspectos de su funcionamiento. En la zona semiárida del centro-norte de Chile, la exclusión de micromamíferos herbívoros, mostró efectos significativos sobre la cobertura de algunas especies arbustivas y herbáceas. Sin embargo, no se ha investigado cuáles son los efectos indirectos que puede generar la herbivoría sobre las etapas fenológicas vegetativas y reproductivas de los arbustos.
En este trabajo se evaluó experimentalmente, a través de tratamientos de exclusión, el efecto del ensamble de micromamíferos herbívoros sobre las etapas fenológicas vegetativas y reproductivas de los principales arbustos de la zona semiárida del Parque Nacional Bosque Fray Jorge.
En ausencia de herbívoros los arbustos Porlieria chilensis y Proustia pungens no mostraron variación en ninguno de los estados fenológicos evaluados, en cambio Adesmia bedwelli presentó valores significativamente mayores de yemas vegetativas y hojas nuevas, en los tratamientos de exclusión, aunque no se registraron variaciones en las etapas reproductivas.
Agradecimientos: FONDECYT 1030225.

MODELACIÓN DEL FUNCIONAMIENTO Y BIODIVERSIDAD DEL ESTRATO HERBÁCEO EN LA ZONA ÁRIDA DEL SAHEL, OESTE ÁFRICA. (Functioning model and biodiversity of the herbaceous layer in the arid zone of the Sahel, Western Africa), Tracol, Y.(1); Mougin, E.(2); 1- Centro de Estudios Avanzados en Zonas Áridas (CEAZA), Casilla 599, La Serena. 2- CESBIO, Toulouse, Francia. (Patrocinio: F.A. Squeo)

El estrato herbáceo en el Sahel está constituido principalmente por plantas anuales. Se caracteriza por una alta variabilidad espacial e interanual en la productividad primaria, a causa esencialmente de las lluvias monzonales. Se estudió la respuesta de esta estepa al clima mediante el uso de un modelo matemático y 15 años de datos de terreno a partir de la ultima sequía de 1984 (e.g., lluvias, suelo, fitomasa, composición florística). El modelo STEP (Sahelian Transpiration Evaporation and Production) ajustado para las zonas áridas simula el crecimiento diario de la biomasa y en consecuencia reproduce la eficiencia en el uso del agua y la luz. Por otro lado, la biodiversidad y un enfoque por grupos funcionales informan sobre las estrategias utilizadas por las hierbas. El análisis acoplado de estos dos enfoques (matemático y ecobotánico) muestra que el funcionamiento del estrato herbáceo no ha cambiado significativamente desde 1984, debido al dominio de plantas con fotosíntesis tipo C4 (gramíneas) y con ciclos de desarrollo de duración media (= 70 días). Ampliamente representada, la gramínea Cenchrus biflorus, ilustra la resiliencia de las plantas anuales frente a la variabilidad ambiental gracias a su gran capacidad germinativa.

EFECTOS DE LA ESPECIE INVASORA CENTAUREA SOLSTITIALIS L. (ASTERACEAE) SOBRE LA GERMINACIÓN DE DOS ESPECIES NATIVAS DEL MATORRAL DE CHILE CENTRAL (Effects of the invasive species C. solstitialis L. (Asteraceae) on seed germination of two native species from the matorral of Central Chile) Gómez-González, S. & Cavieres, L.A. Departamento de Botánica, Universidad de Concepción.

Centaurea solstitialis, especie originaria de Europa, es una de las plantas invasoras más destructivas en zonas con clima tipo mediterráneo. En Chile, se distribuye en la Zona Central y aún no se conocen sus efectos sobre la flora nativa. Para otras especies del género Centaurea, se ha postulado que la alelopatía, podría explicar su éxito de invasión. Sin embargo, se ha prestado poca atención a los mecanismos de invasión a nivel de la germinación. En el presente estudio, se analizan los efectos la presencia de C. solstitialis sobre la germinación de dos especies nativas pioneras del matorral de Chile central: Baccharis linearis y B. paniculata. Se germinaron semillas de Baccharis en cuatro tratamientos: presencia o ausencia de semillas de C. solstitialis y presencia o ausencia de semillas co-específicas (para distinguir efectos denso-dependientes de posibles efectos alelopáticos). La presencia de Centaurea no tuvo efectos significativos sobre la germinación de las especies de Baccharis, descartándose la posibilidad de alelopatía a nivel de la germinación. Sin embargo, la tasa de germinación de C. solstitialis fue mucho más elevada, alcanzando ca. 100% en solo 4 días. Esta germinación explosiva podría conferirle una ventaja competitiva sobre las especies nativas de Baccharis.

DEPREDACIÓN DE SEMILLAS EN JUBAEA CHILENSIS: VARIACIÓN DEL TAMAÑO DE SEMILLAS Y CONSECUENCIAS SOBRE SU SOBREVIVENCIA (Seed predation of Jubaea chilensis: seed size variation and consequences on seed survival). Marcelo,W., Calderón L., Rivera-Rei, A.A., Bustamante R.O. & Vásquez, R.A. Departamento de Ciencias Ecológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. Patrocinio: Ramiro Bustamante

La depredación de semillas limita la reproducción en plantas. Las semillas de Jubaea chilensis (palma chilena) son consumidas principalmente por roedores como Octodon degus y Rattus rattus. En un trabajo anterior, observamos que el tamaño medio de semillas consumidas era menor que el tamaño medio de las semillas producidas. El objetivo de este trabajo es analizar si las semillas pequeñas sobreviven menos que las semillas grandes. En el Parque Nacional La Campana (V Región, Chile), se recolectaron semillas desde 21 individuos de palmas adultas a las cuales se les midió su tamaño (largo, ancho y peso). Así, se pudo evaluar la variación individual de las semillas producidas por cada palma. Se tomaron aleatoriamente submuestras de 50 semillas de cada palma adulta, identificando y marcando cada semilla de cada árbol parental. Se realizó un experimento de campo, disponiendo las 21 submuestras aleatoriamente en el espacio. Se observó que existe una mayor sobrevivencia de las semillas de mayor tamaño, y además estas semillas sobreviven por más tiempo que las pequeñas. Se discuten las consecuencias poblacionales de estos efectos selectivos.

UMBRALES DE POTENCIAL HÍDRICO PARA LA GERMINACIÓN DE SEMILLAS DE ARBUSTOS DEL DESIERTO COSTERO DEL NORTE-CENTRO DE CHILE (Water potential thresholds for seed germination of shrubs from coastal desert of north-central Chile). León, M.F., Pacheco, J., Martínez, L. y Squeo, F.A. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de La Serena y Centro de Estudios Avanzados en Zonas Áridas (CEAZA), Casilla 599, La Serena, Chile (mleon1@mailuls.cl)

La germinación de semillas de arbustos desérticos es gatillada por pulsos de agua en la estación húmeda, constituyendo un momento crítico en el ciclo de vida de las especies. Individuos adultos de distintos grupos funcionales muestran diferentes respuestas a esos pulsos de agua. Se determinaron los umbrales de potencial hídrico requeridos para gatillar la germinación en 15 especies arbustivas de la Quebrada Romeral (29º43´S- 71º15´O), las que pertencen a dos grupos funcionales (siempre-verdes y deciduas). Las semillas fueron sometidas a cinco niveles de potencial hídrico (0, -0,2, -0,5, -0,9 y -1,5 MPa), usando soluciones de polietilenglicol e incubadas en una cámara de crecimiento a 25ºC/15ºC. La germinación se evaluó durante 20 días, cada 12 horas los primeros 5 días y cada 24 horas los restantes. La mayoría de las especies exhibieron germinación solo en 0 y -0,2 MPa concentrándose en el grupo de las compuestas. Solo una especie, Centaurea chilensis, exhibió germinación en todos los niveles evaluados. Se discute las implicancias de estos resultados en el ámbito del establecimiento de plántulas en zonas áridas. Financiado por FONDECYT Nº1030428

IMPORTANCIA DE LA TEMPERATURA EN LA GERMINACIÓN DE SEMILLAS DE ESPECIES ALTO-ANDINAS. The importance of temperature in the germination of seeds collected in the high Andes, Sierra-Almeida, A & L.A. Cavieres ECOBIOSIS, Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Chile. ansierra@udec.cl

Las zonas de alta-montaña son reconocidas por sus bajas temperaturas ambientales, por lo que sería esperable que las semillas de especies que habitan este tipo de hábitat presenten la capacidad de germinar a bajas temperaturas. Se realizaron ensayos de germinación en laboratorio, en semillas de 20 especies de plantas colectadas a dos altitudes en los Andes de Chile central. Las semillas fueron puestas a germinar a dos regímenes térmicos: 20/10ºC y 10/5ºC. Los ensayos se realizaron tanto en semillas estratificadas por 3 meses (4ºC-oscuridad) como en semillas no estratificadas. Para cada especie se calculó el porcentaje final (%FG) y coeficiente de velocidad de germinación. En general, en las semillas de especies colectadas a mayor altitud, el %FG es mayor a 20/10ºC que a 10º/5º. Sin embargo esta diferencia no es tan notoria en semillas estratificadas. En semillas de especies colectadas a menor altitud, sin estratificación el %FG es mayor a 20/10ºC. En contraste, luego de la estratificación, la germinación es mayor a 10/5ºC. Estos resultados sugieren que en especies de alta montaña pasar por un período de estratificación disminuye los requerimientos térmicos para germinar. Esto tiene especial importancia a menor altitud, ya que permitiría la germinación de semillas temprano en la estación de crecimiento, aumentando la chance de establecimiento exitoso.
Financiado por FONDECYT 1030821.

Monitoreo de germinación en semillas de plantas nativas conservadas en banco de semillas (Monitoring seed germination on native plant species store in seed bank), 1León-Lobos, P, 2Pacheco, Y., & 3Pritchard, H.W. (1)Banco Base de Semillas, Instituto de Investigaciones Agropecuarias, Casilla 73 Vicuña. bancosemillas@tie.cl (2) Departamento de Biología, Universidad de La Serena, Casilla 599, La Serena. (3) Seed Conservation Department, Royal Botanic Gardens Kew, UK. Wakehurst Place, Ardingly, Haywards Heath, West Sussex RH17 6TN, UK.

Se evaluó la germinación de semillas en 45 muestras conservadas ex situ, correspondientes a 40 especies nativas, principalmente de zonas áridas de Chile. Se aplicaron protocolos simples a considerando diferentes condiciones experimentales que pueden gatillar o estimular de germinación de semillas. En un 57% de especies estudiadas las semillas germinaron cuando fueron tratadas a 25ºC, con valores de germinación entre 23% a 97%. Sin embargo, un 8% y 15% de las muestras, requirieron estratificación fría (5ºC) y escarificación ácida, respectivamente para incrementar significativamente (P<0.05) la germinación. En el 20% restante de las muestras, la germinación incrementó cuando las semillas fueron traspasadas desde una condición de 25ºC por 50 días a temperatura alternante de 25ºC/10ºC por 50 días. Las diferentes respuestas de germinación a condiciones ambientales sugieren diferentes mecanismos de latencia de semillas en plantas de zonas áridas de Chile.
Agradecimientos: Millennium Seed Bank Project _ Chile.

EL DISEÑO VASCULAR NO OBEDECE LA LEY DE MURRAY EN LOS TEJIDOS BASALES DE BETULA PENDULA. (Vascular design does not follow Murray's law in basal tissues of Betula pendula). Atala, C.*+ & Lusk, C.*
*Ecología Forestal, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción. +Becario CONICYT

Numerosos modelos del sistema vascular de las plantas han sido propuestos. Evidencia reciente muestra que el transporte de agua obedece la ley de Murray en las porciones distales de algunos árboles y trepadoras. Esta ley predice Sr3, con r = radio de los conductos, es invariante entre niveles de ramificación. Este estudio investiga el ajuste de esta ley en los tejidos basales de Betula Pendula. Se identificó el xilema activo y se realizaron cortes transversales en 4 niveles: tronco base, ramas primarias, ramas terminales y pecíolos. Se midió: área del lumen de conductos (AL), área de xilema y número de conductos; r se estimó a partir de AL. Se examinó el ajuste de estos parámetros con la ley de Murray comparando Srx (x = 0,5-3,0) en los 4 niveles. El número de vasos aumentó acropetalmente, mientras que el radio de los conductos y el área de conducción disminuyeron. Los niveles distales se ajustan parcialmente a la ley de Murray. Los niveles basales, sin embargo, presentan una desviación significativa. Estos resultados están en discordancias con modelos de optimización. Proponemos que el diseño del sistema vascular podría estar determinado mayoritariamente por protección al déficit hídrico y en menor grado por una optimización del desempeño.

Botánica - FlorÍstica

COMUNIDADES LIQUÉNICAS EN TRONCOS BASALES DE Nothofagus pumilio, SUR DE CHILE. (Lichen communities on basal trunks of Nothofagus pumilio, Southern Chile). Rubio C. Delgadillo A, Quilhot W. Departamento de Ciencias Químicas y Recursos Naturales, Facultad de Farmacia, Universidad de Valparaíso, Chile.

Se ha sugerido que las comunidades liquénicas se desarrollan por un proceso de adición de especies más que por reemplazo de especies, efecto que se acentúa cuanto más estable es el sustrato permitiendo a las especies pioneras mantener su presencia mediante la recolonización lo que explica que los troncos basales tengan, en su mayoría, la mayor riqueza específica. El objetivo de este trabajo es describir las comunidades de macrolíquenes en troncos basales de Nothofagus pumilio en sitios forestales seleccionados las Reservas Forestales Jeinimeni (lat. 46º5'S) y Lago Cochrane (lat. 47º 1'S), entre 550 y 1.100 m snm. La composición de especies, diversidad específica y biomasa son diferentes para cada sitio forestal; especies generalistas que incluyen a Coelopogon epiphorellus, Parmelia protosulcata, Protousnea magellanica P. malacea y Tukermannopsis chlorophylla son comunes a todos los sitios de muestreo, independiente de la altura snm y de la latitud del hábitat. Los resultados de los análisis descriptivos y de agrupación permiten concluir que los cambios estructurales en las comunidades responden, principalmente, a factores del hábitat que incluyen humedad ambiental, competencia por la luz, probabilidades de fijación de los propágulos y supermanencia en el sustrato.
Proyectos Biodiversidad de Aysén (Unión Europea), y DIPUV 27/2003 (Universidad de Valparaíso)

UN MODELO PARA ESTUDIAR EL CRECIMIENTO DE ESPECIES LIQUÉNICAS EPÍFITAS. (A model to study growth rates in epiphytic lichen species). Quilhot W. y Rubio C. Departamento de Ciencias Químicas y Recursos Naturales, Facultad de Farmacia, Universidad de Valparaíso, Chile.

La colonización de especies forestales por líquenes requiere de la dispersión de propágulos desde los talos parentales, de un sustrato apropiado para su fijación y de condiciones microclimáticas adecuadas para el posterior desarrollo de los talos. En sitios forestales de la R.N. Lago Cochrane, Aysén, se estudió las primeras etapas en la colonización de troncos basales de Nothofagus _previa remoción de la cobertura liquénica_ por Sticta fuliginosa y `Tukermannopsis chlorophylla, en un período de dos años. El crecimiento se evaluó como incremento en biomasa de los talos. El número de propágulos que germinaron fue diferente para cada especie; se recolectaron 103 talos de S. fuliginosa con un peso promedio de 0,0104 ± 0,009, el 90% de los talos tiene un crecimiento igual a 0.0232g. El número de talos de T. chlorophylla fue de 203, con un peso promedio de 0,0023 ± 0,003; para igual percentil, el crecimiento fue de 0,0042g. El crecimiento para ambas especies se ajusta al modelo de distribución gamma. Algunos talos alcanzaron el tamaño de adultos en el período experimental. El método de terreno es el más adecuado para estimar el crecimiento en líquenes porque este se determina en el lugar en que las especies se desarrollan naturalmente.
Proyectos Biodiversidad de Aysén (Unión Europea) y DIPUV 27/2003 (Universidad de Valparaíso).

VARIABILIDAD MORFOLÓGICA EN LAS ESPECIES CHILENAS DE PIPTOCHAETIUM J. PRESL (POACEAE). (Morphological variability in the Chilean species of Piptochaetium J. Presl (Poaceae). Peña Hernández, C., Negritto, M.A., Baeza, M., Ruiz, E. & Marticorena, A. Departamento de Botánica, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción, Casilla 160-C, Concepción, Chile.

En Piptochaetium J. Presl (Stipeae, Poaceae) los principales caracteres diagnósticos están relacionados con las estructuras reproductivas. Su tratamiento es dificultoso debido a la uniformidad interespecífica de caracteres morfológicos vegetativos, la variación de estos caracteres en relación al hábitat y la aparición de caracteres intermedios en las estructuras reproductivas, lo que dificulta la delimitación de cada una de las especies. Por ello, en este estudio se aplicaron técnicas multivariadas. Se consideraron las 6 especies de Piptochaetium presentes en Chile, se analizaron 25 caracteres exomorfológicos (7 vegetativos, 18 reproductivos) de los cuáles 15 son cuantitativos y los restantes cualitativos. La similitud es analizada por medio de técnicas numéricas multivariadas. El PCA indica que 6 componentes explican un 68,5% de la variabilidad. Los caracteres que presentan el mayor coeficiente de variación, fueron cualitativos reproductivos: ramificación de la panoja, forma del antecio y del antopodio, pilosidad del antopodio, persistencia de la arista apical y la presencia de corona con reborde. Además, los especímenes se distribuyen en 4 grupos formados por: 1) P. bicolor, 2) P. stipoides; 3) algunos de P. setosum y de P. angolense y 4) P. angolense, P. montevidense, P. panicoides y P. setosum. El coeficiente de correlación cofenética es r=0.84273.

PATRONES DE DISTRIBUCIÓN DE PTERIDOPHYTA DE LA ZONA DE TRANSICIÓN MEDITERRÁNEO-TEMPLADA DE CHILE.

(Distribution patterns of Pteridophyta of Chilean template-mediterranean transition). Parra, M.J. (1); E. Teneb (1); R. Rodríguez (2) y L.A. Cavieres (1). 1-ECOBIOSIS. 2-Departamento de Botánica. Universidad de Concepción. Casilla 160-C, Concepción, Chile.

Los Pteridófitos son un grupo muy importante para los diferentes enfoques fitogeográficos, considerando que dependen mayoritariamente de condiciones de microhábitat para establecerse y que son poco limitados en su distribución por las barreras geográficas que limitan a las angiospermas. El objetivo del trabajo fue determinar asociaciones corológicas de especies de Pteridófitos en la VIII Región de Chile y los factores climáticos o edáficos relacionados con su distribución. Se dividió la región en cuadrículas de 0.25 x 0.25 grados, en las cuales se registraron las presencias y ausencias de las especies de pteridófitos en la región. Se realizó un análisis de agrupamiento con el índice de similitud de Jaccard, y se estableció si los grupos obtenidos eran distintos de lo esperado por azar. Se obtuvieron 7 corotipos de Pteridófitos, reconociéndose tres patrones principales de ordenamiento espacial: andinos, costeros y de amplia distribución. Los análisis de regresión logísticas y GLM establecieron que las variables que mejor se relacionaron con su distribución fueron aridez y tipo de suelo, lo que confirma la importancia de la transición bioclimática de la VIII Región de Chile en sentido norte-sur y la influencia de los tipos de suelos en el ordenamiento espacial de la flora en sentido longitudinal.

ANÁLISIS COMPARATIVO DEL CARIOTIPO EN HAPLOPAPPUS CASS. Y GRINDELIA WILLD. (ASTERACEAE) MEDIANTE DOBLE FISH CON GENES ESPECÍFICOS rRNA. (Comparative karyotype analysis in Haplopappus Cass. and Grindelia Willd. (Asteraceae) by double FISH with rRNA specific genes). Baeza, C. y Schrader, O. Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción, Depto. Botánica, Casilla 160-C, Concepción. Federal Centre for Breeding Research on Cultivated Plants, Institute of Horticultural Crops, Neuer Weg 22/23, 06484 Quedlinburg, Germany.

The genera Grindelia Willd. and Haplopappus Cass. belong to the family Asteraceae and they are distributed in America and South America, respectively. Grindelia anethifolia and G. prunelloides, newly analyzed with molecular_cytological methods, exhibited symmetric karyotypes with metacentric chromosome sets (5m + 1m_sat) and 2n = 12 chromosomes. The NOR was detected after fluorescence in situ hybridization (FISH) with 18/25S rDNA in the satellite chromosome 2. In contrast to these species those of Haplopappus (H. glutinosus, H. grindeloides and H. stolpii) showed exclusively a higher asymmetric index with submetacentric chromosome sets (4sm + 1sm_sat). The sat-chromosomes 3 of H. glutinosus and H. grindelioides were both significantly different in their length from chromosomes 2 and 4. Furthermore in Grindelia the FISH with 5S rDNA could estimate signals in the short arms of chromosomes 3 or 4, which were in their length not significantly differentiated. Contrary to these findings in Grindelia, the position of 5S rDNA in Haplopappus was detected in the long arms of chromosome 1 (H. grindelioides and H. stolpii) and chromosome 2 (with two different loci) and chromosome 4 of H. glutinosus. The two_color FISH of 5S and 18/25S rDNA had provided clear karyotypic markers for three (Haplopappus glutinosus) and two (H. grindelioides and H. stolpii) chromosomes.
Supported by a scholarship from the Alexander von Humboldt Stiftung.

ANÁLISIS CUANTITATIVO DE LA FLORA DE LA VEGETACIÓN LEÑOSA DE LA ISLA ROBINSON CRUSOE (ARCHIPIÉLAGO DE JUAN FERNÁNDEZ).

(Quantitave analysis of the flora in forest and scrubs of Robinson Crusoe Island (Juan Fernández Archipelago), Ramírez, J.C.1, Ricci, M2; Ramírez, C.1.
1 Instituto de Botánica, Universidad Austral de Chile, Casilla 567, Valdivia.
2 Corporación Nacional Forestal, Casilla 477, Rancagua.

Se estudió la flora vascular de bosques nativos y matorrales secundarios de Robinson Crusoe. El inventario florístico se obtuvo desde una tabla fitosociológica formada por 169 censos levantados en la parte más higrófila de la isla, según la metodología de Zürich-Montpellier. Las 78 especies encontradas se dividen en 17 helechos, 3 dicotiledóneas primitivas, 51 eudicotiledóneas y 7 monocotiledóneas. La mayoría de las especies (66) son endémicas. Se encontraron 8 especies autóctonas no endémicas y 4 alóctonas invasoras (Aristotelia chilensis, Ugni molinae, Rubus ulmifolius y Acaena argentea). El espectro biológico está dominado por plantas leñosas y hierbas perennes. Las especies más importantes por frecuencia y cobertura son Myrceugenia fernandeziana, A. chilensis, U. molinae, Drimys confertifolia, Blechnum cycadifolium y R. ulmifolius. La importancia de las especies invasoras indica el alto grado de alteración de los bosques nativos de la isla. Se determinó que aunque las especies Lactoris fernandeziana, Plantago fernandezia y Robinsonia thurifera están en peligro, aún se encuentran algunos ejemplares formando parte de la flora de la isla. Finalmente, se destacan 18 especies que por presentar baja frecuencia y cobertura, aparecen como escasas y deberán ser sometidas a una urgente evaluación de su estado de conservación.

ANÁLISIS MORFO-ESTRUCTURAL Y VARIACIÓN ESPACIAL DE LA DIVERSIDAD FLORÍSTICA EN FRAGMENTOS DEL BOSQUE MAULINO CADUCIFOLIO (Morphological structure and spatial variation of floristic diversity in the Maulino Forest Fragments). San Martín, J. Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca.

En la Zona Central de Chile por representatividad y endemismo sobresale el Bosque Maulino Caducifolio de Nothofagus glauca. Con distribución en la precordillera andina y Cordillera de la Costa este bosque se presenta fragmentado. Se postula que la fragmentación afecta la organización y la diversidad florística del bosque.
Se analiza la organización y variación espacial de la diversidad florística beta en 20 fragmentos de tres superficies diferentes.
Se encontró que en los fragmentos de menor y mayor superficie el número medio de especies es compartido, pero menor respecto a los de área intermedia. En ellos la organización es compleja con participación de las típicas formas de crecimiento donde la mayor riqueza de especies es para los árboles y los arbustos. Para fragmentos de tamaños similares el porcentaje de similitud de Renkonen aumenta con su proximidad espacial como también la estructura beta en el gradiente norte-sur. Una tendencia similar se da entre los del área costera con la preandina. Se concluye que los fragmentos tienden a mantener su organización con variaciones en la diversidad florística absoluta. El aumento de la diversidad beta con remplazo de especies se explica por la humedad y la conservación e integridad física de los fragmentos.
Agradecimientos a la Universidad de Talca por su apoyo en el trabajo.

Botánica Fisiológica

IDENTIFICACIÓN DE GENES INDUCIDOS POR COBRE EN PLANTAS TOLERANTES DE LA ESPECIE Dactylis glomerata. (Identification of copper-induced genes in Dactylis glomerata tolerant plants) Ortiz, C.; *Smith-Espinoza, C. y Morales, P. Departamento de Biología, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile y *ViaLactia BioSciences, N. Zelandia cortiz@lauca.usach.cl

El cobre es un microelemento esencial para el crecimiento vegetal que, en altas concentraciones, estimula la formación de especies reactivas de oxígeno, provocando estrés oxidativo. Plantas tolerantes del pasto Dactylis glomerata, provenientes de sitios contaminados con cobre, y crecidas en presencia del metal, acumulan hasta 1.500 ppm de cobre en su tejido foliar.
Se extrajo RNA de hojas de D. glomerata de un grupo control y de un grupo previamente expuesto a 600 µM de cobre. Los cDNAs obtenidos fueron digeridos y se utilizaron para obtener una librería de DNA de expresión diferencial mediante la técnica de sustracción de DNA. Los fragmentos obtenidos fueron clonados para realizar un "screening" diferencial de los clones mediante PCR.
Se obtuvieron 84 clonas diferenciales, de las cuales alrededor de treinta se expresaron únicamente en material tratado con cobre y alrededor de cuarenta en material no tratado. Los análisis de las secuencias obtenidas han mostrado homología con proteínas asociadas a estrés abiótico de plantas monocotiledóneas (Salt-stress induced protein, 14-3-3-LIKE PROTEIN, Peroxidase 2 (CUP2), GOS9 PROTEIN, cpn60, entre otras). Una vez caracterizados los fragmentos, se realizarán estudios de expresión de los genes mencionados para establecer la relación entre la tolerancia exhibida por las plantas y la expresión de genes en respuesta a cobre.
Este trabajo es el primer reporte de expresión diferencial de genes en respuesta a cobre en la especie D. glomerata.

UtilizaciÓn de Phragmites australis en el tratamiento de residuos de diferente origen. (Utilization of Phragmites australis in the treatment of wastes of different origin). Jordan, M.(1), Wilken, D (2), Gerth, A(2). (1)Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile, Alameda 340, Santiago, Chile. Email mjordan@genes.bio.puc.cl. (2)BioPlanta GmbH, Deutscher Platz 5, D-04103 Leipzig, Germany. Email: info@bioplanta-leipzig.de

Phragmites australis (Poaceae) [carrizo], corresponde una especie perenne cosmolita que habita ambientes húmedos o semiacuáticos, siendo vastamente utilizada en el tratamiento residual para la recuperación de terrenos contaminados. Dicho potencial de fitorremediación está asociado a su rápido crecimiento y propagación, su capacidad de acumulación de diferentes elementos y su tolerancia a condiciones climáticas y de substrato muy adversas. De lo anterior, se ha planteado un posible uso de la planta en el tratamiento de varios tipos de residuos cuyos volúmenes, acumulativos, son significativos en el país. Plantas de Phragmites, multiplicadas in vitro, fueron evaluadas en cuanto al incremento de biomasa y tolerancia frente a varios metales pesados adicionados al medio de cultivo en forma de sus sales solubles, los que también se encuentran presentes en extractos de relaves mineros y en residuos sólidos de la industria de la celulosa. Resultados preliminares referidos a incremento de biomasa y de análisis químico, indicaron que, en comparación con las concentraciones de un medio nutritivo estándar (Murashige & Skoog, 1962), las plantas toleran relativamente altos niveles de Na y en menor medida de Fe, Cu, Ni, Co, Zn y Mn, finalizados 2-4 meses de cultivo. Asimismo, las plantas mostraron relativa tolerancia a la adición de extractos acuosos de relaves de Cu y a varios residuos de la celulosa, bajo condiciones in vitro. Un análisis de los medios indicó una reducción del contenido de varios metales finalizado el cultivo. Los resultados obtenidos in vitro son preliminares debiendo ser validados por otros estudios y ensayos de terreno en el largo plazo (Financiado por: DIPUC 2003/05PF).

EFECTO DEL GEN MUTANTE gai, EN EL PROCESO DE LA TUBERIZACIÓN DE Solanum tuberosum. (Effect of the mutant gene gai in the tuberization process of Solanum tuberosum.) Rodríguez-Falcón, M.(*) y Prat, S.(**).
(*)Instituto de Biología vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca (**)CSIC, España

La tuberización depende de múltiples factores, los cuales generarían señales inhibidoras y activadoras que, según el balance final entre ellas, se produciría o no la tuberización. El fotorreceptor fitocromo B y la hormona giberelina (GA) son importantes factores reguladores de la tuberización. Se ha propuesto que la GA inhibe la tuberización.
Por otra parte, el gen gai se encuentra en mutantes enanas de Arabidopsis que tienen hojas verde-oscuro, y son incapaces de responder a la aplicación de GA, por lo cual se han caracterizado como plantas insensibles a GA.
Para estudiar el papel de la GA en la tuberización se empleó el gen mutante gai como agente supresor de la respuesta a GA. Se generaron plantas transgénicas de S. tuberosum que llevan el gen gai bajo el control del promotor constitutivo 35S. En ellas se analizaron las características de tuberización (desarrollo de estolones, inicio de la tuberización, tamaño y peso de los tubérculos).
Se encontró un adelanto en la tuberización, estolones anómalos y tubérculos de menor o igual peso que los controles, lo que concuerda con el rol inhibidor de la GA en la tuberización y pone de manifiesto que la GA participa en el desarrollo y maduración del estolón.

Caracterización del aparato fotosintetico de dos especies siempreverdes de Nothofagus. (Characterization of the photosynthetic apparatus of two evergreen species of Nothofagus). Reyes-Díaz M.1, Bravo LA1, Alberdi M2 y Corcuera LJ1. 1Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Concepción. 2Instituto de Botánica, Universidad Austral de Chile, Valdivia, Chile.

Nothofagus dombeyi(Nd) y Nothofagus nitida (Nn), son dos especies siempreverdes del bosque templado lluvioso de Chile que poseen diferencias en su demanda lumínica para la regeneración. Mientras Nd es una especie heliófita, Nn es más umbrófila. Por ello, se postula que la fotosíntesis de Nn será más afectada en plántulas que en adultos por alta luminosidad y frío y no así en Nd.
El estudio se realizó a 30 km de Puerto Montt. Se determinó la fotosíntesis neta (A), la eficiencia fotoquímica potencial (Fv/Fm) y efectiva del fotosistema II (PSII), apagamiento fotoquímico (qP), apagamiento no-fotoquímico (NPQ) y tasa de transporte de electrones (ETR) a diferentes intensidades de luz y a 15 y 4ºC.
El punto de saturación lumínico a 15ºC y 4ºC fue mayor en plántulas y adultos de Nd que en Nn. Los valores de Fv/Fm estuvieron cercanos al óptimo (alrededor de 0,8) en ambas especies. El qP y el PSII disminuyeron de alrededor de 0,9 a 0,1, a medida que se aumentó el PAR en ambas especies, mientras que el NPQ aumentó significativamente desde 0,2 a 4. Las mayores diferencias entre ambas especies por efecto de la luz y frío se observaron en las plántulas.
FONDECYT-1030663; BECA CONICYT

MECANISMOS FOTOPROTECTORES CONTRASTANTES EN LAS PLANTAS VASCULARES ANTÁRTICAS. (Contrasting photoprotective mechanisms in antarctic vascular plants). Pérez-Torres E.A, Johnson G.B, Bravo L.AA., Corcuera L.JA. ADepartamento de Botánica, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción, Casilla 160-C, Concepción, Chile. BFaculty of Life Sciences, University of Manchester, 3.614 Stopford Building, Oxford Road, Manchester M13 9PT UK.

Colobanthus quitensis (Kunth) Bartl y Deschampsia antarctica (Desv) son las únicas plantas vasculares que han colonizado de manera natural la Antártida Marítima. Proponemos que estas plantas presentan mecanismos fotoprotectores distintos para sobrevivir al ambiente antártico. Analizamos el efecto de la alta intensidad lumínica y baja temperatura en parámetros de fluorescencia y de espectroscopía de absorbancia en el infrarrojo cercano. Nuestros resultados indican que en D. antarctica el oxígeno es utilizado como un sumidero de electrones alternativo especialmente a alta intensidad lumínica. En estas condiciones fue responsable de hasta un 35% de la tasa de transporte de electrones fotosintética en condiciones no fotorrespiratorias. Por otra parte, C. quitensis no presentó evidencia de reacción de Mehler bajo las condiciones analizadas, lo que es consistente con un menor contenido de antioxidantes con respecto a D. antarctica. Ambas plantas parecen usar el transporte cíclico de electrones asociado con el fotosistema I y la disipación térmica de energía como mecanismos fotoprotectores. Proponemos que la reacción de Mehler puede ser especialmente importante en D. antarctica y en parte responsable de su mejor desempeño en la Antártida Marítima.
FONDECYT 1010899, Beca de Apoyo a Tesis Doctoral 2003, Beca MECESUP UCO 0214

DISMINUCIÓN DE MATERIA SECA EN PLANTAS DE AVENA Y TRÉBOL EXPUESTAS A RADIACIÓN UV-B. (Decrease of dry matter of oat and clover after exposure to UV-B radiation). Chávez M.1, Ibarra P.1, Acevedo P.2 y Casanova Katny MA3*. 1Depto. de Rec. Nat., Fac. de Cs. Agropecuarias y Forestales, y 2Depto. de Cs. Físicas, Fac. Cs., Adm y Econ. U. de La Frontera, Temuco, Chile; 3Dpto. Botánica, Fac. Cs. Nat. y Oceanográficas U. de Concepción, Chile. *Email: angecasanova@udec.cl.

Socio patrocinante: Dr. Luis Corcuera

Se estudió el efecto de una alta dosis de Radiación Ultravioleta-B (UV-B) sobre el crecimiento de plantas de avena (Avena sativa cv. Urano) y trébol rosado (Trifolium pratense cv. Quiñequeli). Las plantas fueron cultivadas en maceteros en invernadero. La exposición a la radiación UV-B se inició en plantas en el estado de tres hojas verdaderas (avena) y tres hojas trifoliadas (trébol). Ambos grupos de plantas fueron expuestos a una alta dosis (1.000 µW) de radiación UV-B diariamente por una hora y durante dos semanas.
Se determinó el efecto de la radiación UV-B a los 7 y 14 días de exposición sobre la materia seca, altura de plantas, y pigmentos fotosintéticos y absorbedores. Después de 14 días la materia seca aérea decreció significativamente un 27% tanto en trébol como en avena. Las plantas expuestas al UV-B aumentaron en altura (17% en trébol y 11% en avena), sin embargo, se observó una disminución del número de hojas. Además en ambos grupos de plantas se produjo un decrecimiento del contenido de pigmentos fotosintéticos (clorofilas y carotenoides), incrementándose el contenido de pigmentos absorbedores de UV-B.
Claramente la radiación UV-B afecta el crecimiento de las plantas en estudio, principalmente a nivel productivo, observándose que las plantas comienzan a desarrollar mecanismos de protección contra el UV-B después de un mayor tiempo de exposición.
MECESUP UCO 0214

EFECTOS DE LAS MICORRIZAS SOBRE EL ESTRÉS HÍDRICO EN PLÁNTULAS DE NOTHOFAGUS DOMBEYI (MIRB. OERST). (The effects of mycorrhiza for water stress management of Nothofagus dombeyi). Álvarez, M.1, Fernández, C.1, Gacitúa, Y.1, Barrientos, M.1, Alberdi, M.1, Godoy, R.1, Valenzuela, E.1*, and Härtel, S.2 (1) Instituto de Botánica y Microbiología*, UACH, Casilla 567, Valdivia. (2) CECS, Arturo Prat 514, Valdivia.
Patrocinante: Prof. R. Godoy.

The response to water stress of one year old plants of Nothofagus dombeyi was investigated. Non-mycorrhizal plants were compared to those associated with Descolea antartica. The water potential was determined in the plants. In foliage, the relative water content, osmotic potential, accumulation of soluble carbohydrates and proline, and fluorescence of chlorophyll a were determined. In roots, we determined antioxidant enzyme activity, phosphatase activity (PA), and nitrate reductase (NR). We found a reduction of the water potential and relative leaf water content in stressed plants which was ameliorated by mycorrhization. Non mycorrhizal plants accumulated more carbohydrates and proline than mycorrhizal plants. With increasing water stress, we observed a decrease of the photochemical efficiency (fPSII) and an increase of NR and non photochemical quenching (NPQ). Mycorrhizal plants provided a higher fPSII and a lower NPQ. APX and CAT activities were higher in mycorrhizal than in non-mycorrhizal plants. For SOD the opposite effect was observed. While the PA was lower in water stressed non-mycorrhizal plants, mycorrhization increased the activity. Our results establish for the first time criteria for the determination of water stress in N. dombeyi.
MECESUP UCO0214, FONDECYT-1040913/3030065/1030663,Millenium-P01-057-F

Variación estacional de proteínas crioprotectoras y anticongelantes en Nothofagus dombeyi (FAGACEAE). (Seasonal variation of crioprotective and antifreeze proteins in Nothofagus dombeyi (Fagaceae).

1Gallardo, J. 1Bravo, L. A., 2Griffith, M., Vergara, G., 1Corcuera L.J. 1Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Chile. 2Department of Biology, University of Waterloo, Canada.

Nothofagus dombeyi es capaz de colonizar y establecerse en hábitats donde queda expuesta a baja temperatura y a un potencial congelamiento. Existe un complejo patrón de respuestas en especies sometidas a estas condiciones, las que van desde la acumulación de solutos compatibles hasta la activación de genes que codifican para proteínas crioprotectoras y anticongelantes. En este trabajo se postula que Nothofagus dombeyi acumula proteínas con actividad crioprotectora y anticongelante durante la estación fría. Se determinó que extractos proteicos totales de tejido foliar de invierno de Nothofagus dombeyi son capaces de crioproteger a la enzima LDH (E.C.1.1.1.23) en ensayos in vitro recuperando el 100% de su actividad a una concentración de 1µgml-1 después de cinco ciclos de congelamiento/descongelamiento en nitrógeno líquido. Esta actividad crioprotectora fue menor en extractos proteicos de hojas colectadas en verano. Los extractos apoplásticos totales de tejido foliar de invierno presentaron actividad anticongelante modificando la morfología de los cristales de hielo. Además, leños de alrededor de tres años presentaron la máxima acumulación de deshidrinas al final de la estación fría (agosto). Los lavados apoplásticos de estos leños no presentaron actividad anticongelante. Se concluye que N. dombeyi presenta actividad anticongelante y crioprotectora inducida en invierno.
FONDECYT-1030663, BECA-CONICYT

 

Biología Molecular Vegetal

ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN DE GENES RELACIONADOS A LOS MECANISMOS MOLECULARES DE TOLERANCIA A COBRE EN Populus spp. (Analysis of gene expression related to molecular mechanisms of copper tolerance in Populus spp.) Guerra, F.; González, E. y Meza-Basso, L. Centro de Investigación en Biotecnología Silvoagrícola - Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca, 2 Norte 685, Talca, Chile.

Especies forestales de rápido crecimiento como el álamo (Populus spp.) constituyen una interesante alternativa para el desarrollo de sistemas de descontaminación de cobre desde suelos y cursos de agua. El análisis de los mecanismos moleculares involucrados en la tolerancia a este metal en estas especies es un requisito esencial para desarrollar variedades útiles para fitorremediación. En base a este objetivo, plantas de diferentes genotipos de álamo, generadas a partir de cultivos hidropónicos de estacas, fueron sometidas a tratamiento con diferentes concentraciones de cobre por hasta 10 días. La tolerancia al metal fue evaluada mediante la medición del largo total de raíz, daño en el tejido foliar y sobrevivencia de la planta. Los resultados obtenidos permitieron identificar dos clones exhibiendo una tolerancia diferencial a cobre, los que fueron posteriormente sometidos a un análisis comparativo de la expresión de genes relacionados con la resistencia a metales pesados en otras especies vegetales. Entre los genes analizados se incluye a aquellos que codifican para metalotioneínas, fitoquelatinas y transportadores de cobre. Los resultados obtenidos de este análisis realizado mediante RT-PCR cuantitativa son presentados en este trabajo.
Financiado por Centro Regional de Biotecnología Silvoagrícola

ANÁLISIS TRANSCRIPCIONAL Y METABOLÓMICO PARA ENTENDER EL EFECTO DE METANOL SOBRE EL METABOLISMO VEGETAL. (Transcriptional and metabolomic analysis to understand the effect of methanol on plant metabolism) Ramírez, I., Dorta, F., Sánchez, E., Jiménez, E. and Peña-Cortés, H. Centro de Biotecnología D. Alkalay L., Universidad Técnica Santa María, Valparaíso.
Patrocinio: H. Peña-Cortés

Diferentes evidencias han demostrado el efecto de la aplicación de metanol sobre el crecimiento y desarrollo de diferentes especies vegetales. La mayoría de estos estudios, observaciones morfológicas y/o mediciones de parámetros fisiológicos, muestran un aumento del desarrollo vegetativo y rendimiento de las plantas cuando son tratadas con metanol exógeno. Sin embargo, estos resultados no proporcionan información que permita entender los mecanismos involucrados en la respuesta al tratamiento. Este estudio pretende obtener información sobre los mecanismos moleculares por los cuales el metanol estaría afectando el metabolismo vegetal. Resultados preliminares obtenidos en nuestro grupo muestran que la aplicación foliar de metanol estimula claramente el crecimiento de Arabidopsis y tabaco aumentando el peso fresco y seco de las plantas. Para obtener una visión más amplia de los eventos involucrados en esta respuesta, los perfiles de transcritos de plantas de Arabidopsis tratadas y no tratadas con metanol fueron analizados utilizando los microarreglos comerciales "ATH1 Genome Array" de Affymetrix. Paralelamente las muestras colectadas fueron analizadas mediante GC/MS determinándose la concentración de alrededor de 100 metabolitos. Los resultados obtenidos serán discutidos en la presentación.
Proyecto Financiado por FONDECYT 1020424

IDENTIFICACIÓN DE GENES QUE SE EXPRESAN EN LAS ETAPAS TEMPRANAS DE LA EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA EN PINUS RADIATA (Identification of genes expressed during early stages of somatic embryogenesis in Pinus radiata). Felipe Aquea y Patricio Arce-Johnson. Laboratorio de Bioquímica. Pontificia Universidad Católica de Chile.

Los estados tempranos de la embriogénesis de plantas superiores son claves para el desarrollo normal del embrión. En esta etapa se establece el plan básico de organización corporal. En las coníferas se desconocen los genes que participan durante el desarrollo del embrión, debido en parte a la dificultad de acceder a los embriones en desarrollo. El proceso embrionario se puede imitar in vitro mediante la embriogénesis somática (ES), modelo de estudio utilizado para investigar factores que afectan el desarrollo del embrión. En nuestro laboratorio hemos implementado ES en Pinus radiata. Mediante la técnica de cDNA-AFLP hemos identificado genes que se expresan durante las etapas tempranas de la ES. Analizamos 3 estadios de desarrollo: Masa proembriogénica, proembrión tardío y embrión temprano. Utilizamos como control de desarrollo tejido indiferenciado no embriogénico. En un análisis preliminar hemos amplificado más de 2.000 Fragmentos Derivados de Transcritos (FDT), de los cuales hemos seleccionado 30 FDT que se acumulan en estados específicos del desarrollo o que presentan un patrón de expresión diferencial durante los estadíos de desarrollo analizados. Un tercio de los FDT identificados tienen homología a genes que codifican a proteínas involucradas en metabolismo de azúcares, muerte celular programada, y tolerancia a estrés. Los FDT sin homología corresponderían a genes específicos de las coníferas. Se discute el potencial rol de estos genes en el desarrollo embrionario.

ANÁLISIS COMPARATIVO DEL PERFIL DE EXPRESIÓN, BAJO CONDICIONES DE SEQUÍA, DE GENES QUE CODIFICAN PARA ENZIMAS DE LA VÍA PLASTIDICA DE LOS ISOPRENOIDES, EN DOS ESPECIES DE Lycopersicon. (Comparative analysis of expression under drought condition, of genes coding for enzyme from the plastidic isoprenoid pathway in two Lycopersicon species.) Loyola J.I., Ahumada Díaz I. San Martín J.M. Ruiz Lara S. Lab. Biología Celular y Genética; Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología.
Universidad de Talca

La sequía corresponde a una condición climática que se caracteriza por la disminución en la precipitaciones de agua lluvia, esta condición tiene un efecto de deshidratación en las plantas, restringiendo su crecimiento, productividad y distribución. La falta de disponibilidad de agua, así como el exceso de luz, generan un aumento en la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) desde los sistemas fotosintéticos, generando una peroxidación de las membranas celulares. Diversas especies son capaces de responder a través de mecanismos fisiológicos y genético moleculares a condiciones de estrés oxidativo gatillados por déficit hídrico, permitiendo su sobrevivencia en ambientes con bajo régimen de precipitaciones.
Se evalúa la expresión de genes de la vía metabólica de síntesis de compuestos isoprenoides (vía plastídica) y se correlacionan, con los niveles de producción clorofilas, carotenos, tocoferoles y ácido abscisico, en condiciones de riego normal y bajo sequía, en L. chilense una especie de tomate silvestre, que habita en el desierto de Atacama y L. esculentum, especie de tomate cultivado.
El determinar el rol de estos genes en la tolerancia de este tipo de estrés, permitirán elaborar estrategias biotecnológicas en el mejoramiento de cultivos de importancia económica.
Financiamiento: Centro de Investigaciones en Biotecnología Silvoagrícola.

DEGECHIVIDdb: UNA PLATAFORMA BIOINFORMÁTICA PARA EL ANáLISIS GENÓMICO EN VIDES. (DEGECHIVIDdb: A bioinformatic platform for the genomic analysis in grapevines. 1Cuadros, A., 2González, D., 1Peña-Cortés, H. 1Centro de Biotecnología "Daniel Alkalay", UTFSM., 2Centro de Bioinformática, Universidad de Talca.
Patrocinante: Hugo Peña-Cortés

El desarrollo de la genómica vegetal y la bioinformática son áreas de desarrollo prioritario en Chile. En el marco de la iniciativa Genoma Chile, se ha establecido la realización del proyecto "plataforma científico-tecnológica para el desarrollo de la genómica de vegetales en Chile", que en su primera etapa contempla la secuenciación de 100.000 ESTs (expressed sequence tags) provenientes de diferentes tejidos de los cultivares Thompson seedless (Sultanina) y Carménère con el objetivo de dilucidar procesos fisiológicos involucrados en la formación de semillas, maduración del fruto y respuesta a patógenos. El procesamiento conjunto de estos ESTs y las más de 140.000 secuencias de vides disponibles en las bases de datos públicas, hacen vital el establecimiento de una plataforma bioinformática que permita la realización de análisis genómicos y su integración con datos transcripcionales provenientes de la plataforma de microarreglos generada en este proyecto.
DEGECHIVIDdb es una plataforma bioinformática capaz de adquirir automáticamente las secuencias generadas, filtrar la contaminación presente (secuencias bacterianas, vector, rRNA y errores de secuenciación), realizar las tareas de ensamblaje y anotación funcional. Además, se han integrado rutinas bioinformáticas que permiten la reconstrucción de vías metabólicas y de regulación, categorización funcional, selección de clones y diseño de macroarreglos.
Este trabajo ha sido financiado por la Iniciativa Genoma Chile-FONDEF G02P1002.

IDENTIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN DEL GEN LCHGDI1 EN LA PLANTA NATIVA DE TOMATE Lycopersicon chilense. Identification and expression analysis from gene LchGDI1 in the native plant tomate Lycopersicon chilense. *Iván Ahumada-Díaz, Luis Meza-Basso _ Simón Ruiz-Lara Patrocinante: Luis Meza-Basso. Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología. *Centro de Investigación en Biotecnología Silvo-agrícola. Universidad de Talca-Chile

En el marco del proyecto "Generación de un banco de genes de tolerancia a estrés abiótico obtenidos de plantas nativas, utilizables en programas de mejoramiento genético vía transgenosis de variedades cultivables", hemos aislado mediante la técnica de Differential display, varios genes que se expresan diferencialmente en la planta nativa de tomate Lycopersicon chilense sometida a sequía. Utilizando la metodología RACE fue obtenida completamente la secuencia codificante de uno de los genes aislados. La secuencia aminoacídica codificada por esta proteína presentó similitud a proteínas del tipo de las GDP dissociation inhibitor (GDI) de otras especies de plantas. Para determinar el curso de la inducción de la expresión del gen bajo condiciones de sequía, estrés salino y temperaturas bajas, hibridaciones Northern fueron realizadas utilizando una sonda específica correspondiente a la región 3' UTR del gen LchGDI1. Los resultados mostraron que en las tres condiciones de estrés abiótico, el gen LchGDI1 es activado transcripcionalmente. Sin embargo, se detectó una inducción temprana para temperaturas bajas y acumulación del tránscrito en el tiempo en condiciones de sequía y estrés salino. Adicionalmente, se evaluó la respuesta transcripcional del gen a diferentes señales químicas. LchGDI1 es expresado diferencialmente bajo la acción de ABA y etileno.
FINANCIAMIENTO
Fondo de Innovación Agraria (FIA)
Centro de Investigación en Biotecnología Silvoagrícola

"CLONACIÓN Y SECUENCIACIÓN DE UN GEN TIPO MADS-BOX EN VIDES (Vitis vinifera)" (Cloning and sequencing of a MADS-box gene in Grape (Vitis vinifera)) Federici, F.; Medina, C.; Arce-Jonhson, P. Laboratorio de Bioquímica. Departamento de Genética Molecular y Microbiología. Pontificia Universidad Católica de Chile.

Los genes homeóticos tipo "MADS box gene" representan una gran familia de factores de transcripción con funciones esenciales durante el proceso de diferenciación y desarrollo en las plantas. El análisis de los mutantes de genes homeóticos ha llevado a postular el modelo ABC, que explicaría cómo la función combinada de tres clases de genes; A, B, y C; determinan la identidad de los cuatro verticilos de órganos florales. En Arabidopsis, hay dos genes clase A (AP1, APETALA 1 y AP2, APETALA 2), dos de clase B (PI, PISTILLATA y AP3, APETALA 3), y un solo gen perteneciente a la clase C (AG, AGAMOUS). Nosotros hemos clonado un gen tipo MADS-box en vides (Vitis vinifera var. Cabernet sauvignon) homólogo a PISTILLATA (VvPI; Vitis vinifera PISTILLATA). VvPI, al igual que el resto de los genes de la familia de los MADS-box, contiene los cuatro dominios típicos de los genes MADS: el dominio de la caja MADS, el dominio "Intervening", el dominio de la caja K (Keratin-like) y el dominio C-terminal.
El estudio de este gen podría contribuir al conocimiento de la fisiología de la floración en la vid y, por tanto, al mejoramiento de la productividad de esta especie.
Agradecimientos: Proyecto Fondef G02S1001.

PERFIL DE EXPRESIÓN DE GENES QUE CODIFICAN PARA ENZIMAS DEL METABOLISMO DE POLIAMINAS DURANTE EL DESARROLLO TEMPRANO DE FRUTOS EN Vitis vinifera Cv. Carménère (Expressión profile of genes coding for polyamine metabolism enzymes during the early fruit development in Vitis vinifera cv Carménère) Cabrera, N., Alva, O., Poblete, F., Ruiz, S., Meza-Basso, L. y González, E. Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca, 2 Norte 685, Talca

Durante el desarrollo temprano de bayas en Vitis vinifera cv Carmenere se hacen evidentes dos fenómenos que afectan negativamente, tanto la calidad como el rendimiento de frutos en esta especie: la abscisión frutal y la partenocarpia. Evidencia experimental reciente permite correlacionar ambos fenómenos con alteraciones en las concentraciones normales de poliaminas (PAs), sugiriendo que la modulación de las vías metabólicas de tales compuestos, poseen un rol central en los eventos mencionados.
La evolución del perfil de concentración de las diferentes PAs es el resultado de una modulación de la actividad de las enzimas que operan en esta vía metabólica. Para determinar si esta modulación es ejercida a nivel de inducción/represión de la síntesis de tales enzimas, se ha analizado la expresión de los genes que codifican para las enzimas de esta vía durante diferentes etapas del desarrollo frutal temprano en Vitis vinifera cv. Carménère. Los resultados obtenidos por hibridación Northern y por RT-PCR cuantitativa indican que los genes de tales enzimas son expresados diferencialmente durante las etapas analizadas.
Financiado por Proyecto Genoma Chile G02P1002 y Universidad de Talca

Microbiología - Biotecnología

Identificación de aminoácidos implicados en la producción de microcina E492 (Identification of amino acids involved in the production of active microcin E 492) García V., Lagos R. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile

La microcina E492 es una bacteriocina que ejerce su acción mediante la despolarización de la membrana de las células sensibles. Esta bacteriocina es sintetizada como un precursor, su péptido líder es procesado en un motivo de dobles glicinas y es exportada mediante un sistema de secreción tipo I.
El objetivo de este trabajo fue identificar mediante mutagénesis los residuos implicados en la producción de microcina activa. Un plasmidio que codifica para el gen estructural de la microcina y su inmunidad (ambos genes están sobrepuestos) se mutagenizó in vitro con hidroxilamina. Las mutantes no productoras de microcina activa se identificaron mediante ensayos de complementación. Para descartar mutaciones en el promotor, de corrimiento del marco de lectura o sin sentido se identificaron por western blot las mutantes que producían la proteína. El análisis de las secuencias del DNA de estas mutantes arrojó lo siguiente: dos mutantes que serían defectuosas en la exportación, pues presentan modificaciones en el motivo doble glicina del péptido líder (G18S, G18D); una mutante que afectaría la inserción/formación del canal iónico en la membrana citoplasmática, pues se localiza en la región transmembrana (Q27H); y una mutante que no afecta la estructura primaria de la microcina, pero que produce un cambio (E96K) en la región de la proteína de la inmunidad que se sobrepone con la región del péptido líder de la microcina, lo que sugiere que esta zona regularía posttraduccionalmente la expresión de la microcina.
Financiado por Fondecyt Nº1020757

EL DOMINIO ABC DE LOS TRANSPORTADORES DE BACTERIOCINAS NO ES SOLO UN DOMINIO ENERGIZANTE. (ABC domains of bacteriocin transporters: Not Just an energizing domain.) Laboratorio de Biología Estructural y Molecular, Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.
*Tello M. y Lagos R.

Los sistemas de exportación ABC están compuestos por un transportador ABC, una proteína accesoria y TolC. La colicina V y microcina E492 son bacteriocinas no relacionadas exportadas mediante sistemas ABC que comparten un 90% de identidad. Los transportadores de ambos sistemas presentan tres dominios (peptidasa, transmembrana y ABC). Se ha demostrado que el transportador de colicina V (CvaB) no exporta microcina E492, en tanto que el transportador de microcina E492 (MceG) exporta ambas bacteriocinas. El objetivo de este trabajo fue determinar qué dominio del transportador de colicina V otorga la especificidad de transporte. Mediante PCR se amplificaron las regiones que codifican para cada uno de los dominios de ambos transportadores, y estos productos PCR fueron combinados, permitiendo la generación de amplicones híbridos entre los genes de CvaB y MceG. Con esta estrategia se generaron distintas combinaciones de transportadores de microcina con el dominio peptidasa o el dominio ABC del transportador de colicina V, los cuales se utilizaron para complementar mutantes mceG- y cvaB-. Los resultados de estas complementaciones indican que el dominio peptidasa de CvaB puede procesar ambas bacteriocinas, en cambio el dominio ABC de CvaB solo permite la exportación de colicina V. Se concluye que el dominio ABC del transportador de colicina es quien otorga especificidad en el trasporte de estas bacteriocinas. Financiado por Fondecyt 1020757 y *Beca Conicyt para Tesis Doctorado.

ANÁLISIS DE LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DEL RETROTRANSPOSÓN TLC1.1 DE Lycopersicon chilense EN RESPUESTA A PATÓGENOS. (Analysis of the regulation of the TLC1.1 retrotransposon expression from Lycopersicon chilense in response to pathogens). Ruiz-Lara, S.1; Salazar, M.1 y Peña-Cortés, H.2 1Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología Universidad de Talca, Casilla 747, Talca-Chile. 2Centro de Biotecnología, UTFSM. Casilla 110-V Valparaíso-Chile

Los elementos cis que regulan la expresión del retrotransposón TLC1.1 de Lycopersicon chilense se encuentran localizados en el LTR5'. Hemos demostrado que un fragmento de 270 pb (P270) de esta LTR, es suficiente para controlar la expresión de genes reporteros en plantas transgénicas en respuesta a heridas y congelamiento. En dicha respuesta están involucrados dos elementos de respuesta a etileno (ERE-boxes) contenidas en el promotor P270. Resultados en plantas transgénicas, indican que la expresión inducida por etileno, ácido salicílico y ABA, es dependiente de las ERE-boxes, mientras que la expresión inducida por ácido jasmónico, H2O2 y auxinas es independiente de ellas. En función de estos resultados, se analizó la respuesta del promotor P270 a los patógenos: Erwinia carotovora, Botrytis cinerea y Pseudomona syringae. Los resultados muestran que para E. carotovora y P. syringae las ERE-boxes son esenciales, mientras que para Botrytis cinerea ellas son complementarias a otros elementos cis no identificados en P270. Estos resultados indican que las ERE-boxes son un elemento en cis fundamental para la expresión de TLC1.1 tanto en la respuesta al estrés biótico como abiótico.
Financiamiento: Centro Regional de Biotecnología Silvoagrícola. Programa de Investigación en Biotecnología DIAT-UTalca

CARACTERIZACIÓN DEL TRANSCRIPTOMA EN PLANTAS DE TOMATE FRENTE A CONDICIONES DE ESTRÉS SALINO. (Characterization of transcriptome of tomato plants under salt stress conditions). Barrios P., Dorta, F., Sánchez, E., Ramírez, I., Peña-Cortés H. Centro de Biotecnología, Universidad Técnica Federico Santa María (UTFSM). Valparaíso, Chile.

Las plantas están constantemente expuestas a una serie de condiciones adversas, entre las cuales se encuentra el estrés salino. La señal de transducción vegetal frente al estrés salino consiste en vías de señalización para la homeostasis iónica y osmótica, vías de respuesta para detoxificación y vías para la regulación del crecimiento. En la naturaleza existen plantas susceptibles y tolerantes a esta condición de estrés. Las evidencias obtenidas hasta la fecha sugieren que plantas sensibles, como Arabidopsis, tendrían ciertos genes de tolerancia a salinidad comunes con plantas tolerantes. En este trabajo se pretende obtener clones de plantas de tomate que sean tolerantes a altas concentraciones salinas y para ello se utilizarán plantas de Lycopersicon chilense. Los clones seleccionados serán comparados con plantas sensibles (Lycopersicon esculentum) a nivel transcripcional. Para ello, se analizará su perfil transcripcional bajo condiciones de estrés salino mediante microarreglos. Adicionalmente, se realizarán estudios de perfiles metabólicos por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masa (GS-MS) para ambas especies en condiciones de estrés salino.
Los resultados a obtener permitirá conocer los posibles genes, vías metabólicas y metabolitos que estarían participando en la tolerancia de plantas de tomate frente a este tipo de estrés.
Financiado por CB "D. Alkalay L."

MODULACIÓN MOLECULAR DE LA VÍA OCTADECANOIDE MEDIANTE ARN INTERFERENCIA EN PLANTAS DE TOMATE (Molecular modulation of octadecanoic pathway by RNA interference in tomato plants) Sánchez, C., Peña-Cortés, H., Dorta, F., Sánchez, E., Ramírez, I. Centro de Biotecnología. Universidad Técnica Federico Santa María, Valparaíso, Chile.

Los jasmonatos son compuestos ampliamente distribuidos en el reino vegetal y participan en la regulación de las respuestas defensivas contra herbívoros y patógenos. La síntesis de ácido jasmónico (JA) ocurre a través de una vía octadecanoide inducible donde las reacciones catalizadas por la aleno óxido sintasa (AOS) y la 12-oxo-fitodienoato reductasa 3 (OPR3) corresponden a puntos regulatorios claves. El resultado de la acción de la AOS y OPR3 son la ciclopentenona ácido 12-oxo-fitodienoico (OPDA) y la fitohormona JA, respectivamente. Además de la acción biológica demostrada para JA, se ha encontrado que el precursor OPDA también se comporta como una molécula señal capaz de regular mecanismos involucrados en la respuesta a estrés. Sin embargo, los roles regulatorios de OPDA y los miembros individuales de la familia de los jasmonatos permanecen aún desconocidos. En este trabajo, se modularán los niveles endógenos de OPDA y JA, a través de la inhibición de la expresión génica de las distintas isoformas identificadas de la enzima AOS y OPR3 a nivel post-transcripcional mediante ARN interferencia (RNAi) en plantas de tomate. La estrategia utilizada en este proyecto permitirá determinar el rol individual in vivo de OPDA y los jasmonatos en la respuesta de plantas de tomate frente a diversas condiciones de estrés.
Financiado por Centro de Biotecnología "D. Alkalay L.", UTFSM.

METABOLITOS BIOACTIVOS DE NECTRIA GALLIGENA (Bioactive metabolites from Nectria galligena). Gutiérrez M., Schmeda-Hirschmann G. Universidad de Talca, Instituto de Química de Recursos Naturales, Casilla 747, Talca, Chile. E-mail: mgutierrez@utalca.cl; schmeda@utalca.cl

Nectria galligena es un hongo fitopatógeno que ataca pomáceas generando el`"cancro europeo". A partir de madera de manzano infectado se aislaron diversas accesiones del hongo que fueron cultivados en medio líquido papa-glucosa (PG) y malta-dextrosa-peptona (MDP) a 24°C con agitación hasta consumo total de la glucosa. Los medios se extrajeron con acetato de etilo y los extractos se evaluaron como antimicrobianos sobre Pseudomonas syringae, Erwinia carotovora, Penicillium notatum, Paecilomyces varioti, Alternaria alternata y Botrytis cinerea. Los dos aislados con mayor actividad y mejor rendimiento de extraíbles se cultivaron a escala preparativa. El aislamiento biodirigido de los compuestos antimicrobianos permitió obtener coletoclorin B, coletorin B, 8,9-dehidroascoclorin e ilicicolin C. La elucidación estructural se realizó mediante métodos espectroscópicos y los cuatro compuestos se informan por primera vez para Nectria galligena. Ilicicolin C fue activo frente a P. syringae (IC50 28,5 µg/ml), P. varioti y P. notatum, con halos de inhibición de 18 y 15 mm respectivamente a 50 µg/ml. 8,9-Dehidroascoclorin presentó actividad moderada frente a P. notatum mientras coletorin B y 8,9-dehidroascoclorin fueron antifúngicos sobre A. alternata. Los cuatro compuestos fueron activos como inhibidores de acetilcolinesterasa (IC50 de 30-90 µg/ml), b-glucuronidasa (IC50 de 30-45 µg/ml) pero inactivos frente a b-D-glucosidasa a 100 µg/ml.
M. Gutiérrez agradece a la Universidad de Talca su Beca de Doctorado y el financiamiento del CIBS.

 

Bioquímica - Virología - Genética

 

POLIMERIZACIÓN IN VITRO DE LA PROTEíNA FLUORESCENTE ECFTSZ-EYFP. (In vitro polymerization of the fluorescent EcFtsZ-EYFP protein). Shin, JY., Lagos R. y Monasterio O. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile

La división celular bacteriana se inicia con la formación del complejo proteico llamado divisoma, producto de la interacción secuencial de al menos doce proteínas. Entre ellas, la FtsZ es la encargada de localizar al resto al formar el anillo Z en la mitad de la célula. In vitro, la FtsZ de E. coli (EcFtsZ) polimeriza en protofilamentos y láminas e hidroliza GTP. In vivo, EcFtsZ fusionada en el carboxilo-terminal con la proteína fluorescente amarilla (EYFP) se incorpora dentro del anillo Z. Se sabe que la EcFtsZ fusionada con la proteína fluorescente verde (GFP) polimeriza in vitro, pero se desconoce: cómo se integra al anillo Z, sus propiedades dinámicas de polimerización y despolimerización y su efecto sobre la estabilidad del anillo Z. Por esto, se expresó y purificó la EcFtsZ-EYFP. SDS-PAGE mostró una banda correspondiente a su tamaño molecular y otra a EcFtsZ. La proteína en solución presentó un máximo de excitación y de emisión a 514 nm y 527 nm, respectivamente. Esta proteína co-polimerizó con EcFtsZ in vitro en forma reversible al agregar GTP. Estos resultados indican que la EYFP fusionada a la región carboxilo terminal de la EcFtsZ no interfiere con la polimerización y sugieren que esta proteína in vivo forma parte del anillo Z y afecta la dinámica de división.
Financiado por Proyecto FONDECYT 1010848

INTERACCION MOLECULAR DE PÉPTIDOS b-AMILOIDE Y ALUMINIO CON MEMBRANAS CELULARES Y SU RELACIÓN CON LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER (Molecular interaction of b-amyloid peptides and aluminum with cell membranes and its Relation with the Alzheimer's Disease). Hernández, P.L.,1 Suwalsky, M.,1 Sotomayor, C.P.,2 Bitan, G.,3 and Zatta, P.4. 1Facultad de Ciencias Químicas, Universidad de Concepción. 2Instituto de Química, Universidad Católica de Valparaíso. 3Departamento de Neurología, Harvard Medical School, Boston, USA. 4CNR-Instituto para Tecnologías Biomédicas, Universidad de Padova, Padova, Italia
Patrocinio: Puchi, M.

En las placas seniles encontradas en el cerebro de los enfermos de Alzheimer se han hallado, entre otros componentes, los péptidos beta amiloides (Ab) y iones metálicos tales como aluminio. Se sabe que los Ab (Ab40 y Ab42), aluminio y los fosfolípidos que forman parte de membranas interactúan entre sí. Sin embargo, no se conoce el efecto que pudieran tener en forma conjunta Ab y aluminio en las membranas. Por tal motivo, se estudió la interacción de los péptidos Ab40 y Ab42 con membranas de eritrocitos humanos y modelos constituidos de multibicapas de los fosfolípidos dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC) y dimiristoilfosfatidiletanolamina (DMPE) y vesículas unilamelares grandes de DMPC utilizando respectivamente las técnicas de microscopia electrónica de barrido, difracción de rayos X y espectroscopia de fluorescencia; esto se realizó en ausencia y presencia de AlCl3. También, se estudió el estado de oligomerización de Ab40 y Ab42 en presencia de los fosfolípidos anteriores y de AlCl3. Se encontró que cada Ab en presencia de AlCl3 altera las membranas y modelos estudiados de una manera diferente a la observada con cada componente por separado. Por otra parte, se observó que el estado oligomérico de ambos péptidos varía en presencia de fosfolípidos y aluminio.
Agradecimientos: Proyectos FONDECYT (1020476), CONICYT-CNR (Italy) (2002-072) y Beca MECESUP (UCO9905) (para P.H.).

CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL IN VITRO DE FTSZ TERMÓFILA DE METHANOCOCCUS JANASCHII. (Functional characterization of thermofilic Methanococcus jannaschii FtsZ). Nova E., Lagos R. y Monasterio, O. Departamento de Biología. Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

FtsZ proteína principal del anillo Z, estructura responsable de la septación en la división celular en procariontes y arqueas, presenta homología estructural con tubulina y constituyen un nuevo tipo de GTPasas. Se purificó FtsZ de Methanococcus janaschii (MjFtsZ) (sobre 95% pureza) que polimerizó in vitro de manera reversible al agregar GTP. Dado el origen volcánico y marino de la MjFtsZ se determinó el efecto de la concentración de cationes monovalentes sobre la polimerización a 55 ºC. Con KCl se encontró un máximo a 0,1 M, que disminuyó a un mínimo a 1 M, y volvió a aumentar hasta 2 M. NaCl en el mismo rango de concentración no tuvo efecto. La cinética de hidrólisis de GTP fue hiperbólica a 2 M de KCl, la KM fue 16,5 µM y la kcat de 12,5 min-1. La afinidad aparente para GTP y GDP fue de 6 µM y 174 µM, respectivamente. Microscopia electrónica de los polímeros formados en presencia de GTP, mostró hojas planas de un ancho promedio de 35 nm. Se concluye que KCl favorece en forma específica la polimerización. Al comparar los parámetros cinéticos con su homólogo mesófilo, se observa una disminución de KM y kcat lo que aumenta la inestabilidad dinámica de estos polímeros. Trabajo Financiado por FONDECYT Nº 1010848.

ESTRUCTURA-FUNCIÓN DEL DOMINIO DE TRANSACTIVACIÓN DEL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN OSEO-ESPECÍFICO RUNX2 (Structure-function study of the transactivation domain of the osseous-specific transcription factor Runx2). Bruna, C., Arriagada, G., Paredes, R., Martínez-Oyanedel, J., Bunster, M., Montecino, M.

El factor de transcripción tejido específico Runx2 es un transactivador esencial del proceso de diferenciación osteoblástica. Su importancia se debe a que estimula la transcripción de la mayoría de genes asociados al fenotipo óseo.
Para ejercer su función regulatoria, Runx2 recluta proteínas que interaccionan directamente o indirectamente con el ADN, como C/EBP, el receptor de vitamina D3 (VDR), p-300 y Smads.
Mediante ensayos de coinmunoprecipitación y GST-pull down, recientemente se ha demostrado que la interacción física entre el dominio N-terminal de VDR y Runx2 es necesaria para una activación sinérgica de genes mediada por Runx2. Deleciones de Runx2 sugieren que el dominio 230-361 estaría involucrado en dicha interacción. Por otra parte, VDR interacciona con el complejo coactivador DRIP y co activadores con actividad HAT como SRC-1 y CBP, todos necesarios para la regulación de la expresión de marcadores de diferenciación ósea.
Con el objeto de realizar estudios funcionales y estructurales con el dominio Runx2230-261, se elaboró un protocolo de purificación mediante dos sistemas de expresión: células procariontes (E.coli) y células eucariontes (sistema de expresión baculovirus-células sf9). A modo de complementar los estudios funcionales y estructurales, también se modeló la estructura tridimensional del dominio Runx2230-261.
En su conjunto, estos estudios permitirán establecer los componentes estructurales involucrados en la activación transcripcional de genes óseo-específicos.
Beca de apoyo tesis doctoral-Conicyt, Fondecyt 1030749

GENOTIPIFICACIÓN DE LA MUTACIÓN CHEK2*1100 de lC EN CASOS DE CÁNCER DE MAMA FAMILIAR DE POBLACIÓN CHILENA. (Genotyping of the CHEK2*1100delC mutation in Chilean families with familial breast cancer). González-Hormazábal P., Santibáñez E., Acevedo ML., Jara L. Programa de Genética Humana, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. pgonzalez@med.uchile.cl

En Chile, el cáncer de mama (CM) presenta la segunda tasa de mortalidad por cáncer. La incidencia ha aumentado desde 16,2/100.000 mujeres en 1998 a 26,2/100.000 en el año 2002 (MINSAL, 2003). El factor de riesgo más importante es la historia familiar (predisposición genética), siendo responsable de a lo menos el 15% de los casos. Los genes BRCA1 y BRCA2 son considerados genes mayores de susceptibilidad para CM. Las mutaciones en BRCA1/2 solo dan cuenta del 20-25% de los casos de CM familiar. Actualmente se propone que existen otros genes que contribuyen a la susceptibilidad del CM familiar. Uno de estos es CHEK2. Estudios realizados en población europea han demostrado que la mutación CHEK2*1100delC se asocia con aumento del riesgo de desarrollar CM.
En este estudio se realizó la genotipificación de la mutación CHEK2*1100delC mediante análisis de restricción en 70 probandos pertenecientes a 65 familias con tipificación de los genes BRCA, y en 57 mujeres sanas sin antecedentes familiares de CM que constituyeron el grupo control. La mutación no se detectó en ninguno de los grupos. Este resultado sugiere que en población chilena la frecuencia de la mutación CHEK2*1100 del C es menor al 1%. Para confirmar esta conclusión es necesario ampliar el tamaño muestral.

MUTACIONES EN BRCA1 Y BRCA2 ASOCIADAS AL CÁNCER DE MAMA FAMILIAR EN POBLACIÓN CHILENA. (BRCA1 and BRCA2 mutations associated with familial breast cancer in Chilean population). Ampuero, S.1, Santibáñez, E.1, Seccia, L.2, Bustamante, M.1, Catenaccio, A.1, Rodríguez, J.1, Cabrera, G.1, Ojeda, JM.3, Martínez V.1, Reyes, JM.2, Blanco R.1, Jara L.1. Programa de Genética Humana, ICBM 1 y Centro de Oncología Preventiva 3, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, CONAC2

En Chile, el cáncer de mama (CM) presenta la segunda tasa de mortalidad (13,2/100.000). El 15% de los CM corresponden a CM familiar (CMF) y se asocian a mutaciones en BRCA1 o BRCA2. A pesar del alto número de mutaciones descritas, en poblaciones específicas solo algunas se asocian al desarrollo de CM.
En este estudio, se analizó la secuencia codificante y regiones intrónicas circundantes de BRCA1 y BRCA2 en 64 familias chilenas con CMF, mediante heteroduplex-CSGE y secuenciación.
Se detectaron: 6 mutaciones (p.Glu23Fs, p.Cys61Gly; p.Phe829ter; p.Gln1111fs; p.Gln1356fs e IVS17-1G>A); 5 VSD (variantes de significado desconocido) y 14 polimorfismos en BRCA1 y 3 mutaciones (p.Leu1813fs; p.Ser1982fs y p.Leu2092fs); 4 VSD y 8 polimorfismos en BRCA2.
Nueve (14,1%) familias presentaron mutaciones y 7 (10,9%) VSD. Solo una mutación se detectó en dos familias. En consecuencia, el espectro de mutaciones en BRCA1/2 es amplio.
De las mutaciones detectadas, 3 son nuevas (p.Phe829ter y p.Gln1356fs en BRCA1; p.Leu1813fs en BRCA2) y podrían constituir mutaciones propias de la población chilena.
Fondecyt 1010800, AVON- Breast Cancer Crusade (CONAC)

Replicación de RNA, ensamblaje del genoma, y maduración de partículas del Virus de la Necrosis Pancreática Infecciosa. (RNA replication, genoma assemble and maduration of infectious pancreatic necrosis virus particles). Villanueva, R.A., Galaz, J. & A.M. Sandino. Laboratorio de Virología, Departamento de Biología, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile, P.O. Box 40, Santiago 33, Chile.

En este estudio hemos analizado la replicación del RNA, y la morfogénesis del Virus de la Necrosis Pancreática Infecciosa (IPNV), durante el ciclo infectivo. La replicación del RNA viral ocurre en el citoplasma celular, y sin asociación a subpartículas virales. Nuestros resultados son consistentes con un modelo de morfogénesis, en el cual el dsRNA genómico viral es inmediatamente ensamblado, después de su síntesis en el citoplasma, en una partícula viral semicompactada (Proviriones, 66 nm de diámetro) y no infecciosa, en la que la cápside está formada de proteínas virales maduras e inmaduras. Durante la maduracion de la cápside, los proviriones producen viriones, a través del procesamiento proteolítico de las proteínas virales precursoras restantes dentro de la cápside, la compactación de la partícula (60 nm de diámetro), y la adquisición de infectividad.
Se realizaron infecciones de células CHSE-214 con IPNV. Se utilizó un sistema de electroforesis nativa, para identificar y aislar, tanto el genoma como las partículas virales. Estos fueron caracterizados, bioquímica y molecularmente, mediante electroforesis, gradientes de CsCl, ME, titulaciones, etc.
Estos resultados son el punto de partida para el análisis molecular del ensamblaje de partículas y replicación genómica de los miembros de la familia Birnaviridae.

CAMBIOS EN LA EXPRESIÓN DE GENES EN VIDES ASOCIADOS A LAS INFECCIONES VIRALES (Changes of gene expression in grapevine associated with viral infections) Espinoza, C., y Arce-Johnson, P. Laboratorio de Bioquímica, Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. Santiago, Chile. e-mail: parce@genes.bio.puc.cl

Las infecciones virales que afectan el cultivo de la vid tienen una alta incidencia, son difíciles de controlar y afectan la calidad de las vides, causando importantes pérdidas económicas. Recientemente, se han desarrollado diversos estudios para la identificación de genes de vides relacionados con estrés abiótico. Sin embargo, no se han determinado los genes que responden a las infecciones virales en este especie. En este trabajo, con el fin de identificar genes que aumentan o disminuyen su expresión en vides infectadas con virus, se construyeron dos genotecas substractivas de cDNA (genotecas forward y reverse) a partir de plantas de V. vinifera cv. Carménère infectadas con Grapevine Leafroll Virus (GLRaV) y plantas sanas de la misma variedad,. A partir de ambas genotecas se obtuvo un total de 994 clones, cuyo rango de tamaño oscila entre los 400 y 1.000 pb. Un análisis preliminar mediante macroarreglos, utilizando sondas de cDNA de vides sanas e infectadas con GLRaV, permitió identificar 45 clones forward y 65 clones reverse. Se discutirá el análisis de estos clones y su relación con la respuesta frente a la infección viral.
Agradecimientos: Proyecto FONDEF G02S1001.

Neurociencia I

CANALES DE POTASIO DEPENDIENTES DE CALCIO DE CILIOS DE NEURONAS OLFATORIAS DE RATA (Ca2+- dependent potassium channels from cilia of olfactory neurons). Castillo K1,2, Bacigalupo J1,2, y Wolff D1. 1Departamento de Biología, Facultad de Ciencias e 2Instituto Milenio CBB, Universidad de Chile.

Las neuronas olfatorias muestran dos tipos de respuesta a olores: excitatoria (RE) e inhibitoria (RI), asociadas a un aumento y a una disminución de la frecuencia de potenciales de acción, respectivamente. Durante la RI se activan canales de potasio dependientes de calcio (KCa) presentes en los cilios olfatorios. El objetivo de este trabajo fue caracterizar biofísica y farmacológicamente en bicapas planas canales KCa ciliares, de conductancia baja (SKCa), intermedia (IKCa) y alta (BKCa), previamente identificados mediante patch-clamp en cilios de neuronas olfatorias. El canal SKCa presentó una conductancia de 16 pS, insensibilidad al voltaje y es bloqueado por apamina. Identificamos dos tipos de canales tipo IKCa. Uno, con dos estados abiertos de 30 y 50 pS, insensible a voltaje y a caribdotoxina y el otro, con una conductancia de 60 pS y que se bloquea por clotrimazol. El canal BKCa exhibió una conductancia de 210 pS, depende de voltaje y es bloqueado por caribdotoxina e iberiotoxina. La presencia de canales KCa en la membrana ciliar fue confirmada por westernblot. Nuestro trabajo respalda fuertemente la presencia de canales KCa en los cilios olfatorios y, por ende, su participación en la quimiotransducción.
Fondecyt 1020964 y Mideplan ICM P99-031-F

ALKALOIDS FROM THE CHILEAN PLANT LAUREL DEPRESS CALCIUM CHANNELS IN BRAIN CAPILLARY ENDOTHELIAL CELLS. Marco A. Delpiano1,2, José L. Martínez3. 1University of Valparaíso, Valparaíso, Chile. 2Max-Planck-Institute for Molecular Physiology, Dortmund, Germany. 3Iberoamerican University of Science and Technology, Santiago, Chile

Laurelia sempervirens, an endemic plant used traditionally as medicine by the Mapuches is known in Chile with the name of "Laurel". From Laurel was isolated a bis(benzylisoquinoline) alkaloid named isotetrandrine (ISTR) that exhibits a chemical structure very similar to another bis(benzylisoquinoline) known as tetrandrine (TR), isolated from the Chinese medicinal plant Stephania tetrandra. Both exhibit hypotensive properties. We investigated these properties on isolated endothelial cells from rat brain capillaries that exhibited voltage-gated calcium chan-nels. Cells were studied with the patch-clamp technique on the whole cell modus and superfused within a small chamber (200 µl) with an external and internal solution containing N-methyl-D-glucamine (NMDG) instead of Na+ and K+ ions and 10 mM CaCl2 in the external solution. ISTR and TR were able to depress almost totally the Ca2+ currents of capillary endothelial cells. The concentration of ISTR for a maximal inhibition of the Cas channel was 4 ± 0.8 µM with an IC50 of 0.8 ± 0.1 µM (n = 14) and of TR was 60 ± 4.3 mM with an IC50 of 19 ± 1.8 µM (n = 10). In conclusion, the hypotensive properties of ISTR and TR could be explained by the inhibition of Ca2+ influx, impairing secretion of vasoactive substances and resulting into vasodilatation and reduction in blood pressure, a mechanism observed in cerebral microcirculation.

REGULACIÓN DE LA RESPUESTA A CALCIO DE CANALES DE LIBERACIÓN DE CALCIO DE CORTEZA CEREBRAL. (Regulation of calcium dependence of calcium release channels from brain cortex). Bull, R., Maass, R., Finkelstein, J.P., e Hidalgo, C. ICBM, y FONDAP CEMC, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, CHILE.

Los canales de calcio sensibles a ryanodina (RyR) participan en la amplificación de señales de calcio, activándose al aumentar la [Ca2+] citoplasmática en el rango µM. Estudiamos la respuesta a calcio de canales RyR de corteza cerebral de rata incorporados en bicapas en condiciones de potencial redox controlado, en presencia de dadores de NO y con [Mg2+] y [ATP] libres cercanas a las fisiológicas. A un potencial redox citoplasmático de _220 mV (GSH/GSSG = 40/1), los canales se activaron pobremente por Ca2+ alcanzando el tiempo fraccional abierto (Po) valores menores que 0,05. Al disminuir el potencial reductor de -220 a -180 mV, aumentó Po para todas las [Ca2+] usadas. Este aumento se explica por una reducción de Ka para calcio y por un incremento de Ki para calcio. La exposición a 15 µM SNAP produjo un efecto similar, tanto con PO2 de 150 como de 10 mmHg, debido fundamentalmente a una reducción de Ka. En presencia de 0,8 mM [Mg2+] y 0,5 mM [ATP], ~1 µM [Ca2+] solo activó los canales menos reducidos. La amplificación de las señales de calcio por los RyR podría modularse por cambios redox y/o por NO a [ATP] y [Mg2+] celulares.
Financiado por Proyectos FONDECYT 1040717 y FONDAP 15010006.

Rol de la subunidad g2 del receptor GABAA en la plasticidad sináptica de la corteza visual. (Role of GABAA receptor subunit g2 in the synaptic plasticity of visual cortex). Rozas, C., Morales B. Departamento de Biología, USACH. Patrocinio: Luis Velásquez.

La plasticidad sináptica en la corteza visual tiene lugar dentro de un corto período de tiempo postnatal llamado período crítico (PC). La capacidad para inducir potenciación y depresión de larga duración (LTP, LTD) en ratas tiene un PC de alrededor de 5 semanas. Sin embargo, los factores que determinan el término del PC son controversiales. Nosotros mostramos que la maduración de las corrientes GABAérgicas, la cual se alcanza a las 5 semanas, participa en establecer este período.

Corrientes GABAérgicas evocadas desde la capa IV fueron registradas en las capas II/III en rebanadas de 300 µm mediante la técnica "whole cell". LTP y LTD evocadas desde la materia blanca fueron registradas extracelularmente en las capas II/III. Las rebanadas fueron sometidas a inmunodetección de subunidades del receptor GABAA. Los resultados muestran una atenuación mayor de las corrientes postsinápticas inhibitorias en ratas de 3 semanas que aquellas de 5 semanas de edad. Muestran también que la capacidad de inducir LTP y LTD declina durante el desarrollo. Interesantemente, encontramos que ambos efectos se correlacionan con un decremento en la expresión de la subunidad g2 del receptor GABAA. Las evidencias sugieren que la participación de las corrientes GABAérgica en establecer el PC para plasticidad sináptica se puede deber en parte a cambios estructurales del receptor GABAA.
FONDECYT:1030220,DICYT-USACH.

EL TRÁFICO DE CANALES DE K+ SHAKER A LA MEMBRANA PLASMÁTICA DE OVOCITOS DE XENOPUS ES REGULADO POR RESERVORIOS DE CA2+ SENSIBLES A IP3. (Traffic of Shaker K+ channels to the plasma membrane of Xenopus oocytes is regulated by IP3 sensitive Ca+2 stores). Gayol S., González V., Neely A. y Naranjo D. Centro de Neurociencia de Valparaíso. Universidad de Valparaíso.

El tráfico de canales de K+ tipo Shaker a la membrana plasmática se estudió en ovocitos de Xenopus. Para arrestar el proceso de transporte, 8 horas después de inyectarlos con cRNA de Shaker, los ovocitos fueron incubados a 4°C por 12-24 hr para luego medir las corrientes iónicas a 22-24°C en "voltaje clamp" de dos microelectrodos. La incorporación de canales a la membrana plasmática se manifiesta como un incremento de hasta 5 veces en las corrientes de K+ en los primeros 90 minutos de registro. Este incremento no fue bloqueado por Brefeldina-A o Cicloheximida aplicadas durante el arresto. Por otra parte, Western blots contra el epitopo HA integrado al extremo N-terminal de Shaker muestran una especie glicosilada de la proteína que no se observa en los ovocitos arrestados, sugiriendo que a 4°C la biogénesis de una proporción significativa de estas proteínas de membrana se detiene antes de terminar su maduración. Etapas posteriores en el tráfico a la membrana requerirían receptores de IP3 activos ya que el aumento de corrientes, posterior al arresto, es inhibido por heparina o un anticuerpo contra el extremo C-terminal del receptor de IP3.
FONDECYT 1030285-DIPUV 302004

NUEVO MECANISMO DE INACTIVACION LENTA EN CANALES DE POTASIO DEPENDIENTES DEL VOLTAJE. (A new slow inactivation mechanism in voltage gated potassium channels). Oliva C., González V., Neely A., y Naranjo D. Centro de Neurociencia de Valparaíso, Universidad de Valparaíso.

En la inactivación rápida de los canales de potasio sensibles al voltaje el extremo N-terminal de la proteína ocluye la boca interna de la vía de conducción. Este fenómeno es retardado por la aplicación intracelular de compuestos que bloquean la boca interna del poro, como el Tetraetilamonio (TEA). La extirpación del extremo N-terminal del canal de potasio Shaker elimina esta inactivación rápida, sin embargo, este aún es capaz de inactivarse durante despolarizaciones prolongadas. Esta inactivación lenta es retardada por la aplicación externa de TEA. Utilizando varias técnicas de voltage-clamp hemos revisitado este fenómeno en Shaker expresados en ovocitos de Xenopus. En ovocitos completos, abiertos, y en parches de membrana adosados al ovocito, la inactivación ocurre con una constante de tiempo de 4-8 seg. Sorprendentemente, este valor parece ser insensible a la adición externa de TEA o k-PVIIA, una toxina peptídica que bloquea externamente el poro. Más aún, en parches de membrana escindidos del ovocito, la inactivación procede 4-20 veces más rápido y sí es sensible a TEA y k-PVIIA. Estos datos revelan un nuevo mecanismo de inactivación lenta que ocurre con la membrana intacta y sugieren que el estrés mecánico producido por la escisión del parche altera significativamente las propiedades de las proteínas de membrana.
FONDECYT 1030285-1020899. Oliva es becaria CONICYT.

MADURACIÓN DE LA CONECTIVIDAD SINÁPTICA DEL HIPOCAMPO DEL MUTANTE DE GLIA taiep. (Maturation of synaptic connectiviy in the hippocampus of glial mutant taiep rat). Bonansco C., Fuenzalida M., Molina C., Olivares V. y Roncagliolo M. Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Valparaíso, CHILE.

En circuitos monosinápticos excitatorios del mutante taiep, las respuestas postsinápticas evocadas exhiben un patrón asincrónico, sensibles a tetrodotoxina (TTX), cuya ocurrencia aumenta con la edad. Estas alteraciones coinciden con el inicio de la desmielinización y subsecuente astrogliosis que ocurre durante el desarrollo neonatal del SNC del mutante. Para evaluar la conectividad sináptica durante el desarrollo (P6-P30) y su relación con la transmisión asíncrona en este mutante, se registraron la descarga presináptica (dP), el potencial postsináptico de campo (PPSc) y las corrientes postsinápticas espontáneas (CPSe) en el circuito CA3-CA1, en rebanadas de hipocampo. En taiep las respuestas poblacionales evocadas presentaron una morfología y latencia similares al grupo control. La relación de amplitudes PPSc/dP aumentó significativamente con la edad, alcanzando valores similares en ambos grupos. Tanto en control como en taiep, la amplitud y frecuencia de la actividad espontánea aumentó en función de la edad. En taiep mayores, la frecuencia de los CPSe fue mayor que la observada en hipocampos normales. Tras la aplicación de TTX, los eventos en miniatura en ratas taiep mostraron valores de frecuencia y amplitud similares al grupo control de la misma edad. Estas evidencias sugieren que en taiep 1) la conectividad sináptica del circuito CA3-CA1 aumenta con la edad de manera similar al grupo control, 2) la mayor frecuencia de la actividad espontánea se corresponde con la contribución de eventos asincrónicos dependientes de potencial de acción.
DIPUV 28/2002 (CB) y DIPUV 30/2003 (MR).

CARACTERIZACIÓN DE RECEPTORES NICOTÍNICOS EN NEURONAS DEL GANGLIO PETROSO DE GATO EN CULTIVO (Characterization of nicotine receptors in cultured cat petrosal ganglion neurons). Valdés, V., Varas, R., Iturriaga, R., 1Alcayaga, J. 1Lab. Fisiología Celular, Facultad Ciencias, Universidad de Chile; Lab. Neurobiología, P. Universidad Católica de Chile.

Las neuronas del ganglio petroso que inervan el cuerpo carotídeo son activadas por neurotransmisores liberados desde las células quimiorreceptoras. La acetilcolina, presente en el cuerpo carotideo, genera corrientes de entrada dosis-dependiente, despolarización y potenciales de acción en cerca del 60% de las neuronas petrosas en cultivo. Estos efectos, remedados por nicotina y bloqueados por mecamilamina, podrían deberse a la activación de subunidades a7 y a4 del receptor nicotínico (nAChR) descritos en neuronas petrosas. Por ello estudiamos los efectos de agonistas y antagonistas específicos de estas subunidades del nAChR.
Ganglios petrosos, extraídos de gatos machos adultos anestesiados con pentobarbona (40mg/Kg ip) se disociaron y se cultivaron en una atmósfera de aire-5% CO2 saturada con agua a 38ºC. Medimos con técnicas de fijación de voltaje en configuración de célula completa las corrientes evocadas por acetilcolina, citisina y sus derivados bromados en neuronas cultivadas por 5-15 días.
La acetilcolina y los agonistas provocaron corrientes de entrada dosis-dependientes (0.01-1mM), con el siguiente orden de potencia: 3Br-Citisina >> Acetilcolina = Citisina > 5Br-Citisina. Las corrientes fueron bloqueadas por hexametonio 1µM.
Estos resultados sugieren que las corrientes de las neuronas petrosas inducidas por acetilcolina son mediadas por nAChR con alto contenido de subunidades a7.
Financiamiento: FONDECYT 1040638 y 1010951

Neurociencia II

LA EXPRESIÓN DE HIDROCEFALIA HEREDITARIA EN LOS RATONES MUTANTES hyh ES INFLUENCIADA POR FACTORES MATERNOS Y POR EL SEXO. (The expression of inherited hydrocephalus is influenced by maternal factors and by sex). Batiz LF, Rodríguez EM. Instituto de Histología y Patología, Universidad Austral de Chile. FONDECYT 1030265

Los ratones mutantes hyh desarrollan, durante la etapa embrionaria, una hidrocefalia de tipo hereditaria. Recientemente se ha determinado que la mutación afecta al gen que codifica para la proteína alfa-Snap, en el cromosoma 7. Sin embargo, estudios neuropatológicos sugieren que factores no-genéticos influyen en la evolución del proceso hidrocefálico. Además, datos epidemiológicos preliminares obtenidos en nuestro laboratorio indican que tanto factores maternos y/o intrauterinos como factores relacionados al sexo podrían influir en la incidencia y severidad de la hidrocefalia. El objetivo del presente trabajo fue determinar si existen diferencias en la expresión de la patología (incidencia y severidad), en relación a la paridad y edad materna, y en relación al sexo. Se estudió la incidencia de hidrocefalia y su evolución clínico-patológica mediante el seguimiento de un total de 1.690 animales (231 partos). La incidencia general de hidrocefalia fue de 22,4%, afectando a 2 machos por cada hembra. La multiparidad provoca una disminución en la frecuencia de crías hidrocefálicas por parto y en la razón de masculinidad; sin embargo, la edad materna no influye en ninguna de estas variables. La severidad del proceso hidrocefálico, analizada en función de la evolución clínica, la ganancia de peso y la mortalidad, indica que esta es significativamente mayor en los machos que en las hembras. Se concluye que existen (1) factores epigenéticos relacionados con multiparidad materna (¿hormonales? ¿lactancia?) que influyen en la expresión de la mutación y (2) factores relacionados al sexo (genéticos u hormonales) que determinan una mayor incidencia y severidad de la patología en los machos. Estudios futuros permitirán determinar los mecanismos involucrados en esta interacción genotipo-ambiente.

CARACTERÍSTICAS COMPARABLES ENTRE LA SUBPLACA DE MAMÍFEROS Y NEURONAS PIONERAS (NP) DE AVES Y REPTILES. (Comparable features between mammalian subplate and pioneers neurons of birds and reptiles). Montiel, J.1,2., Villalón, A.1,2, Carmona, C.1. Aboitiz, F1. Departamento de Psiquiatría, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica1; Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Diego Portales2.

La subplaca es una capa transiente dispuesta bajo la placa cortical durante la corticogénesis de mamíferos. Determina el ingreso radial de aferentes talamocorticales propio de la neocorteza y se constituye por neuronas generadas tempranamente mediante dos tipos de migración: radial desde la zona ventricular y tangencial desde el subpalio. Muchas de estas neuronas tangenciales formarán NP que son las primeras en proyectar corticofugalmente; su origen parece similar a las NP de la zona marginal (ZM). Proponemos que células comparables a NP de la ZM y subplaca de mamíferos están presentes durante el desarrollo del palio dorsal (PD) de aves y reptiles, localizándose en la ZM en lugar de disponerse además bajo la placa cortical. Estas células dirigirían aferentes talámicos tangenciales. Usando trazadores e inmunohistoquímica durante el desarrollo del PD del lagarto Liolaemus tenuis (estadios 19-35), y del ave Gallus gallus (estadios HH30-46), hemos encontrado que las proyecciones desde el tálamo dorsal al PD colocalizan con células GABA y Calretinina positivas. Combinando estas técnicas con marcación de migración tangencial del subpalio al PD hemos establecido que estas células poseen un origen subpalial comparable al de la subplaca de mamíferos.
Apoyo Tesis Doctoral CONICYT
Núcleo Milenio de Neurociencias Integradas

Efectos de la asfixia perinatal en la Plasticidad hipocampal. (Effects of perinatal asphyxia on the hipocampal plasticity). Morales P1, Huaiquín P1, Reyes P1, Klawitter V1, Bustamante D1, Fiedler JL2 and Herrera-Marschitz M1. 1Programa de Farmacología Molecular & Clínica, ICBM, Facultad de Medicina; 2Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de Chile.

La asfixia en el momento del nacimiento implica un insulto metabólico que predispone al desarrollo de trastornos neurológicos y/o psiquiátricos. Así, hemos observado que la asfixia perinatal desencadena muerte neuronal del tipo apoptosis y neurogénesis en el hipocampo de la rata.
La asfixia se induce por inmersión de fetos contenidos en cuernos uterinos, en un baño a 37°C, durante 0-20 min. Siete días después del insulto, ratas controles y asfixiadas reciben BrdU (50 mg/kg,ip) un marcador de proliferación antes de ser eutanasiadas. Los cerebros son fijados y tratados para inmunohistoquímica usando anticuerpos contra BrdU, y MAP-2, un marcador neuronal. La apoptosis se estudia observando los cambios de la morfología nuclear con Hoechst y la degradación del DNA con Tunel.
En los hipocampos de ratas asfixiadas se observa un incremento significativo de apoptosis en la región CA3 y en el giro dentado. Paralelamente en esta última región se observa un incremento de la proliferación neuronal. Este último efecto podría contribuir a un proceso de reparación y neuroprotección del sistema nervioso central a injurias metabólicas. Estos resultados indican además un efecto diferencial de la asfixia en el hipocampo.
Agradecimientos: DID # I2-02/8-2, Fondecyt #103-0521.

EFECTO MODULADOR DE ENDOTELINA-1 SOBRE LA QUIMIORRECEPCIÓN CAROTÍDEA. (Modulatory effect of endothelin-1 on carotid chemoreception). Rey, S., Del Río, R., León, CG., Iturriaga, R. Laboratorio de Neurobiología, P. Universidad Católica de Chile.

Se ha propuesto que las células glómicas del cuerpo carotídeo (CC) son los receptores primarios de la hipoxia, hipercapnia y acidosis. En respuesta a los estímulos fisiológicos, las células glómicas liberarían uno o más transmisores que aumentan la descarga quimiosensoriales en el nervio carotídeo. Una gran parte del CC está formado por vasos de resistencia y capilares que mantienen un flujo sanguíneo alto. Luego, es posible que moléculas vasoactivas como las endotelinas modulen la quimiorrecepción. En CCs extraídos de gatos anestesiados, estudiamos la expresión de ET por inmunohistoquímica y el efecto de endotelina 1 (ET-1) sobre la descarga quimiosensorial en preparaciones in situ e in vitro, perfundidas intravascularmente y en una preparación superfundida in vitro sin efectos vasculares. ET-1 (0.01-1 µg) aplicada intravascularmente produjo una potente excitación quimiosensorial dosis-dependiente, que fue bloqueada completamente por bosentan, un antagonista inespecífico de receptores de ET A y B. Sin embargo, ET-1 aplicada al CC superfundido no aumentó la descarga, aunque en dosis altas (60 µg) potenció la respuesta a nicotina. La inmunohistoquímica para ET mostró principalmente marcación interlobular en el CC. Nuestros resultados sugieren que las endotelinas son moduladores excitatorias el proceso quimiosensorial, actuando predominantemente por vasoconstricción. Sin embargo, en concentraciones altas podrían tener efectos directos sobre las células glómicas.
Financiamiento FONDECYT 1030330 y PG-22/04 (Escuela de Medicina PUC).

DENSIDAD ESPECTRAL Y RELACION TEMPORAL ENTRE SEÑALES NEURONALES DURANTE EL PROCESAMIENTO DEL LENGUAJE. (Spectral density and temporal relation between neuronal signals during language processing) Brunetti, E. P.1,2, Aboitiz, F 2. 1Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, 2Laboratorio de Neurociencias Cognitivas, Departamento de Psiquiatría, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. Núcleo Milenio de Neurociencias Integradas.

En el presente estudio se analizaron los cambios en el espectro de poder de las señales electroencefalográficas a distintas frecuencias y en distintas regiones, y el establecimiento sincronía de fase entre ellas, durante el procesamiento de estímulos linguísticos. Se registró la actividad a nivel del cuero cabelludo de sujetos diestros, sanos, mediante un arreglo denso de electrodos (80 canales, Neuroscan®), durante la presentación auditiva de palabras y logotomas, y durante la generación mental de verbos. Se realizaron análisis tiempo-frecuencia sobre las señales considerando su naturaleza no estacionaria. Luego se calculó la fase instantánea de la oscilación en cada frecuencia entre un y cien ciclos por segundo, sobre cada electrodo. Se logró determinar un aumento de poder en rango theta, alfa y gama a latencias específicas post-estímulo que se relacionaron a la aparición de cambios en el voltaje promedio sobre cada electrodo, para todas las categorías semánticas de palabras presentadas, pero con un patrón espacial específico, y la aparición de sincronía de fase postestímulo, con un patrón similar. La duración de actividad en rango theta se asoció a la imaginería mental de verbos y a los tiempos de reacción.

OSCILACIONES GAMA/BETA EN EL Potencial de campo local (PCL) en bulbo olfatorio (BO) de ratas juveniles. (Gamma/beta oscillations of the Local Field Potential in the juvenile rat's olfactory bulb) Márquez N.; Babul, C. y Aylwin, M. Centro de Neurociencias Integradas, Programa de Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina y Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

Oscilaciones del PCL en el BO participan en procesos de discriminación y aprendizaje de odorantes. En ratas adultas se observa una oscilación gamma (30-90Hz) en ausencia de odorantes en la mitad de la inspiración y cuya amplitud varía al estimular el sistema olfatorio. La oscilación beta (10-25Hz) ocurre durante la estimulación con odorantes al pasar de espiración a inspiración.
Estudiamos la presencia de oscilaciones en la banda gamma y beta en el PCL de rata durate el desarrollo postnatal. Registramos simultáneamente PCL 16 puntos del BO de ratas (3 semanas) anestesiadas con uretano e inmovilizadas en un estereotáxico, utilizando electrodos de Michigan. El ciclo respiratorio se midió con una termocupla. Estímulos (hexanal, isoamil acetato y aire) fueron presentados en períodos de 2 s cada 10 s alternadamente 10 veces cada uno.
De 11 sitios registrados, 5 muestran oscilaciones gama en ausencia de odorantes (40 Hz) durante la inspiración. De estos, 2 muestran una disminución significativa de la amplitud en gama junto con la aparición de oscilación beta (20 Hz, hexanal), durante la inspiración. Los restantes sitios registrados no muestran respuesta a odorantes ni oscilaciones gama significativas en ausencia de estímulo.
Estos datos sugieren que ratas juveniles presentan oscilaciones gama y beta asociados al ciclo respiratorio similares a las observados en animales adultos.
Financiamiento: Proyecto ICM P01-007F, Beca MECESUP UCO0214

"MALNUTRICIÓN OCULTA" DURANTE LA GESTACIÓN: EFECTO EN LA POTENCIACIÓN DE LARGO PLAZO CORTICAL Y EN LA MEMORIA VISUO-ESPACIAL DE LA RATA ("Hidden malnutrition" during gestation: Effect on cortical long-term potentiation and visuo-spatial memory in the rat).`Mondaca, M.1, Fernández, V.2, Burgos, H.3, Hernández, A.4, Pérez, H.1, Valladares, L.1, Sierralta, W.1, Soto-Moyano, R.1 1INTA, Universidad de Chile, 3ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, 2Esc.Psicol., Universidad Santo Tomás, 4Fac. Quim. Biol., USACH.

Noradrenalina central puede influenciar críticamente la memoria y el aprendizaje, así como la potenciación de largo plazo cortical. Dado que la malnutrición proteica suave (malnutrición oculta) durante la gestación induce sobre-expresión del adrenorreceptor a2C en la neocorteza de las crías, en el presente estudio se investigó en ratas adultas sometidas a esta forma de malnutrición: (i) la potenciación de largo plazo (PLP), inducida in vivo en las cortezas frontal y occipital mediante shock tetanizantes; y (ii) la memoria visuo-espacial, evaluada mediante el laberinto radial octogonal de Olton. Los resultados muestran que la malnutrición prenatal fue capaz de prevenir la inducción de PLP en ambas regiones corticales. Junto a esto, las ratas malnutridas presentaron un aumento significativo en el número de errores y en el tiempo de recorrido en el laberinto de Olton. Se sugiere que los déficits en la potenciación sináptica cortical y en la memoria visuo-espacial que presentan las ratas malnutridas durante la vida adulta pueden estar relacionados a la sobreexpresión de adrenoreceptores a2C en la neocorteza que presentan estos animales durante la vida postnatal temprana.
FONDECYT 1030729.

Biología Celular - Inmunología

EXPRESIÓN GÉNICA EN CÉLULAS INFECTADAS CON HTLV-1 DEPENDIENTE E INDEPENDIENTE DEL FACTOR DE CRECIMIENTO (Growth factor dependent and independent gene expresión in HTLV-1 infected cells). Fung, M., Chu, Y.-L., Fink, L., Tonkyro, A. and McGuire, K. Department of Biology, San Diego State University

The human T cell leukemia virus, HTLV-1, infects and transforms CD4+ T cells to cause leukemia. Tax, the oncogene of the virus, is responsible for much of the deregulated growth that accompanies T cell infection but it can not, by itself, lead to the transformation of T cells at a significant frequency. Tax-expressing cells must lose their dependence on interleukin 2 (IL-2), a T cell growth factor. One transcription factor (TF) activated by IL-2 is STAT5. Nontransformed cells retain their dependence on IL-2 for STAT5 activation while in leukemic cells activation is constitutive. We used microarray analyses and bioinformatics to identify genes responding to IL-2 in primary and Tax-immortalized human T cells. These analyses showed that IL-2 upregulates genes in Tax-immortalizd cells that do not respond to IL-2 in primary cells. Three of these genes encode the Tax-responsive IL-5, IL-9 and IL-13 cytokines, known to alter cell growth in vivo. Using a novel alignment matrix and ChIP, we demonstrate for the first time that, at least some, if not all, of these genes are targets of STAT5. These results suggest that the loss of IL-2 dependence in leukemia requires STAT5 activation for the expression of genes that drive the long-term growth of HTLV-1 transformed cells.

 

GLUCOCORTICOIDES AUMENTAN COOPERATIVAMENTE LA ACTIVACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE TLR2 INDUCIDA POR MOLÉCULAS PRO-INFLAMATORIAS. (Glucocorticoids cooperatively increase TLR2 expression induced by proinflammatory molecules). Montes, C., Gutiérrez, A., Castro, P., Maass, C., Hermoso, M.A. Laboratorio de Inmunidad Innata, Programa de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Proyecto Fondef DO2I1088.

En mamíferos el reconocimiento inicial de la infección es mediada por los receptores tipo Toll (TLR). El TLR2, uno de los integrantes de esta familia de proteínas, se expresa en células del sistema inmune y de epitelio y reconoce patrones moleculares de bacterias Gram-positivas. La unión de un agonista al TLR2 induce la activación del factor nuclear kB (NFkB) que desencadena la producción de genes proinflamatorios.

Los glucocorticoides (GC) son los agentes más utilizados en el tratamiento de enfermedades inflamatorias. Sin embargo, se desconoce el papel que juegan los GC sobre la expresión de genes de la inmunidad innata como TLR2. La administración conjunta de agentes proinflamatorios como lipopéptidos bacterianos sintéticos (Pam3Cys-Ser-(Lys)4; sBLP)o TNFa y/o GC induce un aumento de la expresión del TLR2 en un modelo celular de epitelio pulmonar (células A549) y en una línea celular estable que sobreexpresa el TLR2. Estudiamos el efecto de TNFa o sBLP y/o GC sobre la expresión de TLR2. Evaluamos, además, las vías intracelulares que regulan la transcripción de TLR2 utilizando constructos mutantes del promotor de TLR2 y de vías claves de señalización. La participación de TLR2 en estas condiciones representaría un mecanismo para potenciar reacciones pro-inflamatorias frente a la invasión generalizada por patógenos.

LA INMUNIZACIÓN CON CÉLULAS DENDRÍTICAS MODULA LA ARTRITIS MURINA INDUCIDA POR COLÁGENO. (Immunization with dendritic cells modulates the murine collagen induced arthritis). Salazar, L; Aravena, O; Abello, P; Aguirre, A; González, F; González, C; Aguillón JC. Programa Disciplinario de Inmunología. ICBM. Facultad de Medicina. Universidad de Chile.

INTRODUCCIÓN: La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria autoinmune que afecta al 1% de la población mundial. El modelo murino de artritis inducida por colágeno tipo II (CIA), ha permitido estudiar los posibles mecanismos que regularían esta patología. Las células dendríticas (DCs), procesan y presentan antígenos a los linfocitos T, iniciando la respuesta antígeno específica. Al igual que en la AR, las DCs participan en el proceso autoinmune observado en la CIA.
MÉTODOS: La CIA fue inducida a ratones DBA/1LacJ inmunizados con colágeno bovino tipo II. La evaluación histológica de las articulaciones se realizó mediante tinción hematoxilina-eosina. Las DCs derivadas de médula ósea murina y evaluadas por citometría de flujo, fueron inmunizadas por vía intraperitoneal.
RESULTADOS: El modelo murino CIA ha sido establecido con éxito en nuestro laboratorio evidenciando claros cambios histológicos como hiperplasia de la membrana sinovial e infiltración celular y clínicos como un aumento del índice de volumen e índice artrítico. La inmunización con DCs pulsadas con colágeno tipo II no mostró variar los índices artríticos y de volumen de la CIA, mientras aquellas DCs sin pulsar demostraron tener un efecto potenciador de la evolución de la CIA.
CONCLUSIÓN: Las DCs presentan una capacidad moduladora sobre el modelo murino de artritis.
Fondecyt 1040860. Mecesup 00115.

A SYNTHETIC PEPTIDE HOMOLOGOUS TO THE FUNCTIONAL DOMAIN OF HUMAN INTERLEUKIN 10 INHIBITS IN VITRO MATURATION AND DIFFERENTIATION OF HUMAN MONOCYTES TO DENDRITIC CELLS. (IT9302, péptido homólogo al dominio funcional de la interleuquina 10, inhibe la maduración y diferenciación de monocitos a células dendríticas humanas). López M., Pérez C., Estrada L., Larsen C., Kiessling R. and Salazar-Onfray F. * Disciplinary Program of Immunology, Institute of Biomedical Sciences, Faculty of Medicine, University of Chile, Santiago, Chile. FONDECYT N°1031005

IT9302, nanomeric peptide (AYMTMKIRN), homologous to the C-terminal of the human IL-10 sequence, was previously demonstrated by us, to mimic several described effects of the cytokine, including down-regulation of MHC class I and TAP1 and TAP2 expression in human melanomas and increasing of tumor sensitivity to NK cells. In several other studies, IL-10 has been demonstrated to inhibits monocyte-dendritic cells(DC) differentiation, mediated by GMCSF and IL-4, and maturation of DC, affecting the expression of several DC surface markers including CD36,CD83,MHC class I and Class II. In the present report, we have investigated the in vitro effect of the peptide IT9302 in the differentiation of monocytes derived DC, and in the maturation of DC. Our results showed that the peptide can prevent the differentiation of monocytes to DC mediated by IL-4 and GM-CSF, affecting the expression of MHC class I, MHC class II, CD36 and CD14 markers. Similarly, TNF-alpha induced maturation of immature DC after six days in vitro incubation can be avoided by the presence of IT9302 peptide or rhIL-10, affecting also MHC class I and II expression and also CD83. These phenotypic changes are in line with observed functional changes on peptide treated DC, including phagocytic capacity, DC mediated induction of allogenic T cell proliferation and DC induced IFN-g production by T cells. In summary, DC produced in the presence of IT9302 has phenotypic and functional properties of associated to inhibitory DC cells. The capability of produce in vitro inhibitory DC cells using a synthetic peptide may be a valuable tool in the immune therapy of autoimmune diseases.

 

CINÉTICA DE EXPRESIÓN DEL FACTOR DE NECROSIS TUMORAL (TNF) Y RESPUESTA CLÍNICA, EN RELACIÓN CON POLIMORFISMOS DEL PROMOTOR DE TNF EN PACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE TRATADOS CON ANTICUERPOS MONOCLONALES ANTI-TNF. (Kinetics of Tumor Necrosis Factor (TNF) expression and clinical outcome in relation with TNF promoter polymorphisms in rheumatoid arthritis patients treated with anti-TNF monoclonal antibodies). Catalán, D1*; Soto, L3; Llanos, C1,3; Cruzat, A1,4; Sabugo, F3; Schiattino, I2; Cuchacovich, M3; Aguillón, J.C1. 1Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, 2Escuela de Salud Pública, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. 3Hospital Clínico Universidad de Chile. 4Interna Medicina.

Adalimumab es un anticuerpo monoclonal (Acm) humanizado anti-TNF que ha demostrado ser efectivo en el tratamiento de la artritis reumatoide (AR). En tanto, los polimorfismos (SNP) del promotor de TNF, en las posiciones -238 y -308 (GÆA) se han asociado con AR y niveles de TNF elevados. Reclutamos 65 pacientes con AR, los cuales recibieron tratamiento con adalimumab por 4 meses. Estos fueron evaluados clínicamente, midiéndose sus niveles de TNF sérico. La genotipificación para -238 y -308 SNP se efectuó por RFLP-PCR. Observamos una disminución de la sintomatología, junto con un incremento en los niveles de TNF. Se detectó una mejor respuesta clínica en pacientes con genotipo -308 G/G que en aquellos con G/A. Este estudio demuestra la utilidad de adalimumab en el tratamiento de pacientes chilenos con AR, e indica que el incremento en los niveles de TNF sérico sería una medida objetivable de este efecto.
Fondecyt N° 1040439, 1040860 * Beca Conicyt

Localización de glucoquinasa y proteÍna reguladora de la glucoquinasa en Celulas Gliales. (Glucokinase and glucokinase regulatory protein localization in glial cells). Millán, C., Martínez, F., Nualart, F., García, MA. Departamento de Biología Celular. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad de Concepción.

La homeostasis de la glucosa es controlada a nivel periférico por proteínas como la glucoquinasa (GK) y la proteína que controla la localización intracelular de la GK (GKRP). Algunos estudios han sugerido la expresión de GK y GKRP en el hipotálamo, sin embargo no precisan el tipo celular que expresa estas proteínas (glia o neurona). En el hipotálamo existen núcleos neuronales que controlan el balance energético en estrecha relación con el células gliales que presenta una localización preferencial para detectar cambios en la concentración de glucosa. Estas células gliales expresan el transportador de glucosa GLUT2. Utilizando RT-PCR se determinó la expresión del mRNA para GK y GKRP en hígado, páncreas e hipotálamo. Mediante hibridación in situ definimos que el mRNA para GK se localiza principalmente en las células gliales. A través de inmunocitoquímica determinamos que GK y GKRP se expresan preferencialmente en la glia ependimaria que expresa GLUT2. In situ, GK está localizada principalmente perinuclear, en cambio GKRP se encuentra citoplasmática. Mediante PCR en tiempo real y la implementación de cultivos enriquecidos en glia hipotalámica, pudimos determinar un aumento en la expresión de GLUT2, GK y GKRP por glucosa. Estos resultados nos permiten sugerir que las células gliales estarían capacitadas para detectar cambios en los niveles de glucosa. DIUC 203.031.094-1.

Sobreexpresión del receptor AT1 y AT2 para angiotensina II: viabilidad del fibroblasto cardiaco y cardiomiocito. (AT1 and AT2 receptor overexpression on cardiac fibroblast and cardiomyocyte viability). Soto D, Troncoso R, Chiong M, Contreras A, Lavandero S. Centro FONDAP Estudios Moleculares de la Célula, Universidad de Chile.

Cardiomiocitos y fibroblastos son los principales tipos celulares del corazón. Estudios clínicos muestran que angiotensina II (Ang II) induce hipertrofia y fibrosis cardiaca. Ang II activa receptores AT1 produciendo hipertrofia e hiperplasia mientras que la estimulación de los AT2 se asocia a muerte celular. En este trabajo se evaluaron las acciones de Ang II en cultivos primarios de cardiomiocitos (CPC) y fibroblastos cardiacos (CPF) que sobreexpresan AT1 o AT2.
La sobreexpresión de AT1 y AT2 en CPC y CFC obtenidos de ratas neonatas se logró por transducción con adenovirus específico que coexpresa la proteína fluorescente GFP. La viabilidad se evaluó mediante azul de tripán, MTT-formazan y citometría de flujo con yoduro de propidio. Ang II disminuyó significativamente la viabilidad de fibroblastos que sobreexpresan AT1 respecto a los controles. En contraste, Ang II no cambió la viabilidad de fibroblastos que expresan AT2 ni en los controles. Interesantemente, este péptido no tuvo efecto sobre la viabilidad de cardiomiocitos que expresan AT1 o AT2.
Se concluye que la activación de los receptores AT1 por Ang II afecta diferencialmente la viabilidad de fibroblastos y cardiomiocitos, mientras que la activación de los AT2 no la modificó en ambos tipos celulares.
DS es becario Doctorado CONICYT. FONDAP 1501006

GEN DE antisentido contra la deshidrogenasa aldehídica mitocondrial. Protección contra el alcoholismo por aumento de los niveles de acetaldehído. (Antisense gene against mitochondrial aldehyde dehydrogenase. Protecting against alcoholism by raising acetaldehyde levels). Ocaranza, P.1, Israel, Y.1,2., Karahanian, E.2,3. 1Laboratorio de Farmacoterapia Génica, Departamento de Química Farmacológica y Toxicológica, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, e 2Instituto Milenio de Estudios Avanzados en Biología Celular y Biotecnología (CBB), Universidad de Chile. 3Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Diego Portales. Proyecto Fondecyt 1040555, Proyecto Milenio ICM-P99-031F, Beca Posgrado Universidad de Chile PG/89/03

La deshidrogenasa aldehídica (ALDH2) hepática oxida el acetaldehído producto del metabolismo del etanol. Los individuos asiáticos portan una mutación inactivante en ALDH2, que aumenta los niveles de acetaldehído circulante y produce efectos adversos otorgando protección contra el alcoholismo.
En este trabajo demostramos que la transducción de células de hepatoma de rata con un vector adenoviral (Adv) portando el gen antisentido de la ALDH2 disminuye en un 27%-57% la actividad a las 48h posinfección. Se observaron niveles normales de mRNA tanto para ALDH2 como b-actina (control interno) indicando que el mecanismo de disminución de la actividad es la ocupación del mRNA blanco. Junto con la disminución de la actividad enzimática se detectó un marcado aumento en los niveles de acetaldehído.
Estos estudios sugieren que el desarrollo de una terapia génica contra el alcoholismo mediada por un vector Adv que contiene el gen antisentido de la ALDH2 imitaría el fenotipo asiático conduciendo a una aversión al alcohol.

Paneles I

Botánica

1.- INFLUENCIA DE PULSOS SOBRE LA REDISTRIBUCIÓN HIDRÁULICA REALIZADA POR ARBUSTOS NATIVOS DEL NORTE-CENTRO DE CHILE (Influence of water pulses on hydraulic redistribution developed by native shrubs from north-central Chile). Martínez, L.A.; Squeo, F.A. y León, M.F. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de La Serena y Centro de Estudios Avanzados en Zonas Áridas (CEAZA), Casilla 599, La Serena (lmart66_6@hotmail.com) (Patrocinio: F.A. Squeo)

El camino principal de movimiento de agua en las plantas es desde el suelo hacia la atmósfera, sin embargo, las plantas pueden actuar como vías de transporte para la transferencia de agua entre diferentes regiones del suelo. Este movimiento del agua responde espontáneamente a diferencias en el potencial hídrico, moviéndose desde zonas con mayor potencial a zonas con menor potencial hídrico. En la Quebrada El Romeral (29º43´S-71º14´O, 300 msnm) se evaluó experimentalmente la influencia de pulsos de precipitación equivalente a un año El Niño promedio (200 mm) sobre el comportamiento de la redistribución hidráulica exhibida por tres especies de arbustos con sistema radicular dimórfico: Senna cumingii, Flourensia thurifera y Pleocarphus revolutus. Las variaciones día/noche en el potencial hídrico del suelo fue registrado con psicrómetros ubicados a 40, 60, 80 y 150 cm de profundidad conectados a un data logger (CR7). Las oscilaciones diarias en el potencial hídrico del suelo superficial reaparecen luego de dos semanas desde el último evento de precipitación, cuando las plantas han utilizado parte del agua para su crecimiento (transpiración) o removilizado hacia las capas profundas más secas.
FONDECYT 1030428 y Compañía Minera del Pacífico

2.- REGULACIÓN DE LA SACAROSA FOSFATO SINTASA DE COLOBANTHUS QUITENSIS (Regulation of sucrose phosphate synthase of Colobanthus quitensis). Bascuñán, L., Zúñiga, A., Corcuera, L.J., Bravo, L.A. Departamento de Botánica Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción.

Colobanthus quitensis es la única dicotiledónea que habita la Antártida Marítima. Especies tolerantes a las bajas temperaturas presentan altos contenidos de sacarosa, los que se han correlacionado con una alta actividad de la Sacarosa Fosfato Sintasa (SPS, EC 2.4.1.14), que es la principal enzima involucrada en la síntesis de sacarosa. Su actividad está regulada por varios mecanismos incluyendo modificación alostérica por G6P y Pi (activador e inhibidor, respectivamente) y modificación covalente en respuesta a la luz. Nuestro objetivo es estudiar algunas propiedades cinéticas de la SPS en C. quitensis y su posible regulación por luz.
SPS de C. quitensis posee un pH óptimo de 7,2 y una temperatura `óptima de 30ºC. A 0ºC conserva un 40% de su actividad máxima. Las Km para F6P y UDP-Glc son 1,7 y 2,8 respectivamente. SPS es activada por G6P (a 6 mM presenta 180% de activación) e inactivada por Pi (a 5mM presenta 84% de inactivación). Además, es regulada por luz, alcanzando un 60% activación durante el fotoperíodo (16/8: luz/oscuridad) y menos activada en oscuridad. Esta regulación es similar a la encontrada en D. antarctica otra especie que habita la Antártida Marítima y posiblemente facilite también en C. quitensis la acumulación de sacarosa.
Fondecyt 2000136 y 1010899

3.- INDUCCIÓN DE CAULOGÉNESIS INDIRECTA EN Eucalyptus globulus Labill. (Induction of indirect caulogenesis in Eucalyptus globulus Labill.). Gómez, C., Larson, C., Sánchez-Olate, M. y D. Ríos. Laboratorio de Biotecnología Forestal, Universidad de Concepción. crigomez@udec.cl.

Se estudió la inducción caulogénica utilizando semillas maduras como explantos iniciales. Para la callogénesis se evaluó la combinación de cuatro concentraciones de BAP (0, 3, 5 y 7 mgL-1) en los medios MS, B5 y SP. Para la caulogénesis se utilizaron los callos formados en la primera etapa, evaluando el efecto de dos concentraciones de ANA (0,1 y 0,5 mgL-1), manteniendo constante el BAP (1,0 mgL-1) y el medio nutritivo del cual provenían.
En la callogénesis los mejores resultados se obtuvieron con 7 mgL-1 de BAP (73%) al utilizar el medio B5, difiriendo significativamente de MS. Para la caulogénesis el medio SP produjo los valores más altos de formación de brotes (77,8%) difiriendo significativamente de los medios B5 y MS. La combinación de BAP (1,0 mgL-1) y ANA (0,1 mgL-1) resultó más apropiada para la formación de brotes (61,5%), aunque sin diferir estadísticamente de la otra combinación.
Se concluye que la callogénesis está directamente relacionada con la concentración de BAP y el medio nutritivo utilizado. Además la concentración de BAP del cual provienen los callos y las combinaciones de BAP y ANA, para la caulogénesis, no influyen significativamente en la formación de brotes adventicios, a diferencia del medio nutritivo utilizado.
Agradecimientos: A los proyectos FONDEF D97-F1059 y DIUC 99.142.008-1.0, por el financiamiento de esta investigación.

4.- INTOLERANCIA A LA DESECACIÓN EN SEMILLAS DEL ECOTIPO ANTÁRTICO DE COLOBANTHUS QUITENSIS (CARYOPHYLLACEAE). (Desiccation intolerance in seeds of the antarctic ecotype of Colobanthus quitensis (Caryophyllaceae). González-Teuber, M., Bravo, L.A., Cavieres, L.A. & Corcuera, L.J. Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Concepción, Chile.

Las semillas ortodoxas experimentan períodos de desecación y se mantienen viables, mientras que las semillas recalcitrantes se caracterizan por la incapacidad para resistir la desecación. Se estudió la germinación de semillas del ecotipo antártico de Colobanthus quitensis, colectadas la temporada anterior a la realización de este estudio. Estas semillas no germinaron a pesar de tratamientos de estratificación, siendo su viabilidad solo de 3%. Semillas recién sacadas de la planta madre presentaron 60% de germinación y 100% de viabilidad. Se plantea la hipótesis que las semillas de Colobanthus quitensis sean recalcitrantes, presentando incapacidad para resistir períodos de desecación fuera de la planta madre. Los resultados indican que la pérdida de 20% de humedad determinó una reducción de 57% en la germinación y entre 20-40% de reducción de viabilidad. Además, en inmunoblots, se observó ausencia de bandas de proteínas LEA (late embryogenesis abundant) en semillas colectadas un año antes de la planta madre. Se concluye que las semillas del ecotipo antártico de Colobanthus quitensis no toleran períodos de desecación, siendo recalcitrantes. Esto es reforzado por la ausencia de deshidrinas, proteínas que protegen al embrión durante la deshidratación. Lo anterior es consistente con observaciones de viviparía y asociaciones de esta especie a cursos de agua.
Fondecyt 1010899.

5.- FLORA EXÓTICA ADYACENTE A SENDEROS DE CAMINATA Y CABALGATA EN EL PARQUE NACIONAL "TORRES DEL PAINE" (MAGALLANES, CHILE). Alien flora adjacent to backcountry trails in "Torres del Paine" National Park. Vidal O. & C. Ramírez. Instituto de Botánica, Universidad Austral de Chile.

Se describe la flora exótica adyacente a senderos remotos en cuatro formaciones vegetales del Parque Nacional "Torres del Paine", bajo el supuesto de que estos actúan como corredores de transporte para la flora alóctona. Las formaciones vegetales se distribuyen según un gradiente de precipitación que incluye Estepa Patagónica, Matorral Xerófito, Matorral Mesófito y Bosque de Nothofagus. Se muestreó la flora y vegetación a partir de 28 transectos transversales a los senderos conteniendo 5 parcelas de 4 m cada uno. Las parcelas se establecieron a distancias variables del sendero, determinándose riqueza, cobertura y frecuencia de especies. Considerando todas las formaciones, se determinaron 157 especies de las cuales 39 (25%) son exóticas, indicando un alto grado de perturbación. De estas últimas, el 87% es de origen Europeo. Concomitantemente, en el espectro biológico dominan los Terófitos con 21 especies (54%). La cobertura relativa de los taxa alóctonos alcanza un 6%, pudiendo esto constituir un riesgo potencial frente a cambios ambientales. El Matorral Mesófito presenta la mayor riqueza de advenas, con 30 especies que representan un 28% de la flora de la formación. Tres especies Europeas, Aira caryophyllea, Cerastium arvense e Hypochaeris radicata resultaron particularmente frecuentes en la mayoría de las áreas de estudio. Inesperadamente altos niveles de cobertura en parcelas alejadas de los senderos, indicarían que estos no actúan como agentes principales en la introducción y propagación de exóticas. Adicionalmente, se reportan 3 nuevas especies para Magallanes: Asperula odorata, Hypericum perforatum y Relbunium hypocarpium.
Agradecimientos: Fantástico Sur Birding & Nature Tours y SERPLAC, Magallanes.

6.- HELECHOS DE LA FAMILIA HYMENOPHYLLACEAE COMO INDICADORES DE PERTURBACIÓN EN UN ECOSISTEMA BOSCOSO DE OLIVILLO PRESENTE EN EL PREDIO RUCAMANQUE, IX REGIÓN. (Ferns of the Hymenophyllaceae family used as disturbance bioindicators of an olivillo forest ecosystem in Rucamanque forest land, IX Región, Chile). Carrillo, R.1, Wood, F1. & Rodríguez, M. 1Facultad de Ciencias Agropecuarias y Forestales, Universidad de La Frontera. 2Facultad de Ciencias Agropecuarias y Forestales. Universidad Católica de Temuco. Patrocinio: Marta Bretos.

En los ecosistemas boscosos existe una gran diversidad florística, la cual caracteriza grandes grupos o asociaciones de plantas. Estas asociaciones son el reflejo del clima, la naturaleza del suelo y la disponibilidad de agua y nutrientes entre otros factores.
Los bosques de olivillo se encuentran enmarcados, según la descripción realizada por Donoso (1981), en el tipo forestal siempreverde, denominado también como bosque valdiviano, cuya especie principal es Aextoxicon punctatum R. et P. (olivillo), la cual se distribuye desde Coquimbo a Chiloé. Estos bosques se han descrito desde un punto de vista botánico y nombrados según la nomenclatura fitosociológica como Lapagerio _ Aextoxiconetum punctatii Oberdorfer 1960. Las comunidades boscosas de olivillo en estado de equilibrio natural o madurez se caracterizan porque los individuos arbóreos alcanzan su máximo desarrollo, con alturas medias de 26 m y troncos de diámetros cercanos a 1 m, con gran diversidad y número de especies.
Estos bosques son de carácter húmedo desarrollándose en el interior de ellos una gran cantidad de plantas adaptadas a estas condiciones ambientales, entre ellas es característica la presencia en este ecosistema vegetal de distintas especies de helechos epífitos de la familia hymenophyllaceae.
Actualmente muchos de estos ecosistemas se han visto presionados por la actividad antrópica, siendo alterados, degradados y en algunos casos hechos desaparecer. De este modo se hace relevante la potencial utilización de los componentes de esta familia de helechos epífitos como bioindicadores de alteraciones ecológicas en estos ambientes como una forma de generar información conducente a identificar el grado de alteración de este tipo de comunidad vegetal.
Agradecimientos: Proyecto DIUFRO Nº 2828 y DIUCT Nº 2002-2-02

 

7.- PLANIFICACIÓN TERRITORIAL PARA LA CONSERVACIÓN DE LOS ECOSISTEMAS TERRESTRES CHILENOS (Territorial planning for conservation of chilean terrestrial ecosistems). Squeo, F.A. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de La Serena y Centro de Estudios Avanzados en Zonas Áridas (CEAZA), Casilla 599, La Serena, Chile (f_squeo@userena.cl)

Se definen las áreas prioritarias para la conservación de la biodiversidad de los ecosistemas terrestres de Chile. La superficie de las comunidades naturales contenidas en el SNASPE (Sistema Nacional de Áreas Silvestres Protegidas del Estado) varía entre 0,02 (VII Región) a 47% (XI Región), con un 24% nacional (19,3% de la superficie del país). Para cumplir una meta de conservación del 10% de los principales ecosistemas terrestres naturales, el SNASPE debería incorporar entre 27.650 y 33.543 km2. Considerando al SNASPE en forma obligada dentro de la solución, las Regiones VII y IV tienen la mayor superficie del objetivo de conservación fuera del SNASPE (99,8% y 96,6%, respectivamente). Las regiones con mayor proporción de la solución dentro del SNASPE (opción SNASPE sugerido) son la XII (64%), XI (48%), IX (25%) y I (25%); mientras que las con menor proporción son las regiones VII (0,1%) y VI (0,2%). En términos de superficie, cuatro regiones requieren incorporar al SNASPE más de 3.000 km2: regiones X (4.426 km2), XI (3.689 km2), IV (3.650 km2) y III (3.480 km2). Cerca del 4% de la superficie de las regiones IV a la X que están fuera del SNASPE representan soluciones prioritarias que requieren protección urgente.
Financiado por CONAMA

8.- Priorización de especies para su conservación (Targeting species for conservation) 1Guerrero, P.C, 1León-Lobos, P. y 2Marticorena, C. (1) Banco Base de Semillas, Instituto de Investigaciones Agropecuarias, Casilla 73, Vicuña. bancosemillas@tie.cl (2) Universidad de Concepción, Casilla 160 _ C, Concepción.

La priorización de especies es una etapa crucial dentro de los programas de conservación debido generalmente a la falta de recursos y la escasa información biológica de muchas especies. Los ecosistemas desértico y mediterráneo de Chile se caracterizan por un elevado endemismo de plantas encontrándose además seriamente amenazadas. Se realizó una priorización de la flora endémica de estos ecosistemas con el fin de recolectar y conservar sus semillas. Para ello, se definió un índice que pondera el rango de distribución geográfica y la unicidad filogenética de las especies. El rango distribucional se analizó considerando la división geopolítica de Chile más Isla de Pascua y el Archipiélago de Juan Fernández (14 regiones). La unicidad filogenética se estimó contando el número de especies y géneros para el género y familia de la especie evaluada (se consideraron exclusivamente aquellos taxa que existen en Chile). La prioridad de conservación para aquellas especies endémicas regionales o de géneros o familias mono específicas es mayor que para aquellas especies de amplia distribución y/o que pertenecen géneros o familias con múltiples especies y/o géneros. Los resultados del índice de prioridad son complementarios con los estados de amenaza de los libros rojos, indicando la utilidad de este índice en ayudar a definir estados de conservación de la flora de Chile.
Agradecimientos: Millennium Seed Bank Project - Chile

9.- CARACTERIZACIÓN DEL TRANSPORTE HIDRÁULICO EN TALLOS DE LIANAS Y ÁRBOLES DE UN BOSQUE TEMPLADO SIEMPREVERDE CHILENO. (Hydraulic transport of lianas and trees stems in a temperate evergreen Chilean forest) Jiménez-Castillo, M. y C. Lusk. Laboratorio de Ecología Forestal, Dpto. Botánica, Universidad de Concepción. bancosemillas@tie.cl.

Las lianas son consideradas parásitos estructurales por requerir del sustento mecánico de otras plantas, ya que poseen poco tejido xilemático que les permita mantener erectos sus tallos. Principalmente en climas tropicales, se ha descrito en lianas la capacidad de sostener una alta conductividad xilemática respecto a los árboles, lo que les confiere importantes ventajas competitivas explicando su gran abundancia. Por otro lado, son escasos los antecedentes sobre el transporte hidráulico de lianas de climas templados. En este trabajo se estudiaron las propiedades del transporte hidráulico de tallos de 5 especies de lianas y 9 de árboles en un bosque templado siempreverde del centro sur de Chile. En cada especie se realizó una caracterización de la anatomía vascular de los tallos y se midió la conductividad xilemática específica (Ks). Los resultados arrojaron diámetros y largos máximos de vasos significativamente superior en lianas, las que presentaron Ks de valores entre 10 y 30 Kg m-1 S-1 MPa-1, mientras que árboles no superaron los 5 Kg m-1 S-1 MPa-1. A pesar que la capacidad de transporte hidráulico en tallos de lianas es significativamente superior que árboles, estas diferencias son más estrechas que las registradas en bosques tropicales, lo que podría tener relación con una menor capacidad competitiva y baja abundancia en climas templados.
Agradecimientos: Beca de apoyo tesis doctoral, CONICYT

10.- CLASIFICACIÓN DE PISOS DE VEGETACIÓN DE LA ZONA CENTRAL DE CHILE (Classification of vegetation belts of the Chilean central zone) Luebert, F., Pliscoff, P., Rosas 2898 depto. 504, Santiago, Chile.

Se presenta una aproximación metodológica para clasificar la vegetación natural de la zona central de Chile (IV a XI Región). La definición de los pisos de vegetación se realizó en dos etapas: (1) definición de una tipología y (2) cartografía de unidades. El concepto de piso de vegetación es definido como un grupo de comunidades vegetales con una fisionomía y estructura similares, situadas bajo condiciones mesoclimáticamente homogéneas a una escala específica. El piso de vegetación se caracteriza por una formación vegetal con especies dominantes específicas y el piso bioclimático bajo el que tal formación se encuentra. Para la delimitación cartográfica de unidades se utilizaron los estudios de vegetación disponibles y superficies climáticas. La tipología identifica un total 80 pisos de vegetación que se distribuyen en los macrobioclimas mediterráneo y templado. Con el objeto de evaluar el estado actual de las unidades en términos de superficie, se estimó el área total de cada uno de los pisos de vegetación y la superficie actual o remanente. Se observa que mientras las unidades de matorrales espinosos, bosques esclerófilos y bosques caducifolios de tierras bajas muestran porcentajes reducidos de superficie remanente (43%, 60% y 37% respectivamente), los bosques caducifolios de tierras altas, bosques siempreverdes y matorrales bajos andinos presentan superficies remanentes que en algunos casos llegan el 100%.
Financiamiento: TNC - WWF - CONAMA.

11.- Diversidad funcional de endófitos degradadores de madera en Drimys winteri basado en morfología, enzimología y análisis numérico. Functional diversity of wood decay endophytes on Drimys winteri J.R. et G. Forster, based on morfology, enzymology and numerical analysis. Oses, R., Teneb, E., Freer, J., Baeza, J., Rodríguez, J. Laboratorio de Recursos Renovables, U. de Concepción.
Patrocinio: Alicia Marticorena, Dept. Botánica, U.de Concepción

De la abundancia y riqueza de morfotipos de hongos endófitos en albura de D. winteri se desprende que existen dos grandes grupos, basidiomicetes endófitos así como también hongos con hifas grises u hongos Dematiáceos. El hongo dominante en albura de D. winteri fue identificado como Bjerkandera adusta (Aphyllophoral). Con el conjunto de todos los morfotipos se realizaron ensayos enzimáticos en medio sólido. Análisis de agrupamiento (UPGMA) y análisis de correspondencia (DCA) de los ensayos indican que los taxa endófitos de D. winteri siguen un patrón de segregación similar y la existencia de dos grupos de degradadores de la madera. Un patrón coincide al tipo de degradación conocida como pudrición blanca (Ganoderma australe-Trametes versicolor) y el otro grupo a una pudrición parda (Gloeophyllum trabeum-Laetoporius sulphureus). Más aún, es posible discriminar dos subgrupos en el patrón de pudrición blanca lo que podría relacionarse con la selectividad de la degradación. Los resultados señalan la existencia de dos grupos funcionales de taxas endófitos degradadores de madera huéspedes en D winteri con potencial de generar pudrición. Se discutirá su significado biológico e influencia en fenómenos como la pudrición de la madera en condiciones naturales.
Agradecimientos: Conicyt, Fondecyt 1020161

12.- FLORA CHILENA EMPARENTADA CON CULTIVOS GENÉTICAMENTE MODIFICADOS, CON ÉNFASIS EN EL RIESGO DE FLUJO GÉNICO. Chilean flora relatives to genetically modified crops: focus on gene flow risk. Rosas, M.; Muñoz, C.; Prieto, H.; León, P.; Salazar, E.; Reyes, F.; y Muñoz, M. Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Museo Nacional de Historia Natural. Proyecto UNEP-GEF-CONAMA.

El presente estudio recopila, actualiza y sistematiza la información disponible sobre las angiospermas presentes en Chile que están emparentadas con cultivos convencionales y transgénicos con el propósito de hacer una categorización del eventual riesgo para cada especie.
Se confeccionaron 4 bases de datos 1) Especies cultivadas en Chile (222 especies); 2) especies nativas de Chile (4998 taxa); 3) Especies introducidas a Chile (3528 taxa); 4) Especies transgénicas en el mundo (137 especies).
Se diseñó un programa computacional (Access) que vincula estas especies generando informes rápidos y sencillos. También calcula un índice arbitrario que califica el riesgo potencial que tiene la presencia de una especie transgénica para la biodiversidad. Considera variables que afectan directamente el flujo génico y otras que podían afectar la biodiversidad.
Entre los resultados tenemos: 1) Solo 2 especies de cultivos transgénicos son nativas de Chile; 2) 24 especies de cultivos transgénicos están emparentadas a nivel de género con 236 especies nativas, esto es un 4,7 % de la flora nativa; 3) 93 especies de cultivos transgénicos (de un total de 137) forman parte de la flora introducida a Chile; 25 son naturalizadas, es decir crecen en forma silvestre; 20 son malezas; y, 62 son cultivos convencionales.

13.- CAMBIOS VEGETACIONALES DURANTE EL ÚLTIMO SIGLO EN EL CENTRO SUR DE CHILE: ESTUDIO DEL REGISTRO SEDIMENTARIO PALINOLÓGICO DEL LAGO LAJA (VIII REGIÓN, CHILE (Vegetation changes during the last century in the center-south of Chile: palynological sedimentary record of Laja lake, VIII region, Chile). Torres, L1, Araneda, A2, Parra, O2 & Chirinos, L2. 1Depto Botánica, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción; 2Centro EULA-Chile, Universidad de Concepción.

RESUMEN
Un registro polínico de alta resolución desde el lago Laja muestra que los granos de polen del primer centímetro de sedimento (lluvia polínica) tienen una buena analogía con la vegetación actual de la zona. El análisis palinológico durante el último siglo indica que la comunidad vegetal estuvo dominada desde 1938 y hasta el año 1961 por el grupo de las Gramineae y Notophagus; codominaron Austrocedrus chilensis y Ephedra. Aparecen los taxa Compositae y Plantago sp. (1948). Posteriormente, desde 1961 predominaron Notophagus y Austrocedrus chilensis; disminuyendo notablemente las Gramineae y Ephedra. Este cambio coincide con la aparición de Pinus radiata (1961).
Estos resultados sugieren que el accionar antrópico en la cuenca del lago Laja durante el último siglo ha provocado cambios en la composición relativa y absoluta de la comunidad vegetal afectando a especies de los géneros Notophagus y Ephedra. Se hace necesario realizar estudios paleo-palinológicos de mayor escala temporal para aclarar el real impacto de la llegada del hombre a la cuenca del lago Laja.
Agradecimientos: Beca Doctoral CONICYT, Escuela de Graduados de la Universidad de Concepción, DIUC N° 203.310.35-1.

14.- CAMBIOS ESTACIONALES Y DIARIOS EN LA COMPOSICIÓN DE XANTÓFILAS DE HOJAS DE SOL DE FAGÁCEAS DEL SUR DE CHILE (Seasonal and daily changes in the xanthophyll composition of sun leaves of Fagaceae from South Chile) Zúñiga, R., Olivares E., Hess, S., Bravo, L.A, Corcuera, L.J. y Alberdi, M. Instituto de Botánica y Química, Universidad Austral de Chile, Valdivia y Departamento de Botánica, Universidad de Concepción.

Se estudiaron estacionalmente, en prealba/mediodía, los cambios en el ciclo de las xantófilas, la eficiencia fotoquímica máxima del PSII (fluorescencia variable/fluorescencia máxima= (Fv/Fm), y el apagamiento no fotoquímico (NPQ) en hojas de sol de Nothofagus dombeyi (Nd) y Nothofagus nitida (Nn), creciendo bajo las mismas condiciones, en el sur de Chile.
En verano, las xantófilas A+Z (anteraxantina + zeaxantina), y el estado de de-epoxidación (Z+A)/(V+A+Z) ascendieron al mediodía con respecto a prealba en ambas especies, disminuyendo NPQ y Fv/Fm en Nd (P<0,05), y manteniéndose en Nn. En invierno y a una misma hora del día Fv/Fm fueron similares en ambas especies. En Nn y en invierno el pool de xantófilas (V, violaxantina +A+Z) fue mayor al mediodía que en prealba. Contenidos en clorofila y carotenoides totales casi no variaron. Las concentraciones altas de (A+Z) y Z en invierno con respecto a verano, sugieren un efecto estimulatorio del frío, que mantendría la fotoprotección durante todo el día, como ocurre en otras siempreverdes. El descenso de Fv/Fm en Nd, pero no en Nn al mediodía/verano indicaría una pequeña fotoinhibición.
FONDECYT-1030663; DID-UACH-S200402

15.- DISSANTHELIUM TRIN. (POOIDEAE, POACEAE) EN CHILE. Dissanthelium Trin. (Pooideae, Poaceae) in Chile. Negritto, M.A., Ruiz, E. & Baeza, M. Departamento de Botánica, Universidad de Concepción.

Dissanthelium Trin. es un pequeño género exclusivamente americano con ca. 15 especies y 2 taxa infraespecíficos, que está presente en Argentina, Bolivia, Chile, Perú, México y Estados Unidos, concentrándose las especies en la región altoandina, entre los 3.700 y 4.900 m.s.m. Si bien su ubicación tribal ha sido conflictiva, actualmente existe cierto consenso sobre su pertenencia a la subtribu Poinae, tribu Poeae, junto a otros 10 géneros más. Se caracterizan por ser plantas anuales, cespitosas, enanas, ginomonoicas, de hojas tiernas. La inflorescencia es una panícula, elíptica a linear, de hasta 4 cm. Las espiguillas son 2-floras con las glumas iguales y de mayor longitud que los antecios, siempre 3-nervias, con anchos bordes membranáceos. Las lemmas son 3-(raro 5-) nervias. Flor basal perfecta y la distal pistilada con el androceo reducido a estaminodios. Son flores casmógamas y cleistógamas. Cariopsis lateralmente comprimida y dorsalmente surcada, adherida a las glumelas. Dissanthelium está representado en Chile por dos especies, D. macusaniense (E.H.L. Krause) R.C. Foster & L.B. Sm. y D. peruvianum (Nees et Meyen) Pilg. presentes en la I y II Región quedando excluida de la flora chilena, D. calycinum (J. Presl) Hitchc., única especie que fuera registrada para territorio chileno hasta el presente trabajo. Se aportan datos detallando las características morfológicas, anatómicas, citológicas, reproductivas y la distribución geográfica en territorio chileno.
Agradecimientos: Universidad de Concepción, DIUC 203.111.033-1.0

Neurociencia

16.- Estandarización del Cultivo Organotípico de Epéndimo de Bovino. (Standarization of the organ culture of bovine ependyma). Oliver C., González C., Rodríguez EM. Instituto de Histología y Patología, Universidad Austral de Chile. FONDECYT 1030265.

Las células ependimarias forman una monocapa de células ciliadas que delimita todas las cavidades del sistema nervioso central, actuando como una barrera permeable entre el parénquima nervioso y el líquido cefalorraquídeo. Las células ependimarias también participan en la ontogenia del sistema nervioso central, emitiendo señales que influencian en desarrollo neuronal. Recientemente, alteraciones en las células ependimarias se han asociado al desarrollo de la hidrocefalia congénita, sin embargo se desconoce el mecanismo involucrado.
Hemos estandarizado el cultivo organotípico de receso colicular de bovino adulto, con el fin de contar con un modelo ex vivo para estudios de: (1) mecanismo de denudamiento ependimario, (2) neurogénesis postnatal. La pared del receso colicular está formado casi exclusivamente por una capa de epéndimo ciliado. Los explantes se cultivaron en placas petrirrecubiertas con poli-HEMA, utilizando como medio de cultivo una mezcla 1:1 de medio Dulbecco modificado y F-12, suplementado con suero de bovino adulto y fetal. En el curso del cultivo, los explantes adquieren una forma globular y presentan activa movilidad ciliar. A los 21 días in vitro, fueron fijados y procesados para inmunocitoquímica. El análisis microscópico de los explantes reveló que el epéndimo presentaba una arquitectura similar al del receso colicular in situ. Las células presentan características de células metabólicamente activas como lo sugiere la expresión del transportador de glucosa Glut-1 y de Caveolina-1, un marcador de actividad endocítica. La facilidad de obtener cientos de explantes por sesión de trabajo y la larga viabilidad de los mismos (semanas) de los mismos, está ya permitiendo empezar a investigar mecanismos de denudamiento mediante el uso en el cultivo de anticuerpos contra proteínas de adhesión y de unión.

17.- ANÁLISIS MORFOLÓGICO DE LA HABÉNULA HUMANA. (Morphological analysis of the human habenula). Díaz, E., Gavilán, P., Celis, M., Aboitiz, F.*, y Concha, M.L. Programa de Morfología, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. *Departamento de Psiquiatría, P. Universidad Católica de Chile. Financiamiento: FONDECYT 1020902, Wellcome Trust IRDA, ICM P01-007-F.

La habénula es un núcleo diencefálico bilateral que forma parte del sistema límbico, un circuito de conducción altamente conservado en la evolución de vertebrados que conecta núcleos telencefálicos con regiones motoras del cerebro medio ventral. Este sistema ha sido involucrado con funciones tan diversas como recompensa, ansiedad, sueño, dolor y conductas maternas, y se asocia a patologías como la esquizofrenia y adicción a drogas. A pesar de nuestro conocimiento de la organización citoarquitectónica y conectividad de este núcleo en diversas especies de vertebrados, casi nada se conoce de la habénula humana a excepción de un único reporte del año 1944 (Marburg, JCN, 80:211-233). El propósito de este trabajo es entregar una descripción neuroanatómica detallada de la habénula humana, al mismo tiempo que evaluar la posible existencia de asimetrías izquierda-derecha en forma y volumen de este núcleo. Para ello realizamos secciones histológicas cerebrales con orientación coronal, parasagital y horizontal teñidas con Cresil violeta, tinción de mielina e inmunocitoquímica, todo ello apoyado por reconstrucciones tridimensionales. Nuestro objetivo es reconocer los distintos subnúcleos que forman parte de la habénula, dentro los cuales ya hemos identificado al putativo subnúcleo habenular medial descrito en roedores.

18.- DT-DIAFORASA PROTEGE EL SISTEMA DOPAMINÉRGICO IMPIDIENDO EFECTOS TÓXICOS DE AMINOCROMO. I. Paris1, P. Martínez-Alvarado1, S. Cárdenas1, C. Pérez-Pastene.1, R. Grauman, C. Arriagada2, P. Caviedes1, J. Segura-Aguilar1. 1Programa de Farmacología Molecular y Clínica Facultad Medicina., Universidad de Chile. e-mail: jsegura@machi.med.uchile.cl

Hemos estudiado el papel neuroprotector de DT-diaforasa oxidando dopamina con Mn3+ en el medio de cultivo previo a su incubación en células RCSN-3 derivadas de substancia nigra de rata. 3H-aminocromo es captado a traves del DAT ya que un inhibidor específico (2 µM nomifensina) inhibe su captación. Aminocromo por sí solo induce un 8% de toxicidad que no significante comparado con un 3.5 % de muerte celular en células controles. Sin embargo, cuando las células RCSN-3 son incubadas con aminocromo y un inhibidor de DT-diaforasa se observa un marcado aumento de la toxicidad en 7 veces (56%; P<0.001) con la concomitante formación de (i) hidroperóxidos (4.2 veces de aumento comparado con el control; P<0.001); (ii) radicals hidroxilos detectads con ESR usando agentes atrapadores como DMPO; (iii) intracelular edema determinado con electrón microscopia electrónica y ausencia de apoptosis; (iv) disminución del potencial de membranas de las mitocondrias determinado con 5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide; (v) hinchamiento y rompomiento de la membrana exterior de mitocondrias determinadas con microscopia electrónica. Estos resultados apoyan nuestra hipótesis de que DT-diaforasa es una enzima neuroprotectora. Financiado por FONDECYT 1020672.

19.- EXPRESIÓN DE CONEXINA 36 EN EL BULBO OLFATORIO DE LA RATA. (Connexin 36 expression in the rat´s olfactory bulb) Lastra, V.; Babul, C. Sierralta, J.; Aylwin, M. Centro de Neurociencias Integradas y Programa de Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

El bulbo olfatorio (BO) constituye la primera estructura de integración de la actividad neuronal gatillada por odorantes en el epitelio olfatorio. Se postula que las oscilaciones gamma, descritas en el BO, son fundamentales en el proceso de discriminación e identificación de odorantes. Sin embargo, aún no se ha determinado con exactitud el origen de estas oscilaciones. En la corteza cerebral se ha demostrado que las uniones en hendidura, producidas por conexina 36, son necesarias para la generación de estas oscilaciones.
Estudiamos la expresión de la proteína conexina 36 (Cx36) en el BO de rata y su distribución en las distintas capas que lo componen, utilizando cortes coronales de animales previamente fijados. Se empleó un anticuerpo primario policlonal anti Cx36 (Zymed), amplificado con un secundario biotinilado y visualizado con diaminobenzidina. Se midió la intensidad de la marca en las diferentes capas del BO de ratas de 14 días (n=3) y 2 meses de edad (n=3) en cortes flotantes. Como control positivo utilizamos la oliva inferior.
En animales de 14 días y en adultos encontramos una tinción significativamente mayor al control (sin anticuepro primario) en las capas glomerular y plexiforme externa. No se observa expresión de Cx36 en la capa granular, el nervio olfatorio y en los controles negativos. Estos resultados indican que la Cx36 se expresa en las capas glomerular y plexiforme externa del BO de rata.
Financiamiento: Proyecto ICM P01-007F

20.- CARACTERIZACIÓN DEL POTENCIAL DE CAMPO LOCAL (PCL) DEL BULBO OLFATORIO (BO) DE RATA EN AUSENCIA DE ODORANTES (Local Field Potential characterization in the rat's olfactory bulb in the absence of odorants). Mazú, C.; Babul, C.; Maldonado, P., Aylwin, M. Centro de Neurociencias Integradas y Programa de Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

El BO es el primer centro de integración de la actividad neuronal gatillada por la presencia de odorantes en el medio ambiente y participa en la detección y discriminación de odorantes. La actividad eléctrica oscilatoria del BO se ha asociado a procesos de discriminación y aprendizaje de odorantes. Sin embargo, todos los estudios solo caracterizan la diferencia de actividad producida por los odorantes sin considerar el estado basal del BO que es modificado por la actividad proveniente de las celulas receptoras olfatorias.
Nuestro objetivo fue caracterizar la actividad eléctrica oscilatoria en el BO en ausencia de odorantes.
Se registro el PCL mediante 2 dos tétrodos (n=9 ratas), uno fijo (capa mitral) y otro móvil (distintas capas del BO) y la actividad respiratoria con una termocupla. Mediante la transformada rápida de Fourier (TRF) se obtuvo un espectrograma centrado en el ciclo respiratorio. Se determinó la significancia de la actividad oscilatoria en la banda gama.
Encontramos que 17 de los 26 sitios registrados muestran actividad oscilatoria singificativa en la banda gamma (30-90 Hz) y en los 9 stios restantes no se observó una actividad oscilatoria significativa. Estos resultados muestran que existe una actividad oscilatoria basal en el BO en ausencia de odorantes de baja amplitud que es modulada en presencia de odorantes.
Financiamiento: proyecto ICM P01-007F

21.- DEPRIVACIÓN olfatoria temprana y DISCRIMINACIÓN de odorantes en ratas. (Early olfactory deprivation and odorant discrimination in rats) Letelier, J.; García, X.; Aguilar, G.; Babul, C; Aylwin, M. Facultad de Ciencias, Centro de Neurociencias Integradas y Programa de Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

La deprivación sensorial temprana disminuye el número de interneuronas inhibitorias en el BO y el volumen del BO. En abejas, un bloqueo de la inhibición del lóbulo antenal (equivalente al BO) interfiere con la discriminación de odorantes similares.
En este trabajo determinamos cómo afecta la deprivación sensorial temprana la discriminación de odorantes en la rata. Para ello dos grupos de ratas, deprivadas unilateralmente por cauterización primer día postnatal, fueron entrenadas (caja de Skinner) a discriminar 2 odorantes diferentes (r-carvone vs isoamilacetato, n=7) y 2 estereoisómeros (r-carvone vs s-carvone, n=6). Una vez alcanzado un rendimiento de 90% en la discriminación, se realizó la cirugía de reversión, exponiéndose el lado deprivado a estimulación olfatoria y cerrando el lado anteriormente expuesto. Posteriormente, las ratas fueron evaluadas en la tarea de discriminación.
Las ratas entrenadas a odorantes distintos muestran rendimiento de 93.14±0.53% con el BO normal previo a la cirugía y un 86.58±1.63% con el BO deprivado después de la cirugía. Las ratas entrenadas a discriminar estereoisómeros tuvieron un rendimiento de 89.17±2.33% previo a la cirugía y un 74.79±3.9 postcirugía.
Estos datos muestran que ambos grupos tienen un rendimiento semejante con el BO normal para odorantes distintos y similares. Además, el rendimiento del BO deprivado para olores similares disminuye significativamente (p<0.05, ANOVA y prueba de Tukey), indicando que la estimulación sensorial temprana interfiere con la discriminación de odorantes de estructura química similar.
Financiado por proyecto ICM P01-007F

22.- MEMORIA DE RECONOCIMIENTO DE OBJETOS EN EL ROEDOR Octodon Degus (Object Recognition Memory in the rodent Octodon Degus) Boric, Katica. & Palacios, Adrián. Dep. Fisiología, ICBQ, Fac. Ciencias, U. Valparaíso, Centro de Neurociencia de Valparaíso. Patrocinante: Dr. Alan Neely

El reconocimiento de objetos (nuevo, "N" vs. familiar, "F") es una conducta espontánea observada en mamíferos. Utilizamos un "Test de Reconocimiento de Objetos" (TRO), donde el animal es expuesto a pares de objetos, que pueden variar en forma, textura, color, material. Durante los 3 minutos de cada una de las fases (muestra y reconocimiento) se cuantifica por video-cámara el tiempo de exploración de cada objeto. El cálculo de un índice de discriminación (Idisc; %N= (N*100)/(N+F)) de nuestros resultados muestra que Octodon degus (Octodontidae) (adultos n=5) dedica en promedio un 65% de su tiempo a explora un objeto nuevo y un 35% el objeto familiar. Este índice para los diferentes sujetos muestra una importante variabilidad interindividual (entre 27% a 88%). En conjunto con otros resultados de nuestro laboratorio en degus (n > 20), incluyendo degus juveniles y seniles, dan cuenta del interés de este modelo para el estudio de los procesos normal y patológico de la neurobiología del aprendizaje y memoria en mamíferos. Finalmente, el análisis de los resultados en curso dará cuenta de la preferencia de degus por ciertas propiedades visuales, esencialmente cromáticas de los objetos, lo que podrá corroborar la funcionalidad de los tipos de conos (máximo de absorbancia 507 nm y 362 nm en el UV) descritos para esta especie.
Agradecimientos: Proyecto Fondecyt # 1040309

23.- Expresión de sinaptofisina y gad-67 en Bulbo Olfatorio normal y deprivado de la rata. (Synaptophysin and Gad-67 expression in the normal and deprived rat olfactory bulb). García, X.; Babul, C.; Sierralta J. y Aylwin, M. Universidad de Chile, Facultad de Medicina.

El bulbo olfatorio (BO) es el primer centro de integración de la actividad neuronal gatillada por la estimulación olfatoria, donde la señal olfatoria es procesada por una red de interneuronas que modulan la actividad de las neuronas de proyección mediante inhibición lateral y recíproca.
La deprivación sensorial provoca disminución del número de interneuronas inhibitorias, degeneración dendrítica y un volumen menor del BO.
En este trabajo reportamos los efectos de la deprivación sensorial temprana sobre los circuitos del BO. Para esto se utilizaron ratas deprivadas unilateralmente el DPN1 (n=3). Dos meses después, utilizando inmunofluorescencia confocal, se midió la intensidad para sinaptofisina (proteína de la vesícula presináptica).Como control se utilizó el anticuerpo anti-Gad67 (enzima precursora de GABA). Se comparó la intensidad de las capas del BO normal y deprivado. En las capas glomerular, plexiforme, granular y centro, la intensidad relativa para sinaptofisina en BO normal fue (promedio±ES): 44.8±4.7, 35.9±1.2, 22.6±1.4, _5.3±2.1 y en deprivado 44.6±2.3, 29.6±2.3, 21.9±2, -11.3±2 respectivamente. Solo en la capa plexiforme hay una diferencia significativa entre el normal y deprivado (P<0.02; t-test no pareado). Gad-67 arrojó valores de 18.3±1.4, 24.9±1.7, 13.3±1.9, _2.1±1.1 en el BO normal y 17.3±1.7, 21.7±2.4, 11.1±1, _3.3±0.5 en el deprivado. No hay diferencias significativas.
Estos datos muestran que deprivación sensorial produce una disminución de la densidad de sinapsis totales en la capa plexiforme externa.
Financiamiento: Proyecto ICM P01-007F

 

24.- EFECTO DE SEROTONINA SOBRE LA FRECUENCIA DE DESCARGA DEL NERVIO CAROTÍDEO DE CONEJO (Effect of serotonin on rabbit carotid nerve frecuency discharge). Soto, C.R., Vargas, R.V., Ortiz, F.C., Arroyo, J., Mateluna, C., Muñoz, D.B., Alcayaga, J. Laboratorio de Fisiología Celular, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

El nervio carotídeo (NC) está formado por axones de neuronas mecano y quimiosensoriales del ganglio petroso. La actividad quimiosensorial se genera por transmisores liberados desde células del cuerpo carotídeo que actúan sobre terminales de neuronas petrosas. Se ha propuesto que los transmisores excitatorios serían acetilcolina y ATP, pero otras moléculas como serotonina podrían participar en el proceso. Por este motivo, estudiamos el efecto de serotonina sobre la descarga quimiosensorial del NC de conejo.
Superfundimos in vitro con solución Hanks (pH 7,43; 38°C) ganglios petrosos obtenidos de 9 conejos machos (1,25-2,16 Kg) anestesiados con ketamina-xilazina. Registramos los potenciales de acción del NC y medimos la frecuencia de descarga (ƒNC). La serotonina se aplicó en bolos de 10 µl, y los antagonistas se agregaron al medio de superfusión.
La serotonina aumentó ƒNC en forma dosis-dependiente con umbral de 0.01 µg y produjo actividad máxima por sobre 1 µg. Tropisetron (500 nM), un antagonista del receptor 5-HT3, bloqueó totalmente los aumentos de ƒNC inducidos por serotonina, pero no los producidos por acetilcolina.
Nuestros resultados sugieren la presencia de receptores 5-HT3 en las neuronas del GP y que la serotonina podría participar en la generación de la actividad quimiosensorial en el cuerpo carotideo de conejo.
Financiamiento FONDECYT 1040638

25.- INVESTIGACIÓN DEL MECANISMO DEL DESPRENDIMIENTO EPENDIMARIO DEL ACUEDUCTO CEREBRAL EN RATONES MUTANTES HYH HIDROCEFÁLICOS. Investigation of the mechanism leading to ependymal denudation in the cerebral aqueduct of the mutant hydrocephalic hyh mouse. Sara Rodríguez, Federico Bátiz, Fernando Gaete, Esteban Rodríguez. Instituto de Histología y Patología, Facultad de Medicina, Universidad Austral de Chile. FONDECYT 1030265.

Hemos demostrado que la hidrocefalia congénita del ratón mutante hyh presenta dos etapas: una embrionaria con acueducto cerebral (AS) abierto y una postnatal grave gatillada por la obliteración del AS. El mecanismo de la obliteración se desconoce. Hemos postulado la siguiente secuencia de eventos que conducirían a la hidrocefalia congénita grave: 1) denudamiento ependimario ventral del AS (vida embrionaria), 2) denudamiento ependimario dorsal del AS caudal y 3) obliteración del AS caudal. El ratón hyh presenta una mutación en el cromosoma 7 ubicada en el gen Napa que codifica para alfa snap, una proteína involucrada en el tráfico vesicular intracelular. Teniendo en cuenta estos antecedentes hemos estudiado si en estos ratones hidrocefálicos existen modificaciones en las proteínas de membrana de las células ependimarias del AS que provocarían el denudamiento ependimario y por ende la obliteración del AS.
Se estudió el AS de ratones hyh normales e hidrocefálicos, desde la etapa embrionaria E-12 hasta PN-10, mediante inmunocitoquímica usando anticuerpos contra L1; N-CAM; PSA-NCAM, E y N caderinas, caveolinas, GLUT-1 y alfa snap.
En los ratones hyh normales alfa snap se expresa fuertemente en los plexos coroideos, moderadamente en el epéndimo dorsal del AS. En el ratón normal caveolina se localiza preferentemente en las paredes laterales de las células ependimarias, mientras que en el ratón hidrocefálico el epéndimo que aún no se ha desprendido presenta caveolina-1 en toda la membrana celular, sugiriendo un trastorno en el tráfico de esta proteína de membrana. La probable alteración de proteínas de adhesión como N-CAM y caderinas está siendo investigada, con la expectativa de dilucidar el mecanismo del desprendimiento ependimario, proceso clave en el desarrollo de la hidrocefalia.

26.- SOBREEXPRESIÓN DE RECEPTORES a2C INDUCIDA EN LA CORTEZA CEREBRAL DE LA RATA POR "MALNUTRICIÓN OCULTA" DURANTE LA GESTACIÓN (Overexpression of a2C`adrenoceptors induced in the rat cerebral cortex by "hidden malnutrition" during gestation) Hernández, A.1, Valladares, L.2, Sierralta, W.2, Pérez, H.2, Fernández, V.3, Mondaca, M.2, Soto-Moyano, R.2 1Fac. Quím. Biol., USACH, 2INTA, Universidad de Chile, 3ICBM, Fac. Med., Universidad de Chile.

La malnutrición proteica suave durante la gestación induce alteraciones significativas en los sistemas noradrenérgicos centrales. Existe información que ratones que sobreexpresan el adrenorreceptor a2C presentan déficits de navegación en el laberinto de Morris, sugiriendo que su activación produce deterioro cognitivo. Se investigó la densidad y expresión de adrenorreceptores a2C en las cortezas frontal y occipital de ratas de 8 y 60 días de edad, nacidas de madres normales (dieta 21% caseína) o de madres sometidas a dieta hipoproteica (8% caseína), mediante técnicas de radioligando (3H-rauwolscina) e inmunohistoquímica (anticuerpo de cobayo contra el receptor a2C). Los resultados muestran que a los 8 días de edad las ratas malnutridas presentaron aumentos significativos tanto en la densidad y expresión del adrenorreceptor a2C en ambas regiones corticales. A los 60 días de edad, las ratas malnutridas disminuyeron la densidad y expresión del adrenorreceptor a2C, detectándose niveles normales de expresión del receptor pero aún manteniendo un "binding" significativamente elevado de 3H-rauwolscina. Se sugiere que la malnutrición oculta es capaz de elevar la densidad y expresión cortical de adrenorreceptores a2C durante la vida postnatal temprana, lo que puede estar en la base de los trastornos cognitivos que acompañan a esta forma de malnutrición.
FONDECYT 1030729.

27.- Efecto de Diclorvos en procesos de plasticidad sináptica: Participación de la enzima acilpéptido hidrolasa (Effect of dichlorvos on synaptic plasticity processes: involvement of the enzyme acylpeptide hydrolase). Olmos, C., Zeise, M. y Pancetti, F. Laboratorio de Neurociencias, Departamento de Biología, USACH. E-mail: fpancett@lauca.usach.cl

Diclorvos es un insecticida organofosforado que, al igual que otros insecticidas, inhibe a la enzima acetilcolinesterasa (AChE). Además, es el agente activo de la prodroga metrifonato en la terapia de reforzamiento cognitivo en pacientes con Alzheimer. Sin embargo, recientes evidencias indican que la enzima acilpéptido hidrolasa (ACPH) es inhibida por diclorvos a dosis entre 6 y 10 veces más bajas que las necesarias para inhibir a la AChE. ACPH cataliza la hidrólisis de sustratos peptídicos Na acilados para generar un aminoacil ácido y un péptido con un NH2 terminal libre, lo que sugiere posibles funciones en modificaciones co- o post-traduccionales de la cadena polipeptídica. Además, algunos estudios sugieren que diclorvos reforzaría la liberación de acetilcolina y facilitaría el funcionamiento cognitivo (memoria y aprendizaje). La memoria y aprendizaje se desarrollarían bajo un proceso de cambios en la plasticidad sináptica, uno de cuyos modelos más estudiados es la potenciación a largo plazo (LTP). Nosotros estamos estudiando el efecto de diclorvos en la inducción de LTP en rebanadas de hipocampo de rata. Hemos visto que 50 µM de diclorvos aplicados durante 20 minutos aumenta la LTP en un ~34%. Este aumento se correlaciona con una mayor inhibición de la actividad ACPH que de la AChE.
Financiado por DICYT USACH.

Bioquímica

28.- ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN Y ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE APOLIPOPROTEÍNA A-I EN TRUCHA ARCO IRIS. (Analysis of apolipoprotein A-I expression and antimicrobial activity in rainbow trout). Bastías, A1., Amthauer, R.1, Goicoechea, O.2 y Concha, M. I. 1Instituto de Bioquímica e Instituto de Embriología, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile, Valdivia, Chile.

En estudios previos demostramos que la lipoproteína de alta densidad (HDL) y sus apolipoproteínas constituyentes apoA-I y apoA-II, poseen una importante actividad antimicrobiana en el pez Cyprinus carpio. Para validar esta función en otros peces teleósteos de interés comercial se utilizó como modelo experimental la trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss). Resultados preliminares de inmunohistoquímica y RT-PCR indican la expresión de apoA-I en piel, intestino y mucosa bucal, todos ellos tejidos muy relevantes para la inmunidad innata del pez puesto que constituyen las barreras defensivas primarias que deben vencer los microorganismos durante los procesos de infección. Además mediante análisis de Western se comprobó la presencia de apoA-I en el mucus que recubre la epidermis.
Se evaluó la actividad antimicrobiana in vitro de HDL y apoA-I purificada utilizando ensayos de dilución en microplaca empleando diversas bacterias susceptibles, incluidos algunos patógenos de peces como Yersinia ruckeri y Pseudomonas sp. En todos los casos se obtuvieron para apoA-I valores de EC50 en el rango micromolar, lo cual coincide con los resultados determinados previamente en la carpa y confirman su participación como un efector de la inmunidad innata en salmónidos.
Financiamiento:DID-UACH S-200211 y S-200440

29.- CLONAMIENTO DEL PRECURSOR DE ISOTOCINA DE Salmo salar Y EVALUACIÓN DE SU EXPRESIÓN EN PECES SANOS Y ENFRENTADOS A PATÓGENOS BACTERIANOS (Cloning of the Isotocin precursor from Salmo salar and evaluation of the expression in healthy and fish challenged with bacterial pathogens). Fuentes, S., Kausel, G. Figueroa, J. Instituto de Bioquímica, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile. Novartis, Pto. Varas. (jefigueroa@uach.cl)

Datos recientes sugieren la interrelación entre los sistemas inmune y endocrino. Entre las hormonas involucradas destaca prolactina (PRL), un polipéptido hipofisiario muy versátil, comprometido en crecimiento-desarrollo, osmorregulación y reproducción. Respecto a la liberación de esta hormona desde células lactotropas, experimentos in vitro en nuestro laboratorio, han demostrado que el motivo C-terminal del precursor de isotocina (copeptin) estimula la secreción de prolactina en carpa.
Búsqueda in silico de secuencias, permitió diseñar partidores específicos para amplificar cDNA de hipotálamo de S. salar, logrando clonar y secuenciar un fragmento de 510bp que contiene la típica estructura del precursor de isotocina: Péptido señal-Isotocina-Neurofisina-Copeptin. El análisis de homologías muestra una alta identidad con especies salmónidas cercanas.
Por deleción de un fragmento de 167pb, se construyó un competidor de 343pb para evaluar la transcripción del copeptin por RT-PCR-MIMIC competitivo, en alevines de 20 gramos controles y desafiados con inóculos de los patógenos Vibrio ordalii, Piscirickettsia salmonis y Renibacterium salmoninarum, pero sobrevivientes tras 35 días de infección. Estos ensayos se complementaron con evaluación inmunohistoquímica de la expresión de la proteína.
Por tratarse de una especie de gran valor comercial, resulta fundamental conocer a fondo la regulación de la inmunidad innata del Salmón del Atlántico.
Proyecto Fondecyt 1040073

30.- PARTICIPACIÓN DE PROLACTINA EN LA SOBREVIVENCIA DE Salmo salar DESAFIADOS CON PATÓGENOS BACTERIANOS (Prolactin participates in the survival of Salmo salar challenged with bacterial pathogens). Montes, N., Kausel, G., Haussmann, D. y Figueroa, J. Instituto de Bioquímica, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile. Novartis, Pto. Varas. (jefigueroa@uach.cl)

El rol de prolactina en peces se ha relacionado principalmente con osmorregulación durante la adaptación a agua dulce, y también se ha asociado a funciones estimulante del sistema inmune. Sin embargo, no se conocen los niveles de prolactina plasmática de peces sanos o expuestos a patógenos bacterianos. Nuestro objetivo es establecer si existe una modulación de la respuesta inmune por prolactina en peces desafiados con patógenos bacterianos, por ser esta la principal causa de muerte de salmones en cultivo siendo los alevines los más susceptibles.
Utilizando cromatografía de filtración en gel, intercambio iónico en CM-Sephacryl y HPLC, se purificó a homogeneidad prolactina a partir de hipófisis de Salmo salar adulto, con un rendimiento cercano a 12 mg de proteína/g de tejido. Esta fue empleada para diseñar un sistema de detección en plasma de peces sanos y desafiados, pero sobrevivientes al desafío, a través de ELISA indirecto utilizando un anticuerpo específico para prolactina de S. salar. La cuantificación de la hormona en plasma se complementa con la detección por inmunohistoquímica en pituitaria de los mismos peces y evaluando además los niveles de expresión del receptor de prolactina en leucocitos.
El estudio del efecto modulador de hormonas sobre la respuesta inmune de peces puede llevar a un mejor entendimiento de ambos y tener importantes implicaciones para la acuicultura.
Fondecyt 1040073

 

31.- DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD QUINONA-REDUCTASA EN HONGOS DE PUDRICIÓN DE LA MADERA. (Quinone-reductase activity determination in wood rot fungi). Núñez, F., Osorio, J.P., Contreras, D., Valenzuela, S., Freer, J., Rodríguez, J. Laboratorio de Recursos Renovables, Universidad de Concepción.

Los hongos de pudrición degradan madera mediante sistemas oxidativos. En este proceso participa una reacción de Fenton que produce radicales hidroxilo a partir de la reducción de H2O2 por Fe(II). Esta reacción es conducida por dihidroxibencenos a través de un ciclo redox quinona-hidroquinona y cuya actividad ha sido observada en el medio extracelular; para cerrar este ciclo ha sido reportada la participación de una quinona-reductasa, no conociéndose aún su rol específico en este proceso.
En este trabajo se determinó la actividad quinona-reductasa presente en hongos de pudrición blanca y parda, además de su relación con la expresión de proteínas mediante SDS-PAGE.
Se comprobó que ambos tipos de hongos de pudrición son capaces de reducir o-quinona, desplazando el equilibrio de la reacción de oxidación de catecol a o-quinona, hacia los reaccionantes. Estos hongos también presentan la capacidad de reducir p-quinona. El ácido vanílico tiene un efecto inductor sobre la actividad quinona-reductasa en hongos de pudrición parda y en algunos hongos de pudrición blanca; esta inducción no sería de carácter alostérico.
Existe una relación entre el aumento de la actividad quinona-reductasa, producto de la inducción con ácido vanílico, y la aparición de una banda característica en los geles de electroforésis.
Agradecimientos: DIUC 201.023.028.1.4 y beca apoyo tesis doctoral 2003 CONICYT.
Socio Patrocinador: Dr. León Bravo

32.- AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE FERREDOXIN NADP+ REDUCTASA PUTATIVA DE Gracilaria chilensis. (Isolation and functional characterization of Ferredoxin NADP+ reductase in red algae: Gracilaria chilensis) Wandersleben T., Bunster M. Laboratorio de Biofísica Molecular, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Grupo de Biología Estructural, Universidad de Concepción.

La Ferredoxin NADP+ reductasa (FNR) es una enzima que participa en la fotosíntesis catalizando la transferencia electrónica desde Ferredoxina o Flavodoxina a NADP para dar origen a la forma reducida de este último. Esta enzima se ha aislado desde plantas superiores, algas eucarióticas y cianobacterias y se ha descrito que presentaría una asociación estructural con los ficobilisomas, que son complejos auxiliares de captación de luz en cianobacterias y algas rojas.
La mayor parte de los estudios de caracterización de la FNR asociada a ficobilisomas se ha realizado en organismos unicelulares y principalmente cianobacterias, por ser de más fácil manipulación; nosotros en este trabajo presentamos la caracterización de la enzima correspondiente a un organismo eucariótico y pluricelular como es el alga roja Gracilaria chilensis.
La FNR fue aislada de Gracilaria chilensis mediante técnicas de precipitación y cromatográficas (cromatografía intercambio iónico y afinidad) obteniéndose parcialmente pura, esta presentaría un peso molecular aproximado de 35 kDa obtenido mediante SDS PAGE. Los parámetros cinéticos que corresponden a KM 16 ± 0,3 µM y kcat 0,0175 s-1 lo que nos daría una eficiencia catalítica de 0,0011 µM-1 s-1, lo que concuerda con la información reportada para otras FNR.
Agradecimientos: Proyecto DIUC N° 202.31.91-1.0

33.- ROL DEL DOMINIO CARBOXILO EN LA POLIMERIZACIÓN DE FTSZ DE E. COLI (Rol of the carboxil domain in the polymerization of E. coli FtsZ) Garcés, A., Díaz, R., Arbildua, J., Lagos, R., Monasterio, O. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

FtsZ es una GTPasa que participa en la división celular bacteriana. FtsZ de Methanococcus jannashii posee dos regiones denominadas dominio amino, responsable de la unión del nucleótido, y dominio carboxilo, cuya función aún no está determinada. Para establecer las zonas estructurales importantes de este dominio para la polimerización, se construyó por modelaje comparativo el monómero de EcFtsZ y se analizaron sus movimientos internos, y se encontró una correlación dinámica entre ambos dominios. Estudios de conservación y mutaciones correlacionadas mostraron una red de aminoácidos correlacionados, con Y222 como eje central en la interacción proteína-proteína durante la polimerización. Para identificar los cambios conformacionales inducidos por la hidrólisis del GTP durante la polimerización, se hizo un alineamiento estructural con los modelos diméricos de EcFtsZ en las conformaciones GTP y GDP. Se determinó que la mayor variación ocurre entre los residuos V260 a A290. Se diseñaron, modelaron, sobreexpresaron y purificaron las mutantes Y222W e I294W. La polimerización de Y222W mostró polímeros más estables, con una concentración crítica similar a la de FtsZ silvestre, I294W no polimerizó y la actividad GTPásica se inhibió. Se concluye que la zona carboxilo terminal participa en la hidrólisis de GTP y en la estabilización de los polímeros.
Financiado por FONDECYT 1010848

34.- INTERACCIÓN DE APOLIPOPROTEÍNA A-I CON MEMBRANAS DE EUCARIONTES Y PROCARIONTES. (Interaction of apolipoprotein A-I with eukaryotic and prokaryotic membranes). López R., Villanueva J., Álvarez, C., Báez, N., Concha M.I., y Amthauer R. Instituto de Bioquímica, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile, Valdivia, Chile.

Recientemente, se ha descrito que apolipoproteína A-I (apoA-I), componente proteico mayoritario de HDL presenta actividad antimicrobiana además de su conocida función en el metabolismo lipídico. Para ambas funciones la interacción de apoA-I con membranas se postula como fundamental. A pesar de la escasa similitud que presentan las apoA-I en distintas especies, estas conservan su estructura global caracterizada por extensas regiones de a hélices anfipáticas. Debido a su mayor contenido de estructura a helicoidal hemos utilizado como modelo para los estudios de interacción con membranas apoA-I de carpa. Nuestros estudios demuestran que apoA-I se asocia con membranas tanto de eucariontes como procariontes. A pesar de ello no fue posible detectar unión de apoA-I a proteínas en membranas de ribete en cepillo intestinales mediante análisis de "ligand blot", lo que sugiere una interacción directa con la bicapa lipídica al menos en este sistema. Esta idea es reforzada por la capacidad de apoA-I de unirse a vesículas de dimiristoilfosfatidil colina. Por otra parte, también hemos demostrado la unión de apoA-I tanto a bacterias gram negativas y positivas lo que probablemente reviste importancia para su mecanismo de acción antimicrobiana. Finalmente cabe destacar que no solo apoA-I libre sino también aquella asociada a HDL es capaz de unirse a membranas de distintos orígenes.
DID-UACh S-200353.

35.- CARACTERIZACIÓN DE SUBCOMPLEJOS DE FICOBILISOMAS EN GRACILARIA CHILENSIS. (Characterization of phycobilisome subcomplexes from Gracilaria chilensis). Burgos, F.; Figueroa, M.; Pouchucq, L. Bunster, M. Laboratorio de Biofísica Molecular, Depto. Biología Molecular y Bioquímica, Grupo de Biología Estructural, Facultad Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción.

La fotosíntesis comienza por la absorción de un fotón a través de complejos accesorios denominados ficobilisomas, formados de proteínas (ficobiliproteínas y proteínas de unión "linkers") y pigmentos accesorios, los cuales permiten a cianobacterias y algas eucarióticas optimizar la captación luminosa y su transferencia hacia los centros de reacción con una eficiencia cercana al 100%. Los ficobilisomas están constituidos por un "core" central anclado a la membrana tilacoidal formado principalmente por aloficocianina (APC), y "varillas" que irradian desde el core hacia la periferia formadas por ficoeritrina (PE) y ficocianina (PC). El aislamiento de los ficobilisomas de Gracilaria chilensis se realiza en un gradiente de sacarosa en buffer fosfato 0,9M pH 7. Al disminuir la fuerza iónica del medio es posible la disociación parcial de los componentes del ficobilisoma y su separación en un gradiente de sacarosa permitiendo la obtención de fracciones enriquecidas en varillas y core. Utilizando una concentración 0.4M de buffer fosfato pH 7 se obtienen diferentes fracciones enriquecidas en varillas, con asociaciones PC-PE, PE-PE, mientras que utilizando concentraciones 0.5M y 0.6M es posible identificar fracciones enriquecidas en core, acompañadas de componentes remanentes de varillas. Las fracciones aisladas, tanto de varillas como core, han sido caracterizadas mediante SDS-PAGE, espectrofotometría y espectrofluorimetría, permitiendo la identificación de los componentes de los subcomplejos aislados, asociación de linkers y propiedades espectrales.
Agradecimientos: Proyecto DIUC 202.31.91-1.0

 

36.- CAMBIOS EN LA ESPECIFICIDAD DE LA ARGINASA POR MUTAGÉNESIS SITIO-DIRIGIDA (Specificity changes in arginase by site-directed mutagenesis). Ricardo Alarcón, María S. Orellana, Paula Enríquez, Mónica Salas, Nelson Carvajal. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción.

La arginasa y la agmatinasa hidrolizan sustratos guanidínicos estructuralmente relacionados, producen urea, requieren Mn2+ para su actividad catalítica y sus secuencias muestran residuos altamente conservados. Sin embargo, el sustrato de una prácticamente no es hidrolizado por la otra. Comparando las estructuras cristalinas disponibles para las arginasas de hígado de rata y de B. caldovelox y un modelo estructural generado para la agmatinasa de E. coli, hemos sugerido que un importante determinante de la especificidad radica en un loop que contribuye a la formación del sitio activo en las arginasas y que incluye los ligandos para el a-carboxilo de la arginina. Para probar la validez de nuestra hipótesis, hemos reemplazado, mediante mutagénesis sitio-dirigida, algunos de los residuos que conforman este loop en la arginasa humana. En este trabajo se muestran los resultados obtenidos con la mutante doble N130D/S137A. La mutante no presentó cambios en los espectros de fluorescencia, sensibilidad térmica, ni el mecanismo cinético, mostrando solo ligeros cambios en la Vmax y la Km para arginina. Sin embargo, a diferencia de la especie silvestre, presentó una significativa actividad con agmatina como sustrato (15-20 % de la actividad arginasa), con una Km del orden de 1 mM. En base a los resultados obtenidos, concluimos que la composición y estructura del loop analizado es uno de los determinantes en el reconocimiento de la arginina y/o agmatina como sustrato por parte de la arginasa de hígado humano.
Fondecyt 1030038

PLEGAMIENTO IN VIVO DE a TUBULINA RECOMBINANTE: EFECTO DE LA MUTACIÓN SITIO DIRIGIDA E254Q. (In vivo folding of a recombinant a tubulin: effect of the site-directed mutation E254Q) Díaz, C., Fuentes, R., Pouchucq, L., Lagos, R., Fernández, J., Monasterio, O. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

El ensamblaje de los microtúbulos ocurre por la modificación de la inestabilidad dinámica, cambio estocástico entre fases de crecimiento y acortamiento por la ganancia o pérdida de heterodímeros de a/b tubulina. La identificación de los mecanismos responsables de la inestabilidad dinámica es importante para la comprensión de los procesos que regulan la organización del citoesqueleto in vivo e in vitro. La hidrólisis de GTP por el heterodímero, es el evento más importante en este proceso. La utilización de una proteína recombinante para estudios estructurales y funcionales no ha sido posible pues a y btubulina se expresan como cuerpos de inclusión y no polimerizan. Para realizar ambos estudios hemos montado, entonces, un sistema en el que a y b tubulina purificadas de cuerpos de inclusión, mediante cromatografía de intercambio, son marcadas con una sonda fluorescente y microinyectadas en ovocitos del pez cebra voluminosos, transparentes y manipulables. La proteína incorporada en microtúbulos no afectó el normal desarrollo del ovocito. Se construyó el mutante de a tubulina E254Q, residuo que se postula activa la hidrólisis de GTP. La proteína mutada afectó el desarrollo normal del ovocito, lo que abre un camino para el estudio de otros residuos implicados en la regulación de la dinámica de los microtúbulos.
FONDECYT 1010848, 1030879.

Inmunología

37.- GENERACIÓN DE LÍNEAS DE LINFOCITOS T ESPECÍFICOS PARA PÉPTIDOS DERIVADOS DEL ANTÍGENO TUMORAL MC1R. Generation of Citotoxic T Lymphocyte lines specific for peptides derived from the tumor antigen MC1R. Ramírez, M., Beltrán, C., Salazar-Onfray, F. Programa Disciplinario de Inmunología, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de medicina, Universidad de Chile.

The Melanocortin 1 Receptor (MC1R) is the natural ligand for the a-Melanocyte-Stimulating hormone (a-MSH) a peptide hormone that belongs to a new subfamily among the G-protein-coupled receptors. We have demonstrated that MC1R is over-expressed in melanoma cell lines and fresh tissues and also expressed in some normal tissues. Using computer algoritms we identified three nanomeric peptides; MC1R 244(TILLGIFFL), MC1R283 (FLALIICNA), and MC1R291 (AIIDPLIYA) derived from MC1R, whose can elicit peptide specific CTLs from normal donor PBL and also can recognized naturally processed antigens in melanoma cell lines. In this report, we investigate the capability of a panel of modified synthetic peptides to increase affinity to HLA-A2 and also elicit peptide specific CTLs which can recognize native peptides increasing the immunogenicity of a potential peptide immunization. We measured peptide affinity to HLA-A2 trough the stabilization of MHC class I on T2 cell surface using flow cytometry. We selected several modified peptides and now we are testing a novel protocol for CTL induction, based on the activity of several cytokines such as IL-6, IL-12, IL-2 and IL-7. Until now, our results demonstrate that it is possible to generate peptide specific CTLs from PBL against modified MC1R derived peptides demonstrating that CTL specific to MC1R derived antigens are not clonally eliminated in thymus.

(Paso a Comunicaciones Orales)

 

8.- EXPRESIÓN CONSTITUTIVA E INDUCIBLE DE RECEPTOR DE MELANOCORTINA 1 (MC1R) EN MELANOMA OCULAR (Constitutive and cytokine induced expression of Melanocortin 1 Receptor (MC1R) in uveal malignant melanoma). Pereda+C., López+M., Serrano+A., Salazar-Onfray+.F. + Disciplinary Program of Immunology, Institute of Biomedical Sciences, Faculty of Medicine, University of Chile, Santiago, Chile.

Uveal melanoma is a highly malignant tumor of the eye. These tumors have been shown to express a number of melanoma-associated markers. We have described a strong expression of MC1R, a melanoma specific marker, in primary and metastatic cutaneous melanomas. In this study, we have analyzed the expression of MC1R in uveal melanomas and compared it with other common markers used for diagnosis. We have studied the in vitro effect of pro inflammatory cytokines in the regulation of MC1R surface expression. METHODS: Seventeen uveal melanomas were immunolabeled with a panel of antibodies that included S100, HMB-45,A103 and the novel monoclonal antibody MP4-1B7. We also studied MC1R expression by flow cytometry and western blot. RESULTS: The immunohistochemical labeling were evaluated by an arbitrary scale: -,+/-,+ on the basis of the intensity of the immunoreactivity. The MC1R protein was detected in 95 percent (16/17) of the tested melanoma tissues. HMB-45 immunolabeled 66 percent (8/12) of the tested melanomas. S100 was detected only in 33 percent (5/15) of the analyzed samples. All tested melanoma cell lines (4/4) were positive for MC1R. We demonstrated that surface expression of MC1R is up regulated in vitro by cytokines such as, IFN-g, TNF, and IL-10 which may be relevant for antibody mediated immunotherapy. CONCLUSIONS: MC1R protein is more frequently expressed in uveal melanomas than the proteins recognized by HMB-45 and S100 antibodies and might therefore also be included as target for the antibody panel used for diagnosis of uveal melanocytic lesions.
Supported by Fondecyt 1031005

39.- ACTIVACIÓN DE NF-kB EN LINFOCITOS AUTORREACTIVOS ANTI-Tg DE RATÓN. (NF-kB activation in mouse autoreactive Tg-specific lymphocytes). Aguilar GA., Vera A., Esquivel P. y Barria M. Instituto de Inmunología, Facultad de Medicina, Universidad Austral de Chile.

La tiroiditis autoinmune experimental es un modelo experimental de tiroiditis de Hashimoto, enfermedad autoinmune órgano específica, mediada por células T, la cual se caracteriza por la infiltración de la glándula tiroides, además de la producción de autoanticuerpos anti-tiroglobulina. La tiroiditis puede ser inducida en ratones genéticamente susceptibles, por medio de la inyección de tiroglobulina (Tg) en dosis repetidas o en combinación con coadyuvantes como lipopolisacáridos (LPS).
Se puede afirmar que el desencadenamiento y progresión de la autoinmunidad depende de la expresión de varios genes, cuyo control involucraría fuertemente a la proteína dimerica NF-kB. El objetivo de este trabajo fue evaluar la activación del factor de transcripción NF-kB en linfocitos de ratones con tiroiditis autoinmune experimental, y comparar con la respuesta linfoproliferativa de las células sensibilizadas in vivo. Después de 2 inmunizaciones los animales fueron sacrificados, se obtuvieron ganglios linfáticos y los linfocitos estimulados in vitro con Tg. Se evaluó la respuesta linfoproliferativa mediante incorporación de timidina y la activación de NF-kB mediante "southwestern".
Los resultados demuestran que las células estimuladas con el Tg presentaron una activación significativa de NF-kB, y se puede correlacionar directamente con la respuesta linfoproliferativa, por ello podemos postular la participación de NF-kB en la activación de linfocitos autorreactivos Tg- específicos.
Trabajo Financiado por Proyecto DID-UACH S-200011.

40.- QUIMERISMO EN CÉLULAS DENDRÍTICAS EN PACIENTES CON ENFERMEDAD INJERTO VERSUS HUÉSPED (IvH). Dendritic cells chimerism in patients with Graft versus Host Disease. Pérez C, Alfaro J, González F, López M, Larrondo M, Conte G, Salazar-Onfray F. Terapia Celular, Banco de Sangre, Servicio de Hemato-oncología, Servicio Dentomaxilofacial Hospital Clínico U. de Chile. Programa de Inmunología Facultad de Medicina. Universidad de Chile.

La IvH es la principal complicación del trasplante de médula ósea. Es iniciada por células T del donante que reconocen péptidos asociados al complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) en células presentadoras de antígenos (APC), entre ellas, las células dendríticas (DCs).
En alo-trasplante, coexisten APCs derivadas del receptor y el donante En ratones, se demostró que la presencia de APC derivada del receptor es responsable de IvH y que la inmunosupresión de ellas previene la aparición de IvH. En humanos, no existe claridad acerca del origen de las poblaciones hematopoyéticas involucradas. Postulamos que en tejidos afectados por IvH predominarán DCs del receptor, y que su presencia estaría relacionada con el daño tisular.
Método: Se han estudiado tres pacientes sometidos a TMO HLA compatibles con acondicionamiento no mieloablativo. Dos de los pacientes presentaron IvH en mucosa oral. Se evaluaron LT y DCs separadas por columnas de inmunobeads CD3 y CD11c respectivamente. Se extrajo DNA de DCs tejido y LT de sangre periférica. Quimerismo fue evaluado en estas poblaciones celulares mediante PCR de secuencias repetidas en tandem (STR).
Resultados: Los tres pacientes presentaron quimerismo completo en DCs y LT
Conclusiones: Los pacientes trasplantados presentan una quimera completa de DCs y LT. A diferencia de modelos murinos, la IvH en los casos estudiados no estarían mediada por DCs de origen receptor, sino por DCs alogénicas.
Proyecto Líneas prioritarias 2003-Hospital Clínico U. de Chile

41.- DETECCIÓN DE LT MELANOMA ESPECÍFICOS EN PACIENTES CON MELANOMA MALIGNO TRATADOS CON CÉLULAS DENDRÍTICAS ANTÓLOGAS CARGADAS CON LISADO TUMORAL (Detection of anti melanoma specific t cells in PBMC of melanoma patients treated with autologous dendritic cells loaded with tumor cell lysates). Escobar A., López M, Aguirre A., Serrano A., Larrondo M., Fodor M., Ferrada C., Salazar-Onfray F. Disciplinary Program of Immunology, Institute of Biomedical Sciences, Faculty of Medicine, University of Chile.

Dendritic cells (DC)-based therapy has proven to be effective in patients with malignant lymphoma, melanoma, and renal and prostate carcinoma. The objectives of this study were to assess the toxicity and immunological response induced by the intradermal administration of melanoma lysate-pulsed DCs in a clinical phase I trial. Thirteen patients with stage III or IV malignant melanoma were vaccinated i.d. four times with 3.5 to 15 x 106 DCs/dose every 10 days. Each vaccine was composed of a mixture of autologous DCs pulsed with tumor lysate from two allogenic melanoma cell lines in the presence of KLH. Twelve patients received all four vaccines and were examined for toxicity and/or immunological responses. There were no grade III or IV toxicities associated with the vaccines or major evidence of autoimmunity. An increased IFN-gamma production by PBMCs in response to melanoma cell lines but not to non-melanoma tumor controls could be observed in 7 of 12 tested patients after the second vaccination. In vivo DTH reactions were observed in 6 of 12 tested patients. Four patients experienced an stable disease after more than 20 months, three patients showed progression of the disease and one patient died during the treatment. Partial regression of local metastasis was observed in two patients. The administration of tumor lysate-pulsed DCs are nontoxic and capable of inducing immunological response to tumor antigen. (Supported by FONDEF DO2I1088).

42.- POLIMORFISMOS EN GENES DE CITOQUINAS PROINFLAMATORIAS: SU PRODUCCIÓN ex vivo Y SU ASOCIACIÓN CON LA PERIODONTITIS. (Polymorphisms on proinflammatory cytokine genes: their ex vivo expression and association with periodontitis). González, F. E.(1-2), Pavez, V (3) y Aguillón, J.C.(1).(1)Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM. (2)Servicio Dentomaxilofacial Hospital Clínico (3) Facultad de Odontología. Universidad de Chile. Financiamiento: Hospital Clínico Universidad de Chile, Proyecto 016-03.

La periodontitis constituye la principal causa de pérdida de dientes en la población adulta de nuestro país. Es una enfermedad infecciosa que produce la destrucción de las estructuras de soporte del diente mediante una desregulación de la producción de mediadores catabólicos que incluyen citoquinas proinflamatorias tales como IL-1b y TNFa. Los polimorfismos en genes de citoquinas han cobrado importancia como eventuales marcadores genéticos de esta enfermedad. Se estudió la asociación entre los polimorfismos en las posiciones _308 TNF, +3954 y _511 IL-1B,`_889 IL-1A y el intrón 2 del gen IL-1RN con la susceptibilidad de presentar periodontitis agresiva (PA). Además se evaluó la expresión de IL-1b y TNFa. Se reclutaron 30 pacientes con PA y 30 controles, los cuales fueron genotipificados mediante PCR-RFLP. La expresión de citoquinas se realizó en un modelo de cultivo ex vivo de sangre completa estimulada con LPS. Los resultados preliminares no han mostrado diferencias significativas entre los genotipos de pacientes PA y los individuos controles. Sin embargo, la presencia del genotipo 1.2 en las posiciones IL-1A -889 e IL-1B +3954, mostraron los mayores riesgos relativos para PA (OR = 2.6 y 1.7 respectivamente). Los niveles de TNFa e IL-1b inducidos por LPS fueron mayores en el grupo PA (p=0.0414). No se ha encontrado asociación entre los polimorfismos estudiados, la producción ex vivo de citoquinas y la presencia de PA. Sin embargo, los monocitos de los pacientes PA expresan niveles mayores de citoquinas que los individuos controles.

43.- Efecto de la concentración de glucosa sobre la viabilidad de linfocitos T sometidos a estrés oxidativo. (Effect of glucose concentration on the viability of T-lymphocytes under oxidative stress). 1Bustamante, M., 1Maulén, N., 1Kirsten, L, 1Díaz, F., 1Muñoz, M., 1Núñez, L, 1Llancaqueo, A., 1Venegas, J., 2Torres, C., 3Vera, J., 3Rivas, C. & 4Bachem, M. 1Laboratorio de Diagnóstico Molecular, Facultad de Medicina, Universidad Católica de la Santísima Concepción, Concepción, 2Hospital Higueras, Talcahuano, 3Dpto. Fisiopatología, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción. Concepción. 4Institut für Klinische Chemie, Medizinische Fakultät, Universität Ulm, Alemania.

La diabetes mellitus tipo II es un factor de riesgo asociado a la enfermedad aterosclerótica. En la génesis de esta se ha demostrado la participación de células del sistema inmune, tales como linfocitos T y monocitos y las lipoproteínas oxidadas (oxLps), estas últimas ejercen un efecto dual; a bajas concentraciones, poseen un efecto quimiotáctico, siendo capaces de activar estas células y favorecer su proliferación, mientras que a concentraciones elevadas ejercen un efecto citotóxico. En la literatura no se registra información concluyente acerca de los mecanismos celulares que median los efectos de las oxLps sobre las células mononucleares, ni tampoco si la condición diabética, definida por una hiperglicemia crónica, modula de algún modo, la acción de estas oxLps sobre ellas. Utilizando citometría de flujo e inmunofluorescencia se estudió el efecto de concentraciones de glucosa y oxLps sobre la necrosis y/o apoptosis de linfocitos T en reposo obtenidos de sangre periférica de sujetos normales. Además, se estudió el efecto de inhibidores de las MAP quinasas, p38 y p42/44 sobre la inducción de muerte celular por glucosa y/o estrés oxidativo. Las concentraciones crecientes de glucosa indujeron principalmente necrosis y en presencia de oxLps se produjo un efecto sinérgico. Los inhibidores SB 203580 y PD 98059 respectivamente, fueron capaces de revertir el efecto, principalmente, apoptótico inducido por la glucosa y las oxLps, sugiriendo la participación de MAP quinasas en el proceso de inducción de apoptosis.
Financiado por proyectos FONDECYT 1040977, 1040475 y 1020451.

44.- MÚLTIPLES FUNCIONES DE GALECTINA-1 y 4- EN CÁNCER MAMARIO Y LA RESPUESTA INMUNOLÓGICA. Fuentes P., Parra E. Laboratorio de Terapia Génica y Transducción de Señales. Programa Disciplinario de Farmacología/Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile

Una de las patologías de mayor prevalencia en Chile es cáncer mamario, con alteraciones en el patrón de expresión y secreción proteico, dentro de ellas, las galectinas, asociadas a unión a carbohidratos, adhesión a matriz extracelular, tráfico celular y un efecto inmunosupresor por interacción con receptores de linfocitos T.
Estudios preliminares han mostrado aumento en expresión y secreción de galectina-1 y -4 en pacientes con cáncer mamario, aumento en la capacidad de adhesión de las células tumorales a la matriz extracelular, metástasis e infiltración celular y efecto inmunosupresor dificultando acción del sistema inmune contra las células tumorales. En especial, se ha observado que la sobreexpresión de galectina-4 está altamente asociada con hiperproliferación epitelial en biopsias benignas, las cuales luego progresan a maligna. En adición, demostramos que células T tratadas con galectina-1 estimuladas con un péptido-antígeno llamado Thonsen-Friedenreich fueron incapaces de producir interleuquina dos (IL-2), así como también interferón gamma. Funcionales estudios en células leucémicas Jurkat usadas como un modelo alternativo de células T y transfectadas con genes reportero de IL-2, IFN-gamma e IL-4, demostraron ser incapaces de responder transcripcionalmente al ser estimuladas, sin embargo en presencia de un inhibidor de la galectina-1 respondieron satisfactoriamente.
Estos resultados en las variaciones en la respuesta y presencia de galectinas-1 y -4 constituirían una interesante herramienta predictiva con aplicación clínica en cáncer así como también contribuirían en el entendimiento del comportamiento de la respuesta inmunológica asociada a la presencia o ausencia de las galectinas.
Proyecto FONDECYT 1020943

Paneles II

Ecología

45.- PLANTAS INTRODUCIDAS EN LA RESERVA NACIONAL ALTOS DE LIRCAY, VII REGIÓN (Exotic plants at Reserva Nacional Altos de Lircay, VII Región) Suardo, AK & Bustamante RO. Departamento de Ciencias Ecológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

Las invasiones de plantas exóticas constituyen una amenaza para la biodiversidad. Las perturbaciones y atributos de la vegetación nativa determinarían el éxito de invasión. Se investigó si los caminos y los tipos de vegetación afectan la riqueza de plantas exóticas en la Reserva Nacional Altos de Lircay (RNAL). Se seleccionaron dos caminos que diferían en grado de perturbación y que cruzaban parches de bosque y de matorral. Se trazaron transectos perpendiculares a los caminos y se registró la riqueza de especies herbáceas exóticas.
No se encontraron especies exóticas en el sendero menos perturbado. En el sendero más perturbado se registraron 7 especies (13% del total). No se encontraron diferencias en la riqueza de especies introducidas con el tipo de parche, pero en bosque, se encontró una relación negativa entre la riqueza de especies y la distancia al sendero. Esta relación desaparece en el matorral. Dentro del bosque, la riqueza de especies fue menor cuando la cobertura del dosel aumentó.
La riqueza de plantas exóticas en la RNAL estaría positivamente relacionada con el grado de perturbaciones que presentan los senderos, pero además con las condiciones estructurales de la vegetación (i.e. cobertura del dosel) que parece ser muy relevante para determinar las invasiones de plantas exóticas.
FONDECYT 1040628

46.- EL ROL DEL CLIMA EN LOS PATRONES DE DISTRIBUCIÓN DE LA FLORA INTRODUCIDA DE CHILE CENTRAL Y CALIFORNIA, ESTADOS UNIDOS. (The role of climate in distribution patterns of alien plants in central Chile and California, United States) 1Jiménez, A., 2Pauchard, A., 1Cavieres, L., 1Marticorena, A.& 3Bustamante, R. 1Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas. Universidad de Concepción. 2Facultad de Ciencias Forestales. Universidad de Concepción. 3Facultad de Ciencias. Universidad de Chile. e-mail: aljimene@udec.cl

La zona central de Chile y el Estado de California, EE.UU., presentan un clima similar y una alta actividad antrópica, por lo que comparar los patrones de distribución de especies introducidas, permitiría elucidar los factores más relevantes en los procesos de invasión. En Chile existe escasa información respecto a las invasiones, por lo tanto, este estudio resulta una primera aproximación respecto de la flora introducida. Se analizan datos de herbario, comparando las floras latitudinalmente desde el nivel de especies hasta familias. Se encontró una baja similitud entre las especies introducidas de Chile y California. Sin embargo, existen gradientes latitudinales análogos entre ambas regiones. En Chile, se contabilizaron 600 especies introducidas y en California 1.191, de las cuales, 386 se encuentran en ambas regiones. Diecinueve especies nativas de California crecen en Chile y 42 nativas de Chile en California. Este estudio contribuye al conocimiento de la flora exótica de Chile y de los mecanismos que determinan la invasión de ecosistemas naturales.
Agradecimientos: FONDECYT 1040528

47.- Vacíos de conservación en las mariposas diurnas de Chile y prioridades geográficas para su conservación. (Gap analysis of Chilean diurnal butterflies and geographic priorities for their conservation). Concha-Bloomfield, I.; Marquet, P. A.; Barría, I. & Parra, L.E. Departamento de Zoología, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción; Centro de Estudios Avanzados en Ecología y Biodiversidad & Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile.

La lepidopterofauna nacional ha sido objeto de diversas investigaciones, sin embargo, son escasas las concernientes a su distribución geográfica e inexistentes las que evalúan su representatividad en la red de áreas protegidas (RAP). Por esto, el objetivo de este trabajo es evaluar la representatividad de lepidópteros diurnos en las áreas protegidas de Chile. Para ello se realizó el primer "Gap analysis" de lepidópteros para Chile. Este identificó a Chile Central como una zona de alta concentración de especies, la cual alberga entre el 47%-53% de mariposas, mientras que la menor concentración de estas se encuentra en la zona Austral. Además, reveló la existencia de 6 especies "gap" (que no están representadas en la RAP), que corresponden al 4,5% de las especies analizadas. La familia Lycaenidae es la menos representada, ninguna de sus especies se encuentra totalmente protegida y además, posee el mayor número de especies endémicas (63%).
Se identificaron 4 prioridades geográficas para la conservación de las mariposas diurnas: Ecorregión del Desierto Costero de Atacama, Ecorregión de la Puna, Ecorregión del Matorral y del Bosque Valdiviano.
De las mariposas chilenas solo el 6,1% se encuentran totalmente protegidas, por lo tanto, el SNASPE no cumple en forma eficiente su rol de representar la diversidad de este taxón. Trabajo financiado por FONDECYT-FONDAP 1501-001.

48.- EVALUACIÓN DE LA TOXICIDAD CRÓNICA DEL INSECTICIDA CLORPIRIFOS SOBRE 'PORCELLIO SCABER (CRUSTACEA, ISOPODA). (Evaluation of the cronic toxicity of the insecticide Chlorpirifos on Porcellio scaber (Crustacea, Isopoda). Rodríguez, P.1; Bay-Schmith, E.1 & R. Barra2. 1Laboratorio de Bioensayos, Universidad de Concepción. 2Centro Eula-Chile.

Clorpirifos es un organofosforado de amplio espectro, presenta una alta persistencia en el suelo (60-120 días) y es prácticamente inmóvil (Coeficiente de partición de carbono orgánico, Koc >2000).
P. scaber es un isópodo terrestre componente importante de la fauna humícola, participando en los ciclos biogeoquímicos. Como especie no objetivo del control químico de los pesticidas se considera adecuada para estimar el daño potencial que implica la utilización de estos sobre la fauna del suelo.
En este trabajo se evaluó la toxicidad crónica del Clorpirifos sobre P. scaber en parámetros subletales como las tasas de crecimiento y reproducción; así también los niveles de concentración de Clorpirifos que tienen efecto inhibitorio sobre la acetilcolinesterasa, sitio de acción del pesticida.
Los resultados revelan un NOEC de 1.56 µg/Kg y un LOEC de 3.12 µg/Kg para la tasa reproductiva, que se constituye en el parámetro más revelador de los efectos crónicos provocados por el Clorpirifos. Además se demostró su potencial teratogénico.
La inhibición de la tasa de crecimiento señala un NOEC de 25 µg/Kg y un LOEC de 50 µg/Kg.
La inhibición de la actividad acetilcolinesterasa está próxima a concentraciones letales del compuesto; sin embargo debe ser un factor a considerar para evaluaciones futuras, así como también el estudio de otros biomarcadores en isópodos chilenos.

49.- VARIABILIDAD GENÉTICA EN PECES NATIVOS DEL RÍO LAJA Y SU RELACIÓN CON LA CONSTRUCCIÓN DE UNA CENTRAL HIDROELÉCTRICA. "Genetic variability in native fishes from Laja river and its relationships with an hydroelectrical power station". Salgado, C1.; P. Victoriano1; E. Habit2 & R. Sánchez1. 1Dpto. Zoología. Fac. Cs. Nats. y Oceanográficas. 2Unidad de Sistemas Acuáticos. Centro Eula. Universidad de Concepción.

Se determinó la variación aloenzimática de Trichomicterus areolatus y Percilia irwini en cinco localidades del río Laja, en dos tiempos distintos: antes de la construcción de la hidroeléctrica Rucúe (año 1999) y cinco años después de la construcción. Se analizó un total de 15 presuntos loci, de los cuales 11 fueron variables en T. areolatus y 5 en P. irwini. Del análisis de divergencia se determinó que para ambas especies los mayores cambios de frecuencias alélicas ocurrieron entre periodos más que entre sitios. Los rangos de distancia genética fueron muy bajos, lo que sugiere que la diferenciación entre los grupos aguas arriba y aguas abajo es mínima. En cuanto a los niveles de variabilidad genética, T. areolatus mostró para todos los parámetros (heterocigosis, porcentaje de polimorfismo y alelos/locus) valores superiores a los mostrados por P. irwini.`Para T. areolatus y P. irwini, la localidad aguas arriba de la central mostró los mayores niveles de variabilidad genética en el año 2004 (postrepoblamiento). Esta situación sugiere un incremento de la variabilidad genética, generado por el repoblamiento de las partes altas de la cuenca, con grupos de individuos provenientes de poblaciones hiporitrales.
Proy. DIUC-UdeC 203.113.064-1.0

50.- CONDUCTANCIA Y ÁREA FOLIAR EN PODOCARPUS SALIGNA D. DON Y CRYPTOCARYA ALBA (MOL) LOOSER. (Conductance and foliar area in P. saligna D. Don and C. alba (Mol) Looser. Salazar, N.O. y Lusk, C. Departamento de Botánica, Laboratorio de Ecología Forestal, Universidad de Concepción, Chile.

Las coníferas y angiospermas difieren en una serie de rasgos vegetativos que potencialmente podrían determinar las diferencias en crecimiento y competitividad. Se ha sugerido que en coníferas existan limitaciones en el sistema de transporte por la anatomía del xilema. Por lo tanto, habría diferencias en el abastecimiento de agua a hojas y el despliegue foliar respectivo. Se postuló que la mayor área de las hojas de una angiosperma siempreverde, C. alba, frente a una conífera asociada, `P. saligna, se debería a su mayor conductancia hidráulica a un diámetro determinado. El estudio abarcó ramas de dichas especies. Se utilizó una técnica de medición de flujo de agua por la rama completa para obtener la conductancia hidráulica (K), incluyendo una balanza analítica, solución de KCl (10 mmolar) y conexiones plásticas. El área foliar fue medida utilizando un areafoliómetro. Existió una variación del área foliar con respecto al diámetro basal y la conductancia hidráulica fue significativamente mayor en C. alba que en P. saligna. Este parámetro explicaría en parte las diferencias en el despliegue foliar de ambas especies.
Apoyo proyecto FONDECYT 1030811 y Milenio (P02-051-F).

51.- ANÁLISIS DE LAS VARIEDADES DESCRITAS POR DUMÉRIL & BIBRON (1837) EN LA ESPECIE POLIMÓRFICA LIOLAEMUS PICTUS PICTUS. (Analysis of Duméril & Bibron (1837) varieties in the polymorphic species Liolaemus pictus pictus). Bourke, J. & J. C. Ortiz. Departamento de Zoología Facultad de Ciencias. Naturales y Oceanográficas. Universidad de Concepción.

Se ha señalado a Liolaemus pictus como una especie altamente polimórfica en su diseño y coloración. Se distribuye desde la cordillera de Chillán hasta el sur de Chiloé alcanzando las estribaciones orientales de la cordillera en Argentina. Se analizaron ejemplares provenientes de doce localidades, que abarcan prácticamente todo el rango distribucional de la especie. Para el reconocimiento de las variedades y la determinación de estas, ejemplares vivos y fijados fueron fotografiados y luego comparados los diferentes patrones de diseño y coloración. Se consideraron las líneas occipitales, manchas vertebrales, paravertebrales, diseños laterales, puntuaciones y otros, además de la distribución de la coloración. En los ejemplares fijados así como en los vivos se determinaron cinco variedades (A, B, D, E y F) de las cuales dos (A y B) corresponden a las descritas por Duméril y Bibron. Las tres primeras se presentan entre un 66,6 y 75% de los individuos en las doce localidades. En los ejemplares vivos además se determinaron dos variedades nuevas, exclusivas de la localidad de Las Cascadas (G y H). La variedad E se presenta preferentemente en individuos que se encontraban en su período de muda y la variedad F en individuos que no presentan sus cromatóforos expandidos.

52.- ¿QUÉ TAN ANTIGUA ES LA CAPACIDAD DE NADAR DE LOS CORDADOS? (How old is the capacity for swimming of chordates?). Vargas A.O.1 y Aboitiz F.2. 1Programa de Morfología, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. aovargas@med.cuchile.cl. 2Depto. Psiquiatría, y Centro de Investigaciones Médicas, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile.

La hipótesis clásica de que los cordados (cefalocordados + vertebrados) son pedomórficamente derivados de las larvas nadadoras de ancestros sésiles contrasta con los análisis filogenéticos moleculares, que han indicado que los ascidios y pterobranquios sésiles adquirieron este estilo de vida secundariamente, a partir de formas de vida libre. Además se ha revelado que los urocordados y cordados son tan relevantes para inferir el estilo de vida de los primeros deuterostomos como lo son los hemicordados y los equinodermos. La inferencia corregida es que los primeros deuterostomos probablemente eran de vida libre y capaces de nadar. Más aún, la evidencia molecular indica que los quetognatos nadadores son protostomos basales, sugiriendo que la capacidad para nadar ya estaba presente incluso en los ancestros que los deuterostomos comparten con los protostomos. Adicionalmente es posible que los ctenóforos sean el grupo hermano de los deuterostomos + protostomos. Los ctenóforos nadan por medio de hileras de placas de cilios longitudinalmente iteradas. Proponemos que las aletas natatorias de los cordados, que poseen estructuras ciliares en sus rayos, derivan últimamente de las hileras longitudinales de cilios presentes en remotos ancestros nadadores que comparten con los ctenóforos.
Núcleo Milenio de Neurociencias Integradas

53.- VARIABILIDAD POBLACIONAL EN LIOLAEMUS CYANOGASTER (DUMÉRIL & BIBRON, 1837) (TROPIDURIDAE). (Population variability in Liolaemus cyanogaster (Duméril & Bibron, 1837) (Tropiduridae)) Fernández-Reyes, M., J. C. Ortiz. Departamento de Zoología. Universidad de Concepción, Casilla 160-C. Concepción. email: martfern@udec.cl

Liolaemus cyanogaster es una especie de regiones boscosas, pero que prefiere los sectores de matorrales. Se reconocen dos subespecies: L. c. cyanogaster distribuida desde Concepción a Puerto Montt, y marginalmente en Argentina, y L. c. brattstroemi de la Isla de Chiloé. La última revisión sistemática la realizó Donoso-Barros (1966), basado exclusivamente en datos morfológicos. En este trabajo, se estudia la estructura genética poblacional y el grado de diferenciación genética entre las subespecies mediante electroforesis de proteínas y la variación morfológica poblacional desde dos enfoques: merística y morfometría tradicional y geométrica. Se analizaron 92 individuos provenientes de 12 poblaciones. Los resultados merísticos y morfométricos muestran que existen diferencias significativas entre las poblaciones estudiadas (p < 0.05). Sin embargo, este tipo de caracteres no define claramente un patrón distribucional. En cinco poblaciones se analizaron ocho sistemas enzimáticos codificados para 12 loci presuntivos. Valores altos de heterocigosidad (0.221) y polimorfismo (0.4167) evidencian variaciones poblacionales como los encontrados para otros lagartos. La distancia genética de Roger (0.112) y el valor de Fst (0.155) establecen la existencia de heterogeneidad genética interpoblacional, lo que evidencia una separación primaria entre las poblaciones del continente y Chiloé. No obstante, se consideran estos valores bajos, lo cual permite mantener el estatus subespecífico y no diferenciar la población de Chiloé como una especie distinta.

54.- Efectos del ruido en la comunicaciÓn acÚstica de anuros: Una aproximaciÓn neuroetolÓgica. (Effect of noise on anuran sound comunication: a Neuroethological Approach). Velásquez, N., Pottstock, H., Penna, M. Programa de Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Eupsophus calcaratus, un anuro del bosque templado del sur de Chile, se comunica por medio de vocalizaciones en un ambiente sonoro en que las principales interferencias corresponden a cantos coespecíficos y ruidos abióticos.
Para explorar el efecto de la estructura del ruido en la comunicación acústica, se expuso a machos de esta especie a ruidos naturales de viento, lluvia, arroyo, olas de mar y a un ruido sintético pasa-banda de intensidad moderada (66 dB SPL). Los animales aumentaron la tasa y duración del canto en presencia de los ruidos de arroyo, lluvia y pasa-banda. El incremento de la actividad vocal se mantuvo en presencia del ruido pasa-banda de intensidad alta (78 dB SPL). Además se estudiaron las respuestas extracelulares unitarias de neuronas mesencefálicas a tonos puros de la frecuencia característica, en presencia de ruido pasa-banda de varias intensidades. Los resultados muestran que algunas neuronas responden disminuyendo el número de descargas durante la presentación del tono en presencia de ruido, en tanto que otras mantienen inalterada su descarga al tono en estas circunstancias.
Las respuestas vocales y neuronales de machos de E. calcaratus sugieren la existencia de adaptaciones para la comunicación acústica en condiciones de gran interferencia, que dependen del procesamiento del ruido a nivel mesencefálico.
Financiamiento: Proyectos FONDECYT 1010569 y 1040830.

55.- el uso de Metadatos y bases de datos distribuidas para la investigaciÓn cientÍfica: la experiencia de caseb. (The use metadata and distributed database systems in scientific research: The CASEB experience. Samaniego, H. (horacio@unm.edu); Jaksic, F.M. Center for Advanced Studies In Ecology and Biodiversity (CASEB). P. Universidad Católica de Chile.

El fluido intercambio de información científica entre investigadores asociados a un centro de investigación solo es posible cuando existe una clara organización y descripción de los datos que se manejan. En este contexto el concepto de metadatos adquiere fundamental relevancia y facilita la comunicación entre investigadores. EML (Ecological Metadata Language) ha emergido como un lenguaje formal para la indexación de datos ecológicos y ha probado ser de gran utilidad para la organización de datos científicos. En CASEB se está desarrollando un sistema distibuido de metadatos donde se facilita la organización de los datos generados por distintos grupos de trabajo y hace, además, disponible dichos metadatos al público. En este trabajo se describen aspectos técnicos del sistema, su arquitectura y requerimientos. Además, se da cuenta de la experiencia adquirida en la implementación del sistema en CASEB con el fin de facilitar la implementación de sistemas similares en otros centros de investigación de tal manera de facilitar la comunicación e intercambio de datos entre centros de investigación y así potenciar la investigación científica en Chile.

56.- USO DE MICROHÁBITAT DEL CISNE DE CUELLO NEGRO (CYGNUS MELANOCORYPHA) EN EL SECTOR NORTE DE LAGUNA GRANDE DE SAN PEDRO DE LA PAZ, OCTAVA REGIÓN (CHILE). (Microhabitat use by black-necked swan (Cygnus melanocorypha) in northern area of laguna grande de san Pedro de la Paz (Chile)). Jara, F1., Reyes, F1. & P. Victoriano1. 1Depto. de Zoología. Fac. de Cs. Naturales y Oceanográficas. Universidad de Concepción.

Con el fin de estimar la relación entre los niveles de alteración de áreas ribereñas y la frecuencia de uso, se evaluó la utilización de microhábitat por parte de una población del cisne de cuello negro (C. melanocorypha) en el sector Norte de la Laguna Grande de San Pedro de la Paz (36° 50'S; 73° 6' W). Para ello se hicieron conteos por avistamiento entre los meses de diciembre de 2003 y mayo de 2004. Se identificaron 3 categorías de microhábitat ribereño según el grado de intervención humana asociada: (i) zona de intervención alta, (ii) intervención media, e (iii) intervención baja. Se aplicó un índice de selectividad basado en la "oferta de microhábitats" y frecuencias de uso. Los resultados indican que esta población de cisnes muestra una mayor preferencia por áreas de baja intervención antrópica (categoría iii, E= 0.139), lo cual sugiere que la calidad estructural de las riberas en sistemas lacustres urbanos es un factor que influye sobre la abundancia de cisnes. Se agradece a la I. M de San Pedro de la Paz por todo el apoyo técnico brindado para la realización de esta investigación.

57.- Biogeografía y genética de poblaciones de Spalacopus cyanus (Rodentia,Octodontidae). (Biogeography and population genetics of Spalacopus cyanus, Rodentia, Octodontidae) Bugueño, M.P., Opazo1, J.C., Carter, M.J, Palma, R.E. & Bozinovic, F. CASEB, Departamento de Ecología, Pontificia Universidad Católica de Chile; 1Center for Molecular Medicine and Genetics, Wayne State University, Detroit, MI 48201, USA.

Spalacopus cyanus es un roedor caviomorfo de vida fosorial y endémico de Chile que habita entre los 30 y 37 grados de latitud sur y desde la costa hasta los 3.000 MSNM, abarcando diferentes regiones climáticas. Se han descrito diferencias fenotípicas entre poblaciones costeras y de montaña, sin embargo, cromosómicamente estas son indistinguibles. En este trabajo se secuenció y analizó parte de la región control del mtDNA en siete poblaciones de S. cyanus (5 de la costa y 2 de montaña). El análisis de las secuencias realizado con los programas TCS y Network reveló una distribución haplotípica altamente estructurada. El análisis AMOVA evidenció un alto grado de diferenciación entre poblaciones dentro de grupos (costa y montaña) así como entre grupos, confirmando la poca vagilidad de la especie. El análisis de flujo génico (MIGRATE) sugiere escaso flujo entre las poblaciones y mediante un rearreglo de estas sugiere además un origen de montaña para la especie. Por otro lado, el análisis de crecimiento poblacional (FLUCTUATE) sugiere poblaciones estables, excepto para el caso de las poblaciones de montaña, las cuales tendrían un valor de g negativo.
Agradecimientos: Fondap 1501-0001 (programas 1 y 2).

Fisiología - Biología Celular

58.- MutaciÓn H63D de HFE: PÉrdida de función asociada a incapacidad de alcanzar la membrana APICAL. (H63D mutation of HFE: loss of function associated with inability to reach the apical membrane). Araya R1., Arredondo M2., Aguirre P1., Tapia V1., Reyes F2., Mura C1., Zapata G1, Núñez M.T1. 1Instituto Milenio CBB, Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. 2Unidad de Micronutrientes, INTA, Universidad de Chile.
Patrocinio: FONDECYT, proyectos nº 2990116 y 1040448 e Instituto Milenio CBB proyecto nº P99-031F.

La Hemocromatosis Hereditaria (HH) es un desorden del metabolismo del hierro caracterizado por un aumento en la absorción intestinal, acumulación y progresiva sobrecarga de Fe. Dos mutaciones independientes en la proteína HFE, H63D y C282Y, se encuentran en aprox. 90% de los casos de HH. En este trabajo se propone que la expresión del mutante H63D no causa la inhibición de la captación apical de Fe observada al sobreexpresar HFE-wt. Tanto HFE-wt como HFE-H63D fueron sobreexpresados en células Caco2 que fueron sometidas a estudios de absorción y homeostasis de Fe. HFE-H63D resultó ser incapaz de cumplir su función normal de regular negativamente la captación apical de Fe. Experimentos de biotinilación diferencial mostraron que la sobreexpresión de HFE-wt producía un aumento en su destinación apical, mientras que la sobreexpresión de HFE-H63D no presentaba cambios en su distribución apical comparado con el control. Modelamiento In-Silico de la interacción HFE(wt & H63D)/TfR mostró un aumento de la estabilidad del complejo HFE(H63D)/TfR respecto de HFE-wt/TfR. Este aumento es significativo a pH 6.0 correspondiente al pH endosomal y nos permite inferir que HFE-H63D podría estar siendo recirculado a la membrana basolateral y por tanto es incapaz de traficar hacia la membrana apical donde cumpliría su función inhibitoria de la captación de Fe.
Agradecimientos: Dr. Bruce Cassels (U.Chile), Dr.Arieh Warshel (USC,CA,USA.

59.- PAPEL DE FUCOSA EN LA VÍA NOTCH. (Role of fucose in Notch pathway). Glavic, A. y de Celis, JF., Centro de Biología Molecular "Severo Ochoa", UAM, Madrid, España.

La vía de Notch está conservada desde C. elegans hasta humanos. Se compone del receptor Notch, y sus ligandos Delta y Serrate. La activación de Notch por sus ligandos produce la proteólisis de Notch. El dominio intracelular de Notch transloca al núcleo activando la transcripción. En Drosophila esta ruta se utiliza en la formación del tejido nervioso, desarrollo del ala, pata y ojo. Resultados previos sugieren que modificaciones O-fucosa de los dominios EGF de Notch son necesarias para la actividad de Fringe. Fringe modifica a Notch favoreciendo la unión a Delta sobre Serrate. Durante la formación del eje dorso-ventral del ala la actividad de Fringe permite generar un límite con propiedades organizadoras. A nivel celular, fucosa y otros azúcares son utilizados como código para la destinación y el plegamiento de proteínas. En Drosophila toda la fucosa es sintetizada de novo a partir de GDP-L-manosa. La primera enzima de este metabolismo es GDP-L-manosa deshidratasa (GMD). Hemos analizado el papel de fucosa en el desarrollo de Drosophila utilizando una línea transgénica que sobreexpresa GMD y una construcción RNA interferente de esta enzima. Nuestros resultados sugieren que la fucosa se utiliza principalmente en la vía de Notch. Además, la fucosa no solo se utilizaría durante las modificaciones de Notch sino que se requeriría durante su síntesis.
Agradecimientos: programa de Becas EMBO (AG) y CSIC (JF de C).

60.- INHIBICIÓN DE LA NOS INDUCE DIFERENCIACIÓN EN LA LÍNEA CELULAR OLF 442 (NOS inhibition induces differentiation in the OLF 442 cell line) Astorga G., Sülz L.; Mackay-Sim A. y Bacigalupo J. Instituto Milenio CBB, Pontificia Universidad Católica de Chile, Griffith University, Universidad de Chile.

Las neuronas receptoras olfatorias se originan desde células troncales, que forman parte de las células basales del epitelio olfatorio. Luego de varias divisiones, los precursores neuronales se diferencian a neuronas olfatorias maduras. La línea celular OLF 442 deriva de estos progenitores neurales.
Se ha demostrado en nuestro laboratorio, que inhibidores de la óxido nítrico sintasa (NOS) como TRIM y L-NIL, causan extensión de neuritas, expresión de OMP (marcador de neuronas olfatorias maduras) y disminución en la proliferación celular. Registramos corrientes en células OLF 442 aisladas y tratadas con estos agentes, para estudiar sus propiedades electrofisiológicas como parámetro de diferenciación celular. En el tratamiento con ambos inhibidores encontramos corrientes de potasio activadas por despolarización y sensibles a TEA, que estaban ausentes en células sin tratamiento. Las curvas I-V indican una conductancia de K+ tipo rectificador tardío. No encontramos corrientes de entrada con ninguno de los tratamientos. Tampoco hubo efecto de ATP extracelular.
Estos resultados apoyan la idea de que la inhibición de la NOS favorece la diferenciación celular.
Agradecimientos: Mideplan ICM P99-031-F (JB), Beca de apoyo tesis de doctorado CONICYT (LS).

61.- Mecanismo de Intercambio de Aminoácidos del Transportador Y+L de Eritrocitos de Pollo: Especificidad del Sitio de Unión Interno. D. Forlivesi y R. Devés. Programa de Fisiología y Biofísica, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

El transportador y+L es un intercambiador de aminoácidos que pertenece a la familia de transportadores heterodiméricos. El sitio de unión extracelular, reconoce aminoácidos catiónicos y neutros con alta afinidad en presencia de Na+ (o Li+); en K+ es específico para aminoácidos catiónicos. Se investigó la especificidad del sitio interno, utilizando membranas reselladas de eritrocitos de pollo.
Se estudió la dependencia del flujo de entrada de L-[14C]lisina de la concentración de distintos aminoácidos en el compartimento intracelular en Na+, K+ o Li+. Los resultados muestran una marcada preferencia del sitio interno por L-lisina y que la unión de los aminoácidos neutros (L-glutamina, L-leucina, L-metionina) es débil. L-lisina, a concentraciones saturantes, aceleró el flujo unidireccional de entrada aproximadamente 8 veces y la constante de saturación media (K0,5) en presencia de Na+ fue 0,010 ± 0,001 mM. L-glutamina, el aminoácido neutro que se unió más fuertemente, causó el mismo efecto a una concentración 80 veces superior (K0,5: 0,8 ± 0,27 mM). En K+, la selectividad por aminoácidos catiónicos es mayor. Se concluyó que el transportador y+L muestra una marcada asimetría en ambos sitios de unión en forma independiente de la presencia de Na+, además, el proceso favorecido es el intercambio de aminoácidos neutros (más Na+), desde el exterior por aminoácidos catiónicos en el interior.
F
inanciado por FONDECYT 1020084.

62.- Regulación del factor transcripcional TonEBP por estrés osmótico en el cardiomiocito. (Regulation of the transcriptional factor TonEBP by osmotic stress on the cardiomyocyte) Volkwein K, Navarro P, Moraga F Lavandero S. Centro FONDAP Estudios Moleculares de la Célula. Facultad Ciencias Químicas y Farmacéuticas. Universidad de Chile.

TonEBP es el factor transcripcional de eucariontes responsable de regular la transcripción de genes involucrados en la respuesta al estrés osmótico. Las proteínas codificadas por estos genes permiten la acumulación de osmolitos orgánicos compatibles, tales como sorbitol. Este se genera a partir de glucosa por la acción de aldosa reductasa (AR). Se desconoce si TonEBP está presente en el cardiomiocito y si se regula por cambios en la osmolaridad externa.
Los resultados inmunocitoquímicos y de Western blot mostraron que basalmente TonEBP y AR están en el citosol de cardiomiocito de rata. Cultivos primarios de cardiomiocitos expuestos a estrés hiperosmótico (Sorbitol 600 mOsm) por 6 y 18 h, mostraron un aumento de TonEBP y su translocación al núcleo. Los niveles de AR y su actividad también aumentaron significativamente a las 8, 16 y 24 h postestímulo. En cambio, los cultivos expuestos a estrés hiposmótico (30% de dilución del medio de cultivo, 205 mOsm), la cantidad de proteína de TonEBP y AR disminuyeron respecto al control y no se detectó actividad de AR. Estos resultados sugieren que TonEBP está presente en el cardiomiocito y tanto él como AR modifican sus niveles y actividad frente a cambios en la osmolaridad externa.
FONDAP 1501006. FM es becario CONICYT

65.- EXPRESIÓN DE TRANSPORTADORES DE LACTATO Y GLUCOSA EN CÉLULAS GLIALES DEL HIPOTÁLAMO. (Lactate and glucose transporters expression in glial hypothalamic cells). Cortés, C., Reinicke, K., Nualart, F., García MA. Departamento de Biología Celular, Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad de Concepción.

El mecanismo sensor de glucosa cerebral puede estar asociado con una interacción metabólica glia-neurona. Es así como ha sido propuesto que el metabolismo anaeróbico de la glucosa en la célula glial (tanicito) y el subsecuente traspaso de lactato a las neuronas adyacentes, podría aumentar la síntesis de ATP en la neurona y contribuir al cierre de los canales KATP. Para que esta hipótesis sea válida es necesario demostrar que la glia hipotalámica expresa los transportadores de glucosa GLUTs y de monocarboxilatos MCTs. El análisis de localización de los transportadores GLUT1 y MCT1 en el cerebro mostró que ambos son coexpresados en plexos coroideos, epéndimo, células endoteliales y astrocitos del núcleo habenular y zona marginal. Además, estos transportadores están altamente expresados en tanicitos hipotalámicos; los tanicitos alfa y beta, que toman contacto con el núcleo arqueado, presentaron una inmunorreacción similar. La expresión de MCT1 y GLUT1 en el hipotálamo fue analizada también mediante las técnicas de inmunoblot y RT-PCR. El desarrollo de un cultivo primario de células ependimarias hipotalámicas permitió confirmar la expresión de MCT1 en estas células. Debido a que la expresión de MCT1 puede estar asociada a el mecanismo sensor de glucosa, proponemos que los tanicitos participan en este proceso fisiológico. Financiado: DIUC 203.031.094-1.

66.- BRADICININA 1-5 (BK1-5) INDUCE LA FosforilaCIÓN de MAPK en QUERATINOCITOS humanos en cultivo ACTIVANDO EL RECEPTOR b1 DE CININAS (Bradykinin 1-5 induces mapk phosphorylation in cultured human keratinocytes through activation of kinin b1 receptors) Matus, C.E., Figueroa, C.D. Instituto de Histología y Patología, Universidad Austral de Chile, Valdivia.

Las cininas son péptidos vasoactivos que participan en múltiples procesos fisiopatológicos, pero que son inactivadas rápidamente por peptidasas, produciéndose péptidos de menor tamaño entre los que se encuentra BK1-5.
Se realizó un estudio comparativo de la acción de BK1-5 con agonistas de los receptores B1 (des[Arg9]Lis-bradicinina) y B2 (Lis-bradicinina) de cininas, sobre la fosforilación de MAPK (Erk 1/2) utilizando queratinocitos humanos en cultivo.
La estimulación con diferentes concentraciones de BK1-5, y de agonistas B1 y B2, indicó que dosis bajas de BK1-5 (0.1 nM) fosforilan MAPK con igual intensidad que el agonista B1 a concentraciones de 100-1000 nM. La estimulación con una concentración fija de cada péptido, por tiempos variables (0-120 min), resultó en un patrón de fosforilación transitorio para BK1-5 y des[Arg9]Lis-bradicinina, mientras que el agonista B2 provocó un patrón sostenido en el tiempo. La fosforilación de MAPK inducida por BK1-5 fue bloqueada al pretratar las células con un antagonista B1 específico. La inmunofluorescencia demostró que tanto los agonistas B1 como B2 y BK1-5 translocan las MAPK fosforiladas al núcleo.
Nuestros resultados indican que BK1-5 activaría receptores de tipo B1, y que sería un agonista más eficiente para inducir la fosforilación de MAPK que los agonistas B1 clásicos.
Financiada por FONDECYT 1030258

63.- Evaluación del rol del retículo endoplásmico (RE) en la destinación de proteínas de membrana peroxisomal (PMPs) en fibroblastos humanos. (Role of the endoplasmic reticulum in sorting of peroxisomal membrane proteins in human fibroblasts) Córdova, G., Pérez, F., Toro, A., Koenig, C. y Santos, M.J. (*). Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. (msantos@bio.puc.cl) Financiamiento: FONDECYT-1040782.

La biogénesis peroxisomal (BP) postula que "todo peroxisoma proviene de uno preexistente". Defectos en la BP provocan enfermedades humanas letales, llamadas Afecciones de la Biogénesis Peroxisomal (ABP). En ellas, los peroxisomas son reemplazados por organelos vacíos (fantasmas). Recientemente, se han descrito ABP sin fantasmas, los que tras complementarse genéticamente adquieren peroxisomas normales. Esto desafía el modelo de la BP y sugiere una síntesis de novo, posiblemente mediada por vesículas del RE.
Con el fin de evaluar el papel del RE en la BP, construimos genes quiméricos de PMPs (ALDR y PMP70), con la Proteína-Fluorescente-Verde (GFP), y evaluamos su destinación en fibroblastos normales (FN) y de pacientes con ABP. Ambas construcciones llegan a los peroxisomas en FN, en presencia y ausencia de Brefeldina-A. También otra construcción, GFP-ALDR-KK (que posee la señal "de retención" del RE), fue capaz de llegar a los peroxisomas en FN, en presencia y ausencia Brefeldina-A. Sin embargo, en las células de pacientes con ABP sin fantasmas, no se detectó señal de estas construcciones.
Estos resultados sugieren que ambas PMPs no pasarían por el RE en su destinación peroxisomal, lo que podría excluir un rol del RE en la BP.

64.- POLARIZACIÓN APICAL DE SVCT1 EN CÉLULAS EPITELIALES INTESTINALES Y TÚBULOS PROXIMALES DEL RIÑÓN. (Apical polarization of SVCT1 in epithelial cells of small intestine and kidney). Marcela Low1, Tamara Castro1*, Hernán Montecinos1, Francisco Nualart1. 1Departamento de Biología Celular, Universidad de Concepción. frnualart@udec.cl

La vitamina C ingerida por la dieta es absorbida principalmente a nivel del intestino delgado y posteriormente reabsorbida a nivel de renal mediante un proceso de tipo activo y saturable. Estudios moleculares han identificado dos isoformas de un cotransportador específico para sodio-ascorbato (SVCT1 y SVCT2), detectándose su ARNm en riñón, intestino e hígado. Sin embargo, la localización exacta de estos transportadores in situ no ha sido publicada. Nosotros examinamos la expresión de SVCT1 en riñón y en intestino delgado. Además, realizamos estudios funcionales utilizando las células LLC-PK1, obtenidas a partir de túbulos proximales. El análisis inmunocitoquímico mostró la expresión de SVCT1 en la membrana apical de los túbulos contorneados proximales (segmento S3) y en las células epiteliales intestinales. Estudios de RT-PCR confirman la expresión del ARNm para SVCT1 en riñón, intestino y células LLC-PK1. Estudios funcionales en células LLC-PK1 muestran un comportamiento cinético similar al descrito para SVCT1. El transporte de ácido ascórbico fue sodio y temperatura dependiente con una constante de afinidad de 217 uM. La localización apical de SVCT1 en los túbulos contorneados proximales y en el epitelio intestinal, indica que SVCT1 sería esencial para el proceso de absorción y reabsorción del ácido ascórbico. FONDECYT 1010843 y *Beca de Apoyo a Tesis Doctoral CONICYT.

67.- REGULACIÓN DE LA PROLIFERACIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS EPIDÉRMICAS HUMANAS POR RECEPTORES B1 Y B2 DE CININAS (Regulation of proliferation and differentiation of human keratinocytes by kinin B1 and B2 receptors) Sánchez, T. C., Figueroa, C. D., Vidal, M. A. Instituto de Histología y Patología, Universidad Austral de Chile, Valdivia.

Las cininas forman parte de una familia de hormonas peptídicas que se generan y actúan localmente. Estas activan receptores de tipo B1 y B2. El tipo B2 es expresado constitutivamente, mientras que el B1 es sobreexpresado durante inflamación, y cuando aumentan los niveles de IL-1b, o lipopolisacáridos bacterianos.
Se investigó si la activación de receptores B1 y B2 estimulaba la proliferación y/o diferenciación de células epidérmicas humanas en cultivo.
La síntesis de DNA se midió mediante ELISA, utilizando BrdU. La diferenciación se determinó pesquisando la expresión de citoqueratina 10 y profilagrina. Los cultivos se estimularon con diferentes concentraciones de agonistas B1 y B2. En otros experimentos las células se preincubaron con IL-1b y diclofenaco sódico para sobreexpresar el receptor B1 e inhibir la síntesis de prostaglandinas respectivamente. Este tratamiento sobreexpresó los receptores B1, pero no estimuló la proliferación celular. Un resultado similar se obtuvo cuando se estimuló las células con el agonista B2. Por el contrario, tanto los agonistas B1 como B2 indujeron diferenciación que fue moderada con el agonista B2, e intensa con los agonistas de tipo B1.
La activación de los receptores de cininas en queratinocitos humanos, estimula su diferenciación, la cual depende del tipo de receptor estimulado, y del agonista utilizado.
Financiado por proyecto FONDECYT 1030258

68.- HEMOCROMATOSIS: GEN ANTISENTIDO CONTRA EL TRANSPORTADOR DMT-1 INHIBE LA INCORPORACIÓN DE HIERRO EN CÉLULAS INTESTINALES Y MUESTRA EFECTOS DE RNAi Y ANTISENTIDO. (Hemochromatosis: Antisense gene against the DMT-1 transporter inhibits iron uptake in intestinal cells and shows RNAi and antisense effects.) Ezquer F. Núñez M.T. e Israel Y. Laboratorio de Farmacoterapia Génica, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Facultad de Ciencias, Instituto Milenio CBB. Universidad de Chile.

La hemocromatosis, enfermedad hereditaria más prevalente en caucásicos (1:200), se caracteriza por un aumento en la absorción intestinal de hierro por el transportador DMT-1. El hierro absorbido se acumula principalmente en el hígado generando estrés oxidativo y cirrosis. Una reducción del transporte intestinal de hierro por inhibición de DMT-1 tendría un efecto terapéutico. En el presente trabajo demostramos que la transducción de células intestinales Caco-2 con un vector adenoasociado (AAV) portador de un gen antisentido contra DMT-1 reduce (-55%) la incorporación de hierro. A bajos niveles de infección (MOI=5) el gen DMT-1 antisentido produjo una reducción (-80%) en los niveles de mRNA de DMT-1, sugiriendo que el duplex mRNA-RNA antisentido es hidrolizado por Dicer. Aumentando la dosis de AAV (MOI 10-70) el mecanismo de inhibición ocurrió por ocupación del mRNA blanco observándose niveles normales de mRNA para DMT-1 y una actividad DMT-1 disminuida. Estos estudios sugieren que una absorción excesiva de hierro en la hemocromatosis puede ser bloqueada por terapia génica mediada por un AAV antisentido contra el transportador apical de hierro.
Financiamiento: MECESUP P12, Universidad de Chile PG-09/03 e Instituto Milenio P99-031F.

70.- DINÁMICA de calcio en HOMOGENEIZADOS Y FRACCIÓN microsomal de células de gónada femenina del ostión Argopecten purpuratus. (Calcium dynamics in homogenates and microsomal fraction of female gonad of the scallop Argopecten purpuratus. Wolff D., Martínez G., Mettifogo L., Pérez M.A. Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. Facultad de Ciencias del Mar, Universidad Católica del Norte.

Durante el desove del ostión A. purpuratus se incrementan los niveles de IP3 sugiriendo que el Ca2+ está involucrado en este proceso. En este trabajo se investigó si IP3 induce flujos de Ca2+ en homogeneizados de ovocitos y en fracción microsomal de gónada.
Ovocitos obtenidos por raspado de gónadas maduras se homogeneizaron en solución de medio intracelular (pH 7.2) y se eliminaron las mitocondrias, núcleos y ribosomas por centrifugación a 14.000 g. La fracción microsomal se obtuvo centrifugando un homogeneizado de tejido gonadal a 100.000 g. Los flujos de Ca2+ se detectaron por cambios de fluorescencia en presencia del colorante Calcium Green-2. La adición de Ca2+ o del ionóforo A23187 al homogeneizado, en presencia de ATP, mostró rápidos aumentos de la fluorescencia y seguidos de un decremento. La adición de ATP a la fracción microsomal indujo una disminución de la fluorescencia, indicando captación de Ca2+ por las vesículas de membrana que fue inhibida por tapsigargina. La adición de IP3 en presencia de ATP, provocó un aumento de fluorescencia, indicando la liberación de Ca2+.
Estos resultados sugieren la presencia de sistemas de captación y liberación de calcio en células de gónada femenina de A. purpuratus.
FONDECYT 1030203

70.- TRANSPORTE ANIÓNICO EN ERITROCITO EN LA HIPOXIA Y SU RELACIÓN CON PROCESOS OXIDATIVOS Y DE FOSFORILACIÓN DE BANDA 3 (Erythrocyte anion transport in hypoxia and its relation to oxidative processes and band 3 phosphorylation) Godoy, A.1; Celedón, G.2; Behn, C.3 González, G.1 1Instituto de Química, Pontificia Universidad Católica de Valparaíso, 2Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Valparaíso. 3Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Hemos descrito una disminución en el transporte aniónico por banda 3 en hipoxia hipobárica aguda y otros autores han descrito que en hipoxia hay una mayor fosforilación de esta proteína. Se estudia el efecto de la hipoxia como factor de estrés oxidativo sobre el transporte por banda 3 y se relacionan estos cambios con la fosforilación de la Banda 3. Eritrocitos humanos (n = 6) se exponen a distintas presiones parciales de oxígeno: atmósfera de nitrógeno, 11% O2 y atmósfera normal (20% O2). El efecto de la fosforilación se estudió inhibiendo las fosfoproteínas fosfatasas con vanadato. Hay mayor formación de metahemoglobina en hipoxia total o parcial en presencia y en ausencia de vanadato (p<0,03) siendo mayor en hipoxia total. El transporte de sulfato disminuye en hipoxia total (p<0,04). Solo en presencia de vanadato hay una disminución del transporte en 11% O2 (p< 0,001). En hipoxia y en presencia de vanadato, al usar azida para aumentar la formación de metahemoglobina y antioxidantes (trolox y catalasa) hay, respectivamente, una disminución y un aumento del transporte de sulfato. Estos resultados indican que en hipoxia la disminución del transporte aniónico a través de banda 3 depende del estado de oxidación de la célula y en grado menor de la fosforilación de Banda 3.
Financiamiento: DIPUV, 31-2001 y 10-2003.

71.- EFECTO DEL EJERCICIO Y DE ANTIOXIDANTES EN LAS MODIFICACIONES ESTRUCTURALES Y FUNCIONALES DE LA MEMBRANA DEL ERITROCITO POR REOXIGENACIÓN POSTERIOR A UNA HIPOXIA HIPOBÁRICA. (Exercise and antioxidants effect on structural and functional erythrocyte membrane modifications by reoxygenation after hypoxia exposure) Mayorga, P.1; Celedón, G.2; González, G.1; Behn, C.3; Araneda, O.3; Alvear, M.4 1Instituto de Química; Pontificia Universidad Católica de Valparaíso, 2Departamento de Fisiología; Universidad de Valparaíso; 3Facultad de Medicina, Universidad de Chile y 4Centro de Medicina Aeroespacial, FACH.

En la membrana del eritrocito de individuos expuestos a hipoxia hipobárica-reoxigenación hemos descrito cambios estructurales y funcionales que atribuimos a procesos oxidativos. Se estudia si un tratamiento Antioxidativo (AO) o un tratamiento físico de alta exigencia (EAH) puede disminuir los cambios descritos. Individuos sanos fueron sometidos a hipoxia hipobárica. Se obtuvo sangre antes de la hipoxia y en la reoxigenación, para determinar vitamina E, carbonilos y gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa (GPDH) en la membrana de los eritrocitos. A un grupo EAH se le dio AO; otro grupo no tuvo EAH, ni AO y otro grupo tuvo solo el EAH). No se observó diferencia entre los contenidos de vitamina E para estados de normoxia y reoxigenación, aunque su contenido absoluto en ambos estados fue más alto solo en el grupo tratado con AO. Para los individuos sin EAH y con AO se observó un aumento en grupos carbonilos, sin embargo, no se observó cambio con la reoxigenación en los individuos tratados con AO. En individuos sin AO y sin EAH la GPDH disminuyó con la reoxigenación, sin embargo, no se observó cambio en los individuos con AO y/o con EAH. Estos resultados indican que hay otro factor responsable para liberar la GPDH, distinta del estrés oxidativo, y que es producto del EAH.
Financiamiento: DIPUV 31-2001

72.- ACTIVIDAD DE LA GLICERALDEHIDO-3-FOSFATO DESHIDROGENASA DEL ERITROCITO EN HIPOXIA. ROL DEL ESTRÉS OXIDATIVO. (Erythrocyte glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase activity in hypoxia. Role of oxidative stress). Rojas, C.1; Celedón,G.2; González,G.1, Behn, C.3 1Instituto de Química, Facultad de Ciencias Básicas y Matemáticas, Pontificia Universidad Católica de Valparaíso, 2Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Valparaíso, 3Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

En hipoxia como en estrés oxidativo se observa una liberación de la gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa (GPDH) ligada a la proteína Banda 3 del eritrocito. En eritrocitos aislados sometidos a hipoxia se correlaciona la actividad de la GPDH de la membrana con distintos grados de estrés oxidativo. Para ello se somete al eritrocito a distintas presiones parciales de oxígeno: atmósfera normal (O2,20 %), O2 11% y, atmósfera de nitrógeno, en presencia y ausencia de antioxidantes (Trolox, Catalasa) o agentes que fomenten la oxidación de la hemoglobina (Azida). A bajas presiones de oxígeno hay una mayor formación de metahemoglobina (p<0.03) y de carbonilos (p<0.05) (n=6) siendo mayor en la atmósfera de nitrógeno. La actividad de GPDH disminuyó solo en atmósfera de nitrógeno (p=0.002). En presencia de antioxidantes hay una disminución en la formación de metahemoglobina (p>0.001), y de carbonilos (p>0.006) (n=6). En presencia de azida, se observa un aumento de metahemoglobina (p>0.001) y de carbonilos (p>0.001) (n=6). En todas las condiciones estudiadas, la actividad de la GPDH disminuyó en presencia de antioxidantes y más aún con azida. Estos resultados indican que si bien hay una mayor oxidación celular al disminuir la presión parcial de oxígeno, además del estrés oxidativo, existirían otros mecanismos ligados a la hipoxia que explicarían los cambios en la actividad de GPDH.
Financiamiento: DIPUV 31-2001

73.- LA HIPOXIA INTERMITENTE CRÓNICA POTENCIA LA RESPUESTA QUIMIOSENSORIAL Y VENTILATORIA A LA HIPOXIA AGUDA. (Chronic intermittent hypoxia enhances chemosensory and ventilatory responses to acute hypoxia). Del Río, R., Rey, S., Arias, P., Alcayaga, J., Iturriaga, R. Lab Neurobiología, P. Universidad Católica de Chile.

La hipoxia intermitente crónica (HIC), podría potenciar las respuestas ventilatorias y cardiovasculares a la hipoxia aguda por un aumento en la reactividad de los cuerpos carotídeos (CC). Para probar esta hipótesis, sometimos gatos a episodios hipóxicos (PO2 ~75 Torr) de 3 min, repetidos por 8 horas durante 4 días. Posteriormente en los animales anestesiados, estudiamos los efectos de la HIC sobre las respuestas cardiovasculares, ventilatorias y quimiosensoriales inducidas por distintos niveles de oxígeno (PO2 ~ 20-100 Torr). La HIC potenció los aumentos de volumen corriente ventilatorio, pero no modificó el aumento de presión arterial o de frecuencia cardiaca en respuesta a la hipoxia aguda. Sin embargo, el análisis espectral de la variabilidad de la frecuencia cardíaca mostró que la HIC aumentó la relación entre los componentes de baja (LF) y alta frecuencia (HF), mostrando un predominio del componente LF sobre HF. Además, la HIC aumentó la descarga basal del nervio carotídeo y potenció las respuestas quimiosensoriales a la hipoxia aguda. Luego, el aumento de la reactividad del CC a la hipoxia contribuiría a potenciar la respuesta ventilatoria a la hipoxia aguda y modificar la variabilidad de la frecuencia cardiaca, reflejando cambios tempranos de la actividad autonómica cardíaca.
Financiamiento FONDECYT 1030330 y PG-22/04 (Escuela de Medicina PUC)

Microbiología - Virología

74.- Fosforilación de la NSP5 y su efecto en la actividad de la NSP2 de rotavirus (Phosphorylation of the NSP5 and its effect on the NSP2 of Rotavirus). Bar-Magen, T., Ricardo, A., Valiente-Echeverría, F., González, D., Spencer, E. Laboratorio de Virología, Dep. de Ciencias Biológicas, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile

Rotavirus pertenece a la familia Reoviridae y su genoma es de 11 segmentos de RNA de doble hebra (dsRNA). El segmento 11 codifica para la proteína NSP5 que posee 198 aminoácidos y que es O-glicosilada. NSP5 posee una actividad de proteína quinasa y se autofosforila. En presencia de otra proteína viral, NSP2, que a su vez tiene una actividad NTPasa, la fosforilación de NSP5 se ve fuertemente estimulada tanto in vitro como in vivo. El mecanismo por el cual NSP2 estimula la autofosforilación de NSP5 es desconosido. Con el fin de estudiar este estímulo se han efectuado mutaciones sitio dirigidas de la actividad NTPasa de NSP2, determinando el efecto de estas sobre la autofosforilación de NSP5. Mutantes de NSP2 en la actividad NTPasa son incapaces de estimular la auto- fosforiliación de NSP5 in vitro. En contraste, in vivo es necesaria solamente la presencia de NSP2, incluso sin su actividad NTPasa, para apreciar la hiperfosforilación de NSP5. En este trabajo se propone estudiar cuáles son los dominios de NSP5 que son importantes para la autofosforilación estimulada por NSP2.
Financiado por DAAD a A.R. y CONICYT 4040103 y a T.B.

75.- Mecanismo de Inicio de la Traducción del Virus de la Necrosis Pancreática Infecciosa (Infectious Pancreatic Necrosis Virus translation starting mechanism). Soto, R., González, R. & A.M. Sandino. Laboratorio de Virología, Departamento de Biología, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile, P.O. Box 40, Santiago 33, Chile.

El virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNV) no presenta estructura CAP en el extremo 5' de su mRNA y se asemeja con otras familias virales que utilizan mecanismos de inicio de la traducción independientes de CAP, mediados por Sitios Internos de Entrada al Ribosoma (IRES) en sus extremos 5´-no traducibles (5´-UTR). Por lo tanto, proponemos que IPNV presenta un mecanismo de traducción facilitado por estos elementos. Con el fin de corroborar esta hipótesis, se diseñaron partidores para amplificar mediante PCR y luego secuenciar los 5'-UTR de dos aislados de IPNV. Los análisis bioinformáticos de los 5´-UTR de las cepas Ab y VR299 analizadas, muestran la presencia de estructuras secundarias altamente estables propias de los IRES. La síntesis de proteínas virales, seguidas mediante la incorporación de [35S]-Metionina, no se ve afectada por la presencia de Rapamicina, lo que también sugiere la presencia de IRES. Actualmente, se está estudiando la funcionalidad del IRES mediante la utilización del vector bicistrónico pGEM CAT/LUC en ensayos de transcripción-traducción in vitro, el cual posee como espaciador intercistrónico el extremo 5´-UTR de IPNV.
Financiado por Fondecyt 1040282

76.- MUTAGÉNESIS DIRIGIDA DE LA HISTIDINA 208 DE LA INTEGRASA DEL VIRUS MOLONEY MLV. (Site directed mutagenesis of histidine 208 of Moloney MLV Integrase). A. García, J. Vera, y O. León, Programa de Virología, ICBM, Universidad de Chile, Santiago. Chile.

La integración del DNA viral, catalizada por la enzima retroviral integrasa, es una etapa fundamental en el ciclo replicativo de los retrovirus. El estudio de este mecanismo es de gran interés por su posible uso como blanco terapéutico en HIV o en el diseño de vectores para terapia génica (M-MLV).
El objetivo de nuestro laboratorio consiste en determinar qué regiones de la integrasa de M-MLV interactúan con el DNA viral. Estudios de modificación química y entrecruzamiento indican que el extremo 5´ de un sustrato que imita al intermediario formado durante la integración, se uniría a una región del dominio central de la integrasa que contiene a la cisteína 209. Por modelamiento estructural dicha región ha sido localizada cerca del sitio activo en un asa flexible.
Para comprender la importancia del asa flexible en la estabilización del sustrato procesado se han iniciado estudios de mutagénesis sitio dirigida. En este trabajo se presentan los resultados correspondientes a la mutación de la histidina 208. La mutación de histidina 208 a alanina en el core central de una integrasa que carece de su dominio N-terminal causa la inhibición de la desintegración y procesamiento de hebra. Dicha actividad no puede ser complementada al agregar el dominio N-terminal en trans.
Este resultado implica que la histidina 208 es esencial en el reconocimiento del segmento dinucleotídico del extremo 5' durante la integración
Financiado por Proyecto Fondecyt 1040409

77.- Caracterización de la guanililtransferasa de Rotavirus (Characterization of rotavirus guanylyltransferase). Valiente-Echeverría, F., Bar-Magen, T., Ricardo, A., Spencer, E. Laboratorio de Virología, Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile. Financiado por proyecto Fondecyt: 1010603

Rotavirus pertenece a la familia Reoviridae, posee un genoma compuesto por 11 segmentos de dsRNA y una capside de triple cubierta. El segmento 3 del genomio codifica para una proteína de 835 aminoácidos que es parte del core viral denominada VP3. Esta proteína tiene funciones en la transcripción y replicación del genoma viral. Entre las funciones en transcripción, además de la extrucción del mRNA del interior del virus, se ha determinado que esta proteína posee varias actividades catalíticas que están asociadas al proceso de capping de los mRNAs virales. La reacción de `capping' considera la hidrólisis de GTP, la posterior transferencia de GMP al extremo 5' difosfato del transcrito naciente de RNA; y finalmente la metilación en la posición 7 de la guanina del extremo "cap".
A través de un estudio bioinformático se identificaron tres dominios en la proteína VP3 que estarían involucrados en el proceso de capping: el sitio de unión a GTP, el sitio de unión a SAM y el dominio trifosfatasa. Se clonó el segmento 3 de rotavirus que codifica para la proteína VP3 en un plásmido de expresión y por primera vez se logró su expresión en un sistema bacteriano.

 

78.- EXPRESIÓN DE LAS REGIONES C-TERMINALES DE LAS SUBUNIDADES P66 Y P51 DE LA TRANSCRIPTASA REVERSA DE HIV-1 COMO UN SOLO POLIPÉPTIDO CON ACTIVIDAD RNASA H. (Expression of the C-terminus of HIV-1 reverse transcriptase P66 and P51 subunits as a single polypeptide with RNase H activity.) Zúñiga R., Sengupta S., Roth MJ., León, O. (1) Programa de Virología. ICBM. Facultad de Medicina. Universidad de Chile. (2) Departament of Biochemistry, University of Medicine and Dentistry of New Jersey- Robert Wood Johnson Medical School.

El dominio ribonucleasa H (RNasa H) de la transcriptasa reversa (RT) de HIV-1 se ubica en la región carboxilo terminal de la subunidad mayor de esta enzima. Análisis previos del dominio aislado RNasa H han indicado que este tipo de constructo es capaz de catalizar la remoción del tRNA en forma dependiente de Mn+2, al usar como sustrato un oligonucleótido que imita el intermediario replicativo. Además se han identificado los subdominios de las subunidades de heterodímero necesarias para recuperar la dependencia de Mg+2 de la actividad RNasa H original de la RT.
Se ha reconstruido el dominio C-terminal del heterodímero RT en un solo polipéptido. El constructo codifica los subdominios "Thumb" (T) y "Connection" (C) de la subunidad p51 unidos a través de un conector al subdominio "Connection" (C) y dominio RNasa H (R) de la subunidad p66.
La proteína fue purificada y renaturada a partir de extractos de E. coli. El constructo que posee actividad RNasa H dependiente de Mn+2, se utilizará en la selección de inhibidores de la actividad RNasa H.
Financiado por proyecto RO1 CA90174 NIH

79.- Mutagénesis química de Rotavirus: hacia la obtención de cepas defectivas. (Chemical mutagenesis of Rotavirus: towards knockout strains). Cifuentes, N.; Sotelo, P.; Chnaiderman, J. Laboratorio de Replicación Viral, Programa de Virología, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Rotavirus es la causa más común de diarrea severa en niños menores de dos años, causando la muerte de 600.000 niños por año en el mundo. Su genoma consiste de 11 segmentos de RNA de doble hebra, que codifican 12 proteínas. Si bien se ha logrado aislar y caracterizar un gran número de mutantes termosensibles de rotavirus, hasta el día de hoy no existe una cepa `knockout' en alguno de sus genes; esto debido principalmente a la complejidad de la replicación de su genoma, lo que ha impedido la incorporación de segmentos artificialmente modificados.
Utilizando un complejo sistema virus-célula sometido a mutagénesis química, y en el cual la línea celular expresa una de las proteínas virales, se pretende la obtención de una cepa knockout de rotavirus, en este caso, del gen nsp5.
En monocapas de células MA104 hemos logrado expresar hasta en un 70% la proteína NSP5. Además, se ha logrado obtener reducciones en el título viral de hasta 2 unidades de logaritmo utilizando 2-aminopurina y 5-azacitidina como agentes mutagénicos. Infecciones de monocapas celulares MA104 NSP5+ y transfectadas con siRNAs dirigidos contra el gen que codifica NSP5 han demostrado que el virus ocupa la proteína viral provista en trans para recuperar el fenotipo de lisis celular, lo que sugiere la factibilidad técnica del diseño experimental propuesto para la selección de cepas knockout.
Financiado por Fundación ANDES.

80.- RESISTENCIA A METRONIDAZOL EN AISLAMIENTOS CHILENOS DE Helicobacter pylori (Metronidazole resistance in chilean Helicobacter pylori strains). Vallejos C, Suazo J, Defilippi C C, Madrid A M, Defilippi C, Toledo H. Prog. Biología Celular y Molecular, ICBM. Fac. de Medicina. Univ de Chile; Unidad de Gastroenterología, Hospital Clínico Univ. de Chile.

Helicobacter pylori es el agente etiológico de las úlceras pépticas y duodenales, de cáncer gástrico y linfoma de MALT, en humanos. La terapia de erradicación de este patógeno generalmente incluye la utilización de un inhibidor de la bomba de protones y dos antibióticos. Entre los antibióticos más frecuentemente utilizados están el Metronidazol (Mtz) y la Claritromicina (Cla). H. pylori es una bacteria naturalmente competente, que además posee una recombinasa (RecA) particularmente activa, esta característica hace que la bacteria posea una alta flexibilidad fenotípica. Los estudios sobre susceptibilidad a Mtz señalan que esta resulta de la acción de una o dos nitro-reductasas que convierten el antibiótico desde una prodroga a una hidroxilamina, un potente agente mutagénico y bactericida. La resistencia a Mtz en H. pylori se debe fundamentalmente a la inactivación de una de estas enzimas, RdxA. Con el propósito de analizar la resistencia a Mtz estudiamos 36 aislamientos, obtenidos de pacientes del Hospital Clínico de la Universidad de Chile, mediante el método de dilución antibiótica. Los resultados permitieron identificar un amplio rango de concentración del antibiótico en el cual estos aislamientos sobreviven. Por otra parte, midiendo la actividad nitro-reductasa de RdxA, se correlacionó el fenotipo resistente a Mtz con la ausencia de actividad RdxA, señalando que esto se debería a mutaciones en el gen rdxA. Con el propósito de establecer si el intercambio de material genético está relacionado con la adquisición del fenotipo de resistencia, mediante ensayos de intercambio alélico demostramos que el gen rdxA obtenido de cepas resistentes genera el fenotipo de resistencia en cepas sensibles al antibiótico. Es importante resaltar que entre las transformantes obtenidas se obtuvo algunas que presentaron un nivel de resistencia a Mtz mayor al fenotipo de la cepa donante, dejando en evidencia que en estas cepas deben existir mutaciones acumuladas en otros genes que pueden potenciar la resistencia al antibiótico.

81.- POSIBLE PAPEL DE LOS POLIFOSFATOS INORGÁNICOS EN LA CARENCIA NUTRICIONAL DE FOSFATO Y AMINOÁCIDOS EN Sulfolobus solfataricus. (Possible role of inorganic polyphosphate in phosphate and amino acid starvation in Sulfolobus solfataricus). Orell, A., Remonsellez, F. y Jerez, C. A. Laboratorio de Microbiología Molecular y Biotecnología, Departamento de Biología e Instituto Milenio CBB, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. cjerez@uchile.cl

Los polifosfatos inorgánicos (poliP) son polímeros lineales de residuos de ortofosfato. En bacterias, se ha demostrado que bajas concentraciones de fosfato (Pi) y de aminoácidos (aa) inducen la acumulación de poliP por un mecanismo que involucra al regulador de respuesta PhoB y la producción de (p)ppGpp. Se ha demostrado que estos últimos son potentes inhibidores de la enzima exopolifosfatasa (PPX). Aunque se ha encontrado poliP en Archaea, muy poco se conoce sobre su metabolismo en este dominio. Nuestro grupo ha aislado y caracterizado la enzima PPX de S. solfataricus. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto que tiene la carencia de Pi y de aa sobre los niveles de poliP y en la actividad PPX en este arqueón extremófilo.
Cuando S. solfataricus se creció en ausencia de Pi, se determinó que los niveles de poliP disminuyeron drásticamente, y la actividad PPX aumentó en un 65%, sugiriendo que los poliP se degradarían para producir Pi, el que supliría la deficiencia de este nutriente. Por otra parte, durante la carencia de aa en S. solfataricus, se observó que los niveles de poliP aumentaron, mientras que la actividad PPX disminuyó en un 50 %. Al evaluar la participación de ppGpp en este fenómeno, se demostró que la enzima PPXr de S. solfataricus es inhibida in vitro por el nucleótido, pero este no se encontró presente en el microorganismo. Esto sugiere que en Archaea existiría una conservación en la función de los poliP como respuesta ante la carencia de aa, pero el mecanismo que conlleva a la acumulación de poliP sería diferente al descrito en Bacteria.
Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1000-679, ICM P99-031-F e ICGEB (Project CRP/CHI004-04/01/001)

82.- Distribución de genotipos de Trypanosoma cruzi post-tratamiento quimioterapéutico en pacientes chagásicos crónicos. (Distribution of Trypanosoma cruzi genotypes after chemotherapy in chronic chagasic patients). aCoronado, X., aOrtiz, S., aZulantay, I., aSolari, A., aApt, W., aRozas, M., aSánchez, G. aPrograma Biología Celular y Molecular. Instituto de Ciencias Biomédicas. Facultad Medicina. Universidad de Chile.

Las poblaciones de Trypanosoma cruzi circulantes en el ciclo doméstico de transmisión de la enfermedad de Chagas son múltiples y algunos genotipos del parásito presentan propiedades biológicas y clínicas importantes. En este estudio se examinan los genotipos de T. cruzi infectantes en un grupo de 30 pacientes chagásicos crónicos post-tratamiento con alopurinol o itraconazol y 27 pacientes no tratados, como grupo control. A todos se les aplicó xenodiagnóstico (T. infestans) y serología. Se analizaron por PCR e hibridación con sondas específicas, la distribución de 4 genotipos principales de T. cruzi en Chile, en muestras de sangre periférica y de deyecciones de triatominos (xenodiagnóstico). Se observó que los genotipos correspondientes a los linajes de T. cruzi I son más frecuentes, en sangre y el linaje IId es el más frecuente en T. infestans. En el grupo tratado con itraconazol predomina el linaje I, a diferencia del linaje IId en el grupo no tratado. Los resultados sugieren que parásitos con genotipos I, serían más resistentes a itraconazol en relación al genotipo IId. También se demuestra la importancia de utilizar ambos tipos de muestras, sangre periférica y deyecciones de triatominos, en estudios de epidemiología molecular de la enfermedad.
Financiado por FONDECYT 1040731.

83.- Prevalencia de infección por Trypanosoma cruzi en pequeños mamíferos de la Reserva Nacional "Las Chinchillas" (Prevalence of Trypanosoma cruzi infection in small mammals of the National Reserve "Las Chinchillas"). Rozas, M.a, Botto-Mahan, C.a, Coronado, X.a, Ortiz, S.a, Cattan, P.b, Solari, Aa. aPrograma de Biología Celular y Molecular, Facultad de Medicina, ICBM; bDepartamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias. Universidad de Chile.

Los datos epidemiológicos existentes sobre la enfermedad de Chagas en el ciclo silvestre en Chile son escasos. Para dilucidar, la real situación de los hospederos silvestres infectados por T. cruzi, se estudia la prevalencia de la infección mediante la técnica de PCR y Southern en zonas vecinas a la Reserva, ubicada un área hiperendémica con una prevalencia de infección de un 2%, la más alta del país. Se estudia la presencia de T. cruzi en muestras de sangre de 157 pequeños mamíferos silvestres, así como de 42 cabras como representantes de un reservorio peridomiciliado. Los resultados indican que en promedio los reservorios silvestres están infectados en un 51% mientras que los peridomiciliados en un 36%. Estos datos contrastados con los obtenidos previamente indican que la real prevalencia de la infección por T. cruzi es casi el doble de lo estimado. Se discute la importancia que tiene el vector silvestre Mepraia spinolai en la transmisión del parásito a estos hospederos y el factor de riesgo que conllevan los reservorios silvestres y peridomésticos en la transmisión de la infección a los humanos.
Proyecto FONDECYT 1040762

Biología de la Reproducción

84.- CAMBIOS EN CONTENIDO DE NGF, P75NTR Y NIVELES ANDROGÉNICOS RELACIONADOS AL DESARROLLO DE LA CONDICIÓN DE OVARIO POLIQUÍSTICO INDUCIDO POR AGONISTA ADRENÉRGICO EN RATAS. (Changes in intraovarian NGF, p75NTR and circulating androgen levels in polycystic ovary induced by adrenergic agonist in rats). Luna S.L.1, Brown D.I.2, Lara H.E.3. (1) Facultad de Farmacia, (2) Fac. Ciencias, Universidad de Valparaíso, Chile. (3) Lab. Neurobioquímica, Fac. Cs. Químicas y Farmacéuticas, Universidad de Chile.

Conforme a la hipótesis del compromiso de catecolaminas en el desarrollo de la condición de ovario poliquístico hemos desarrollado un modelo en ratas, inducido por la administración de agonista b-adrenérgico.
Ratas adultas jóvenes recibieron isoproterenol (125 µg/Kg /día por 10 días) y fueron sacrificadas 1, 10, 20 y 30 días después. Se determinaron los niveles circulantes de androstenediona y testosterona por inmunoensayos, el contenido ovario de NGF mediante ELISA y la expresión de p75NTR por inmunohistoquímica.
El desarrollo de la condición de ovario poliquístico se acompaña de aumento aunque no significativo de los niveles de androstenediona y testosterona y aumento de los niveles intraováricos de NGF. Los folículos normales en todas las etapas del desarrollo presentan inmunorreactividad positiva para el receptor p75NTR, localizado en la teca, al igual que los folículos tipo III. Mientras que en la teca de prequistes y quistes, la inmunorreactividad fue leve o nula.
Estos resultados muestran que un tono adrenérgico aumentado por efecto de agonista conduce al desarrollo de estructuras quísticas con predominio de secreción androgénica y pérdida de la asociación entre NGF y su receptor de baja afinidad p75NTR.`
Financiamiento: DIPUV 26/2003 a S.L.L. y Fondecyt 1020581 H.E.L.

85.- FUNCIÓN REPRODUCTIVA EN MONOS RHESUS MACHOS DE EDAD AVANZADA EXPUESTOS A RESTRICCIÓN CALÓRICA. (Reproductive function in old age male rhesus monkeys exposed to caloric restriction). Brown D.I.1,2, Downs J.2, Garyfallou V.T.2, Urbanski H.F.2. 1Depto. de Biología, Fac. Ciencias, Universidad de Valparaíso, Chile. 2Division of Neuroscience, Oregon National Primate Research Center (ONPRC), Oregon, USA.

Especies de ciclo de vida corto sometidas a restricción calórica dietaria (RC) disminuyen el envejecimiento, reducen las enfermedades relacionadas, aumentando su probabilidad de vida. Tales efectos no son claros en primates de ciclo de vida largo; tampoco los efectos sobre el eje neuroendocrino-reproductivo. Nosotros examinamos la función testicular en monos (Macaca mulatta) de edad avanzada expuestos a RC. Se determinó testosterona (T) plasmática durante 24 horas. Testículos colectados en necropsias de animales del Programa de Distribución de Tejidos (ONPRC); fueron fijados Bouin acuoso y procesados para histología. En 100 secciones transversales circulares de túbulos, se determinó diámetro, ancho luminal y del epitelio seminífero, y un índice epitelial. Cada sección se clasificó en uno de 6 estados cualitativos de desarrollo de la línea germinal. Los monos viejos en RC presentan T aumentada, aunque solo los valores máximos son significativamente superiores a los controles. Todos los parámetros histológicos presentaron valores menores (significativos: ancho e índice epitelial). Asimismo, hay una disminución significativa de túbulos con línea germinal completa y recíproco aumento de túbulos con línea germinal depletada. Aun cuando la T estaría alta, la actividad espermatogenética estaría deprimida por la restricción calórica en monos viejos. (Financiamiento: RR-00163, HD-29186 & AG-19914).

86.- LA PLACENTA OVINA EN HIPOXIA HIPOBÁRICA: EFECTO DEL TIEMPO DE RESIDENCIA EN LA ALTURA. (Ovine placenta under hypobaric hypoxia: effect of time of residence at high altitude). Atlagich, M1.; Díaz, R1.; Cepeda, R1.; Behn, C.2,3; Bruzzone, M.E.2,3; Raggi, L.A.1,3; Parraguez, V.H.1,3 1Facultad de Cs. Veterinarias y Pecuarias; 2Facultad de Medicina; 3Centro Internacional de Estudios Andinos (INCAS), Universidad de Chile (vparragu@uchile.cl).

Gestaciones a gran altura ponen a prueba la función placentaria para satisfacer las demandas fetales de oxígeno. Se comparó macroscópica y microscópicamente la placenta fetal entre ovejas nativas de la altura que gestaron en la altura (AA), ovejas nativas del nivel del mar que fueron llevadas a gestar a la altura (BA) y en un grupo control de ovejas del nivel del mar que gestaron a nivel del mar (BB). El peso de los recién nacidos fue mayor en los grupos BB y AA (4.2±0.3 y 3.7±0.8 kg, respectivamente) que en el BA (3.0±0.5 kg, P 0.05). El peso de la placenta fetal con membranas fue mayor en AA (0.4±0.08 kg, P 0.05) que en BA y BB (0.3±0.06 y 0.3±0.04 kg, respectivamente). La altura generó un cambio en la frecuencia de los cotiledones, disminuyendo los "A" y aumentando los "B", "C" y "D". Este cambio fue más acentuado en animales AA. La superficie de contacto feto-maternal fue superior en un 37% en BA y en 134% en AA. El área cotiledonar ocupada por lúmenes vasculares fue también superior en BA y AA.
Financiamiento: FONDECYT 1020706.

87.- EXPRESIÓN DE FACTORES VASODILATADORES EN CITOTROFOBLASTO EXTRAVELLOSO E INTRAVASCULAR EN GESTACIÓN HUMANA. (Expression of vasodilator factors in extravillous and intravascular cytotrophoblasts in human gestation). Corthorn, J., Chacón, C., Germain, A, Brosnihan, K.B., Neves, L. Valdés, G. Centro de Investigaciones Médicas, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile, Hypertension and Cardiovascular Research Center, Wake Forest University, Winston Salem, USA).

Durante la preñez humana temprana los citotrofoblastos extravellosos invaden el útero para alcanzar las arterias espirales, transformándolas en vasos de baja resistencia. En preeclampsia y restricción de crecimiento fetal se observa una menor transformación de las arterias espirales. En placenta humana hemos demostrado expresión de RNAm de calicreína tisular(KLK1), su proteína y el receptor B2 de bradicinina (rB2) en sinciciotrofoblasto y trofoblasto intravascular. Nuestra hipótesis es que la vasodilatación/ aumentó de permeabilidad capilar que facilita la migración trofoblástica en decidua, y posteriormente la vasodilatación uterina y el flujo placentario, requieren la participación de varios sistemas vasodilatadores interrelacionados.
En lecho placentario estudiamos mediante inmunohistoquímica la expresión de diversos factores vasodilatadores en citotrofoblasto extravelloso e intravascular, calicreína y rB2, óxido nítrico(NO) sintasa endotelial (eNOS), angiotensina (1-7) y enzima convertidora 2 (ACE2) que genera Ang-(1-7) a partir de angiotensina II.
En citotrofoblasto extravelloso y endovascular se observó expresión de calicreína y rB2 (eNOS), ANG (1-7) y ACE2. Estos datos apoyan una interrelación autocrina/paracrina de bradicinina, NO y ANG-(1-7) en la vasodilatación, favoreciendo la invasión decidual y vascular del trofoblasto. Se requiere continuar estos estudios para precisar si la intervención sobre estos factores vasoactivos modifican la placentación.
Financiado por Proyecto Fondecyt 1020705.

88.- EUESPERMATOGÉNESIS Y PARAESPERMATOGÉNESIS EN DOS ESPECIES DE CARACOLES MARINOS DE LA FAMILIA VOLUTIDAE. (Euspermatogenesis and paraspermatogenesis in two species of marine snails from the Volutidae Family). Brown D.I. Depto. de Biología, Fac. Ciencias, Universidad de Valparaíso, Chile.

En moluscos gastrópodos marinos la espermatogénesis puede llevar a la formación de acuaespermatozoides para la fecundación externa o a introespermatozoides para la fecundación interna, propia de los neogastrópodos como los volútidos Odontocymbiola magellanica y `Adelomelon ancilla. Estos por euspermatogénesis producen introespermatozoides fecundantes (euespermatozoides) y por paraespermatogénesis espermatozoides no fecundantes (paraespermatozoides). Este trabajo describe ambos patrones de espermatogénesis. Gónadas de machos adultos fueron fijadas en Bouin acuoso, procesadas por técnica histológica de rutina, y observadas por microscopia óptica. Ambas especies presentan una gónada compartimentalizada. En el compartimiento gametogénico tubular la espermatogénesis es centrípeta. Durante la euspermatogénesis: a) en la fase de multiplicación, las espermatogonias se observan sobre las células somáticas de Sertoli; algunas permanecen adbasales encerradas por estas; b) en la fase de maduración meiótica los espermatocitos en profase meiótica son característicos; c) en la espermiohistogénesis, espermátidas circulares con polarización de vesícula acrosómica y de mitocondrias, luego se elongan condensando la cromatina y organizando la cola típica del introespermatozoide filiforme (eusespermatozoide). Durante la paraespermatogénesis se forman a partir de paraespermatocitos y/o paraespermátidas, grandes células con aparatos multiflagelares cruzando el citoplasma entre inclusiones picnóticas, y proyectándose como un penacho externo (paraespermatozoides). Aunque la espermatogénesis sigue un patrón similar al observado en el neogastrópodo Concholepas concholepas, los paraespermatozoides difieren marcadamente (Financiamiento DIPUV 39/2000, Universidad de Valparaíso).

89.- EXPECTATIVA VACACIÓN-ESTUDIO Y RITMO ANUAL DE EDAD DE MENARQUIA. (School-vacation periods and annual rhythm of the age at menarche). Valenzuela CY. Programa de Genética Humana, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Demostramos que los periodos de vacación-estudio se correlacionan con alta-baja incidencia mensual de menarquia. Esto indica que una proporción importante de las niñas deprimen sus menarquias con el periodo de estudio. Es esperable entonces que la edad de menarquia sea baja al ingresar al periodo de estudio y vaya aumentando hasta finalizar este y acercarse el periodo de vacación, para volver a descender una vez que todas las niñas con retraso de menarquia hayan menstruado. Se examinaron registros de 3.435 niñas de Santiago (Chile) y 3.225 de Medellín (Colombia) sobre su fecha de menarquia y de nacimiento. En Santiago la edad de menarquia aumentó desde 148,4 meses en enero-febrero a 155,6 meses en noviembre-diciembre, correspondiéndose muy ajustadamente a la hipótesis. En Medellín la edad de menarquia aumento desde 147,4 meses en enero-febrero a 151,8 meses en noviembre-diciembre, con un aumento significativo en junio a 152,0 meses, lo que coincide extraordinariamente con la hipótesis ya que junio es también un mes de vacación. Se examinó una segunda muestra de Santiago y otra de Brasil y ambas coinciden con la hipótesis planteada tanto en el ritmo de incidencia mensual de menarquia, como en el edad de menarquia.
In memoriam Alfredo Patri M. Agradecimientos a C.R. Srikumari (India), J. Csoknyay (Hungría), N. Pineda (Colombia), C. Tapia y E. Núñez (Chile).

90.- EFECTO DE INHIBIDORES DE TRIPSINA SOBRE LA UNIÓN A ZONA PELÚCIDA Y REACCIÓN DE ACROSOMA EN ESPERMATOZOIDES DE BOVINO. (Effect of trypsin inhibitors on zona pellucida binding and acrosome reaction in bovine sperm). 1-2Deppe, M.,1-2Risopatrón,J.,1-3 Sánchez,R. 1Centro de Biotecnología en Reproducción, 2Depto. Ciencias Básicas, 3Depto. Ciencias Preclínicas, Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera, Temuco.

Acrosina, una proteasa acrosomal con actividad tipo tripsina, participaría en la unión espermática a zona pelúcida (UZP) y en el proceso de reacción de acrosoma (RA) en mamíferos. Mediante el uso de inhibidores de tripsina (Na-p-tosil-L-lisinaclorometilcetona: TLCK y Trypsin inhibitor: Tipo I-S: de poroto de soya) se evaluó si este efecto está presente para la UZP y proceso de RA en bovinos. Espermatozoides mótiles fueron seleccionados por swim-up, e incubados (4x106 células/ml) en medio BO a 39ºC y 5% de CO2. Después de 4 horas, se adicionó a suspensiones espermáticas por separado, TLCK (1mM), Trypsin inhibitor (10µg/ml) o medio (control) por 30 minutos. Ovocitos bovinos fueron coincubados con cada suspensión espermática por 30 minutos. La UZP fue evaluada con microscopio de contraste de fase, observándose que TLCK y Trypsin inhibitor no modificaron el número de espermatozoides unidos a ZP respecto al control(26+4, 25+4, 27+2 respectivamente) (P>0,05). Al contrario ambos inhibidores fueron eficaces en reducir la RA inducida con lisofosfatidilcolina (LC)(100µg/ml), evaluada con la doble tinción, respecto al control (12%+0,8, 10%+0,7, 52%+1,5 respectivamente)(P<0,05). Estos resultados sugieren que proteasas tipo tripsina no participarían en el proceso de UZP en la especie bovina, no así en la RA donde estos inhibidores bloquearían este proceso.
Financiamiento: Proyecto de Investigación DFG-GTZ-93.2157.1-06.100
CEBIOR

Paneles III

Botánica

91.- "MECANISMOS ANTIOXIDANTES INDUCIDOS POR COBRE POBLACIONES TOLERANTES DE DACTYLIS GLOMERATA". (Antioxidant mechanisms induced by copper in tolerant populations of Dactylis glomerata). Sánchez, R. y Ortiz, C. Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular Vegetal, Departamento de Biología, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile. cortiz@lauca.usach.cl

El cobre es un elemento esencial para las plantas aunque en concentraciones sobre 100 mg/Kg p.s. puede provocar daños irreversibles en los tejidos vegetales, por inducción de estrés oxidativo.
Individuos de la especie de pasto Dactylis glomerata provenientes de poblaciones que crecen en suelos contaminados con cobre, acumulan sobre 300 mg/Kg p.s. del metal en sus hojas. Ensayos bioquímicos realizados en estas poblaciones han mostrado alta actividad, en hojas y raíces, de enzimas asociadas a estrés oxidativo.
Se analizaron parámetros fisiológicos, marcadores de daño oxidativo y se estudiaron los mecanismos antioxidantes enzimáticos y no enzimáticos en plantas de Dactylis glomerata tratadas con 250 µM y 563 µM de cobre. Se encontró una disminución en los valores de peso seco y el contenido de proteínas totales en ambos tratamientos. El contenido de pigmentos mostró una disminución a 250 µM y no así a 563 µM, aunque la eficiencia fotosintética no se vio alterada. Se apreció un leve aumento en la lipoperoxidación de membranas, solo a 563 µM de cobre. El análisis de tres enzimas antioxidantes mostró que la única actividad aumentada corresponde a APX. El análisis de los metabolitos con capacidad antioxidante mostró un aumento en los niveles de glutatión y fitoquelatinas, principalmente en plantas tratadas con 563 µM de cobre.
En base a los resultados obtenidos, se concluye que el principal mecanismo antioxidante inducido por cobre en poblaciones tolerantes de D. glomerata, son los compuestos tiólicos de carácter no proteico, principalmente glutatión y fitoquelatinas.

92.- RESPUESTAS FOTOSINTÉTICAS EN Lessonia nigrescens (PHAEOPHYTA) EXPUESTA A AMBIENTES ENRIQUECIDOS POR COBRE EN EL NORTE DE CHILE. (Photosynthetic responses in Lessonia nigrescens exposed to copper enriched environments in northern Chile). 1Varela, D & 2Correa, J.A. 1Centro "I-Mar", Dpto. RRNN y Medio Ambiente, Universidad de Los Lagos, 2Dpto. de Ecología y FONDAP-CASEB, Fac. de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.

Descargas crónicas de residuos mineros en algunas zonas costeras del norte del país proporcionan condiciones ideales para entender los mecanismos que subyacen al fenómeno de toxicidad mediada por cobre en macroalgas. El caso de la zona de Chañaral, Región III, las descargas han durado más de 60 años, asociándose a una reducción de la diversidad biológica y ausencia de especies ecológicamente importantes, como Lessonia nigrescens. Altos niveles de cobre en el ambiente generan, en esta especie, un nivel anormal de estrés oxidativo, cuyo efecto sobre parámetros fisiológicos fundamentales, como la fotosíntesis, son desconocidos. Para establecer la eventual relación entre altos niveles de cobre y alteraciones en el proceso de fotosíntesis, se creó una "población" de Lessonia adulta trasplantada desde la localidad control (Zenteno) a sitios vecinos al efluente minero (Palito). Luego de 6 meses, se evaluaron diferentes variables fotosintéticas en individuos trasplantados por 6 meses, comparándolas con el comportamiento de individuos trasplantados por 24 h. El experimento se realizó en Zenteno y Palito y se usaron plantas no trasplantadas como controles. Los resultados indican que, si bien ambos tipos de plantas se ven afectadas por aguas enriquecidas por cobre a lo largo del día, los trasplantes antiguos son más susceptibles a la fotoinhibición y recuperan más lentamente su eficiencia. Se discute la importancia de las respuestas observadas en el contexto de la ausencia de esta especie de los lugares impactados.
Agradecimiento: FONDAP 1501001-1.

93.- RELACIONES ENTRE COMPORTAMIENTO ESTOMÁTICO, DISPONIBILIDAD DE AGUA EN EL SUELO Y POTENCIAL HÍDRICO FOLIAR EN _Vitis vinifera CULTIVAR CRIMSON SEEDLESS. Relationships between stomatal response to water availability in the soil and water potential in leaves of _Vitis vinifera cv Crimson Seedless. López V(1)., Silva H., (1) Ahumada R.(2) y G. Sellés (2). (1) Laboratorio de Relación Suelo Agua Planta, Facultad de Ciencias Agronómicas. Universidad de Chile. (2) Instituto de Investigaciones Agropecuarias CRI La Platina.

En este trabajo se estudió la influencia de la disponibilidad de agua del suelo en el comportamiento estomático a nivel foliar en Vitis vinifera cultivar Crimson Seedless y su relación con parámetros hídricos foliares. Los regímenes de riego se establecieron en base a la evapotranspiración estimada del cultivo. Los tratamientos correspondieron a la reposición de agua equivalente al 125%, 97%, 57% de la evapotranspiración máxima (T1, T2 y T3) y un cuarto tratamiento (T4) en los que se alternaron ciclos de riego-estrés (0, 100 y 25% de la evapotranspiración). El contenido de agua del suelo se correlacionó con el potencial hídrico xilemático (R2:0,44), con la conductancia estomática (R2:0,54) y con la transpiración foliar (R2:0,52). Se observó efecto de tratamiento en los valores de potencial hídrico xilemático medido al mediodía. La máxima conductancia estomática se registró en las primeras horas del día con diferencias significativas por efecto de tratamiento. El comportamiento de los estomas en Crimson Seedless, estaría asociado a una máxima eficiencia de transpiración.
Proyecto Fondecyt 1020837.

 

94.- EFECTO DE LA DISPONIBILIDAD DE AGUA DEL SUELO EN LA VARIACIÓN DEL DIÁMETRO DEL TRONCO Y EN EL POTENCIAL HÍDRICO FOLIAR EN Vitis vinífera L. CULTIVAR CRIMSON SEEDLESS. Effect of soil's water availability on the trunk's diameter and in the water potential in leaves of Vitis vinifera cv Crimson Seedless. Muñoz V., Silva H., (1)Ahumada R.(2) y Sellés G.(2) (1)Laboratorio de Relación Suelo Agua Planta, Facultad de Ciencias Agronómicas. Universidad de Chile. (2)Instituto de Investigaciones Agropecuarias INIA, CRI La Platina.

Se estudió la influencia de la disponibilidad de agua del suelo en la variación del diámetro de tronco (VDT) y en los potenciales hídricos xilemático (Yx) y foliar (Yf) en Vitis vinífera cv. Crimson Seedless. Los regímenes de riego se establecieron en base a la evapotranspiración estimada del cultivo. Los tratamientos correspondieron a la reposición de agua equivalente al 125% (T1) y ciclos de riego-estrés alternando aplicaciones entre 0- 100 y 25% de la evapotranspiración del cultivo durante la temporada (T4). El crecimiento del tronco alcanzó 5.26 y 2.20 mm/temporada para T1 y T4 respectivamente. Los valores de mínimos y máximos Yx y Yf fueron -1,2 y -0,42 MPa para T1; y -1,42 y -0.61 MPa para T4. En función de la VDT se determinó el crecimiento máximo diario (CMD), y a partir de los potenciales hídricos se estableció la diferencia de potenciales (DY). Ambas variables fueron sensibles al déficit hídrico, pero fue la VDT la que aparentemente detecta el déficit de forma más precoz.
Proyecto Fondecyt 1020837.

95.- Desempeño fotosintético en dos ecotipos de Colobanthus quitensis. (Photosynthetic performance in two ecotypes of Colobanthus quitensis) Saavedra F., Guerra A., Cavieres, L.A., Corcuera L.J. y Bravo L.A. Departamento de Botánica, Universidad de Concepción.

Colobanthus quitensis (Caryophyllaceae) habita en zonas frías, encontrándose diferenciacias ecotípicas entre las poblaciones altoandinas y antárticas. Los ambientes altoandinos y Antárticos presentan diferencias en sus condiciones lumínicas y de temperatura durante la época de crecimiento. Estas diferencias determinarían adaptaciones particulares del aparato fotosintético. Se estudió la respuesta fotosintética en los ecotipos, andino y antártico en el laboratorio. Se determinó el efecto de la temperatura y la intensidad lumínica sobre la fotosíntesis neta (A), los apagamientos fotoquímicos y no fotoquímicos y sus componentes: rápida (NPQf), lenta (NPQs) y transiciones de estado en ambos ecotipos. Ambos mostraron fA, PCL y PSL similares mientras que Amax fue superior en el ecotipo antártico en todas las temperaturas estudiadas. Los contenidos de pigmentos fueron similares para ambos ecotipos. El antártico mostró menor fotodaño (NPQs) que el andino y mantuvo una mayor disipación energética (NPQf), siendo consistente con mayores niveles de pigmentos del ciclo de las xantófilas. Esto muestra la capacidad del ecotipo antártico para maximizar el uso del foto y termoperíodo en la estación de crecimiento. El ecotipo antártico fue menos eficiente que el andino para balancear la energía absorbida entre ambos fotosistemas mediante transiciones de estado. Es decir, los aparatos fotosintéticos de ambos ecotipos son diferentes entre sí y reflejan la calidad de sus ambientes lumínicos y térmicos.
Fondecyt 1010899

96.- EFECTOS DE LA RADIACIÓN UV-B EN LA ACTIVIDAD SOD, PEROXIDACIÓN DE LÍPIDOS Y EFICIENCIA FOTOQUÍMICA EN COLOBANTHUS QUITENSIS. (Effects of UV-B radiation on SOD activity, lipid peroxidation and photochemical efficiency in Colobanthus quitensis). Navarrete, A.A.; Bravo, L.A.; Corcuera, L.J. Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Chile.

Colobanthus quitensis (Cariophylaceae) crece en la Antártida y en la cordillera de los Andes, donde predominan bajas temperaturas y altos niveles de radiación. Plantas de La Parva, adaptadas a altos niveles de UV-B tendrían mecanismos antioxidantes más eficientes que plantas provenientes de la Antártida, donde la radiación UV-B es menor.
Plantas cultivadas en laboratorio provenientes de la Antártida (A) y de La Parva (P) (33º19`S, 70º16´W, 2700 msnm) fueron sometidas a 3 intensidades de radiación UV-B (70, 35 y 3 µW/cm2), a 4 y 15ºC, respectivamente, para evaluar su actividad SOD total, acumulación de malondialdehido (MDA) en el tejido aéreo y eficiencia fotoquímica máxima.
La actividad SOD total aumentó hasta 8 veces en 24 h con 70 y 35 µW/cm2 en P, alcanzando los mayores niveles a 4ºC a las 6 horas de tratamiento. El nivel más alto de SOD total se midió en P y A tratadas a 4ºC. La acumulación de MDA fue de hasta 3 veces mayor que los valores control en todas las condiciones, habiendo mayor velocidad de acumulación en A. La eficiencia fotoquímica máxima es similar en P y A 24 horas después del tratamiento UV. P demostró mayor tolerancia que A a la radiación UV-B.
FONDECYT-1010899

97.- ANÁLISIS FENÉTICO BASADO EN CARACTERES EPIDÉRMICOS DE LAS ESPECIES ANDINAS DE POA L. (POOIDEAE, POACEAE). Phenetic analysis based on epidermal characters of Andean species of Poa L.(POOIDEAE, POACEAE). Jara, S.; Haro, P.; Negritto, M.A.; Ruiz, E.; Baeza, M. Departamento de Botánica, Universidad de Concepción.

Poa L. (Poaceae) es uno de los géneros más numerosos de gramíneas, crecen ca. 120 especies en Sudamérica siendo un típico componente de regiones frías a templadas, en los trópicos solo a grandes alturas, llegando hasta 5.000 m. La sistemática del grupo es dificultosa debido, entre otros factores, a la amplia variabilidad fenotípica que presenta el género. Se considera que la epidermis foliar es una herramienta útil para dilucidar complejos taxonómicos, particularmente en las Gramíneas. El objetivo de este trabajo es conocer las características epidérmicas de las especies y obtener agrupaciones basadas en la similitud morfoanatómica, determinando cuáles de los caracteres tienen valor taxonómico. Cabe destacar que Poa, excepto el subgénero Dioicopoa, carece de estudios anatómicos hasta el presente trabajo. Se analizó la epidermis abaxial con la técnica de raspado, considerando caracteres cualitativos y cuantitativos de ca. 60 taxa. Se describe la organización y distribución de los distintos componentes celulares. La similitud es analizada por medio de técnicas numéricas, mediante PCA. Se distinguen dos grandes grupos definidos por los caracteres en su mayoría cuantitativos: 1) plantas enanas, las que crecen en alturas superiores a los 4.000 m y 2) plantas más robustas, entre los 2.500-4.500 m.
Agradecimientos: Universidad de Concepción DIUC 203. 111.033-1.0

 

98.- FILOGENIA DE RYTIDOSPERMA Steud. (DANTHONIOIDEAE, POACEAE) EN SUDAMÉRICA BASADA EN CARACTERES MORFOANATÓMICOS. Phylogeny of Rytidosperma Steud. (Danthonioideae, Poaceae) in South America, based on morphoanatomical characters. Ortúzar, MA1; Negritto, MA2, Ruiz, E2 & CM, Baeza2. 1Instituto de Botánica, Facultad de Ciencias, Universidad Austral. 2Departamento de Botánica, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción.

Las relaciones filogenéticas entre las especies nativas sudamericanas de Rytidosperma Steud. (Poaceae) inferidas a partir de 26 caracteres morfoanatómicos sustentan la hipótesis de que se trata de un grupo monofilético. Se consideraron, como grupo interno las seis especies, R. lechleri Steud, R. quirihuense C.Baeza, R. sorianoi Nicora, R. violaceum (Desv.) Nicora, R. pictum (Nees et Meyen) Nicora, R. virescens (Desv.) Nicora y variedades. Se eligió R. paschale (Pilg.) C. Baeza, especie endémica de la Isla de Pascua como grupo externo. Para el análisis se utilizaron los programas Winclada y NONA 2.0. El cladograma muestra una divergencia temprana de R. quirihuense del resto de las especies, las cuales conforman un clado bien definido. Dentro de este último clado, R. lechleri y R. sorianoi forman un grupo estrechamente relacionado mientras que el resto de las especies se resuelven en sucesivas dicotomías terminando en una rama que confirma la afinidad entre las dos variedades de R. virescens. Tanto la separación de R. quirihuense de las demás especies, así como la del clado R. lechleri-R. sorianoi del resto, se corresponden con la distribución geográfica, costera, andina, andino-patagónica, que muestran las entidades en Sudamérica.
Agradecimientos: Programa MECESUP-Redes (UCO0214), DIUC 203.111.033-1.0 Universidad de Concepción

99.- VARIABILIDAD GENÉTICA DE NUEVE POBLACIONES DE NOTHOFAGUS ALESSANDRII ESPINOSA (FAGACEAE). Genetic variability of nine populations of Nothofagus alessandrii Espinosa (Fagaceae). Oportus B., Ruiz, E. Universidad de Concepción, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Departamento de Botánica, Chile.

Se estudió la variabilidad genética de nueve fragmentos de Nothofagus alessandrii (Fagaceae) a través del uso de la variabilidad genética isoenzimática. Se determinaron las frecuencias alélicas de siete loci que resolvieron en todas las poblaciones (MDH-2, MDH-3, GPI-1, GPI-2, PGD-1, PGM-1 y PGM-2). Para cada fragmento se calculó la heterocigocidad esperada y observada, alelos por locus, número efectivo de alelos por locus, usando el programa Tools for Populations Genetic Análisis. También se determinó la distribución de la variabilidad genética (intra e interpoblacionalmente) con el programa GeneStat-pc 3.3. Los resultados indican que N. alessandrii tiene moderados a altos niveles de diversidad genética comparado a otras especies congenéricas. Además, la mayor parte de la variabilidad se da intrapoblacionalmente, a pesar que una considerable proporción se da entre poblaciones. Los resultados de este trabajo indican que los niveles de variabilidad genética de N. alessandrii se mantienen similares en todas las poblaciones, independientes del tamaño de la población. No se detectó pérdida de variabilidad genética como consecuencia de la disminución del tamaño de sus poblaciones.
Agradecimientos: Universidad de Concepción, GIA 201.111.025-1.4

100.- CARACTERIZACIÓN MORFOANATÓMICA DE LAS ESPECIES DE AZORELLA LAM. (APIACEAE) EN CHILE. Morphoanatomic characterization of Chilean species of Azorella Lam.(Apiaceae). Balboa, K., Toro, O., Negritto, M., Baeza, C.M., Ruiz, E. Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Concepción, Chile

Azorella Lam. (Hydrocotyloideae, Apiaceae) es un género principalmente americano, con 26 especies de las cuales 15 habitan en Chile y 2 son endémicas. Se encuentran a lo largo de la cordillera de los Andes, entre 650-4.500 m, desde Venezuela hasta las Islas Subantárticas. Se destacan por presentar típicamente dos formas biológicas, plantas arrosetadas y pulvinadas. Se caracterizó morfoanatómicamente la hoja de cada una de las especies. Se realizaron diafanizados y aclarados para la observación de las células y apéndices epidérmicos. Se efectuaron tinciones para evidenciar los patrones de nerviación. Se tomaron fotografías con cámara digital y con el MEB.
En Azorella, la forma de la hoja es altamente variable, desde entera a compuesta, algunas sésiles otras pediceladas, en algunas la base foliar es envolvente. La epidermis en general es uniforme, las células son irregulares de bordes lisos. En relación a los tipos de apéndices se presentan pelos, lacinias, cilios, escamas, además, de emergencias. Los estomas son principalmente del tipo anomocítico y en menor frecuencia anisocíticos. La nervadura es compleja y variable, siendo simple generalmente en la base foliar y se vuelve reticulada en la lámina.
Agradecimiento: Dirección de Investigación, Universidad de Concepción

101.- SISTEMAS RADICULARES DE LOS ARBUSTOS DOMINANTES DEL MATORRAL ESPINOSO DEL P.N. BOSQUE FRAY JORGE. (Root systems of dominant shrubs from the thorn scrub vegetation of Bosque Fray Jorge National Park). Morales, J.P., Squeo, F.A. y Gutiérrez J.R. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de La Serena y Centro de Estudios Avanzados en Zonas Áridas (CEAZA), Casilla 599, La Serena, Chile (joaquinmorales@uraniomail.com) (Patrocinio F.A. Squeo)

Las absorción de agua y nutrientes por parte de las plantas depende de la arquitectura de su sistema radicular. Trabajos previos en zonas áridas muestran que distintas especies difieren en su habilidad de utilizar pulsos de precipitación y que esto se relaciona con sus sistemas radiculares (superficiales, profundos o dimórficos). Se evaluaron los sistemas radiculares que presentan tres arbustos dominantes del matorral árido espinoso en Quebrada de Las Vacas (P.N. Bosque Fray Jorge, 30º38'S-71º40'O, 230 msnm): Proustia cuneifolia (decidua de sequía), Adesmia bedwellii (semi-decidua) y Porlieria chilensis (siempre-verde). Las calicatas muestran un perfil del suelo, con una primera capa arenosa hasta los 60 cm, y luego un estrato arcillo-arenoso, altamente compactado. Independientemente de su hábito, las tres especies poseen un sistema radicular dimórfico, con raíces profundizadoras que penetran el estrato impermeable y acceden a aguas subterráneas, y raíces superficiales capaces de explotar los primeros 60 cm del suelo.
Financiado por FONDECYT Nº 1030225

102.- EFECTOS DE LA INTENSIDAD LUMÍNICA EN LA REGENERACIÓN NATURAL DE AEXTOXICON PUNCTATUM R. et P., BAJO CLAROS NATURALES EN BOSQUE ADULTO DEL PREDIO RUCAMANQUE, COMUNA DE TEMUCO, IX REGIÓN, CHILE. (Effects of the light intensity in the Aextoxicon's punctatum R. et P. natural regeneration under gaps to the interior of the adult forest of Rucamanque, Temuco's commune, IX District., Chile). Rodríguez-Kahler J. & González-Arratia M. Fac. de Ciencias, Universidad Católica de Temuco, casilla 15-D, Chile.
Pa
trocinio: Jara-Seguel P.

Se estudió la regeneración natural de las especies arbóreas del dosel, especialmente Aextoxicon punctatum, en 16 claros naturales en un bosque de naturaleza fragmentaria y considerado como área prioritaria de conservación de biodiversidad de la IX Región (38°39' S. y 72°35' O).
Los claros se caracterizaron mediante atributos como: área, origen, edad, orientación, forma; dentro de ellos se identificaron y caracterizaron los atributos estructurales de la regeneración natural y además se relacionaron las condiciones de luminosidad con la regeneración de la especie en estudio.
Los claros encontrados poseen principalmente forma redonda y exposiciones S y SE, siendo los factores que más influyen en la cantidad de luz que llega al suelo.
Además, se apreció que Aextoxicon punctatum, creció en aquellas zonas de menor luminosidad (zonas de sombra), respondiendo a su característica de especie tolerante.
Por lo tanto, por la cantidad y calidad de regeneración de A. punctatum existente en los claros estudiados, se concluye que esta especie formaría bosques puros en presencia de claros de pequeño tamaño (< 400 m2).

103.- VARIACIÓN EN LA TASA FOTOSINTÉTICA EN DOS POBLACIONES DE Nothofagus pumilio A DOS ALTURAS: ¿RESISTIR AL FRÍO O CAPTAR CARBONO? (Photosynthetic rate variation in two Nothofagus pumilio populations at two heights: ¿cold resist or carbon capture? Celis, R.1; San Martín, L.1; Gallardo, J.2 & Molina-Montenegro, M.A.1,3. 1Departamento de Botánica, Facultad de Cs. Naturales y Oceanográficas; 2Laboratorio de Fisiología Vegetal; 3ECOBIOSIS; Universidad de Concepción, Chile. marcmoli@udec.cl

La baja disponibilidad de agua, suelos pobres en nutrientes y bajas temperaturas del aire, provocan que el límite arbóreo sea una zona altamente estresante. El poseer estrategias para soportar las bajas temperaturas y el estrés hídrico repercutiría en la disminución en las tasas de fotosíntesis. En el presente trabajo se comparó la tasa de fotosíntesis neta y la eficiencia en el uso del agua y del nitrógeno, en dos poblaciones de Nothofagus pumilio a 1.100 y 1.800 msnm. Los resultados indican que la población que crece a menor altura tendría significativamente mayor contenido de nitrógeno foliar y una mayor disponibilidad de agua en el sustrato. Sin embargo los individuos de N. pumilio a los 1.800 m prestan una mayor tasa de fotosíntesis neta y mayor eficiencia en el uso del agua y nitrógeno que los individuos a los 1.100 m. El permanecer en zonas estresantes como el límite arbóreo, no necesariamente conllevaría a una disminución en su actividad fisiológica. De esta manera las especies que habitan en zonas limitantes tenderían a ser más eficiente en el uso de recursos, manteniendo mayores tasas de fotosíntesis que sus co-específicos en zonas menos limitantes.

104.- LA ZONA SUR DE CHILE, CENTRO PRODUCTOR DE MIELES MONOFLORALES. (The South zone of Chile, productive center of unifloral honeys) Pizarro R., Ávila G., Gómez M. y Montenegro G. Departamento de Ciencias Vegetales, Facultad de Agronomía e Ingeniería Forestal, Pontificia Universidad Católica de Chile.

Las comunidades vegetales del sur de Chile producen un mayor porcentaje de mieles monoflorales. Durante las temporadas apícolas 2001-2002 a 2003-2004, se obtuvo un 43,3% de mieles monoflorales en la X Región y un 42,8% en la IX Región, al sur del paralelo 39°S. En las comunidades vegetales ubicadas al norte de dicho paralelo, se obtuvo, aproximadamente, solo un 10% de mieles monoflorales durante las temporadas señaladas.
Solo dos especies, Lotus uliginosus y Eucryphia cordifolia, originaron mieles monoflorales al sur del paralelo 39°S, pero no las produjeron al norte de este. L. uliginosus aparece en mieles de regiones ubicadas al norte de esta latitud, y en varios casos en cantidades significativas, pero nunca como para considerarlas mieles monoflorales. E. cordifolia aparece en poquísimas muestras provenientes de sectores ubicados al norte del paralelo 39°S, y nunca en cantidades significativas.
El número promedio de especies cuyo polen apareció en mieles provenientes de zonas ubicadas ya sea al norte o al sur del paralelo 39°S no difirió significativamente, como tampoco lo hizo el número de especies que aparecían en cantidades significativas en las muestras, pero las mieles en que se encontró mayor cantidad de especies siempre provinieron de las zonas ubicadas al norte de esa latitud. Así, podemos decir que la zona Sur de Chile sería un centro productor de mieles monoflorales y de características únicas.
Financiado por Proyectos FIA C01-1-G-002 y FIA SUB-ES-C-2004-1-P-1

105.- POLISACÁRIDOS DE MACROALGAS MARINAS ESTIMULAN EL SISTEMA DE DEFENSA EN PLANTAS DE TOMATE. (Polysaccharides from marine macroalgae stimulate defense system in tomato plant) 1Dennett G., 2Matsuhiro B., 2Zúñiga E., 2Chandía N. y 1Moenne A. 1Laboratorio de Biología Molecular de Algas y 2Laboratorio de Hidratos de Carbono, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile.

La actividad elicitora de fracciones hidrolizadas de ácido algínico enriquecidas en ácido poli-D-manurónico (Poli-Ma), ácido poli-L-gulurónico (poli-Gu) así como fracciones de galactanos sulfatados (Poli-Ga) fue evaluada en plantas de tomate al mes de tratamiento. Se determinó la variación en la actividad de enzimas directamente relacionadas con defensa y detoxificación: fenilalanina amoníaco liasa (PAL), lipooxigenasa (LOX) y glutatión-S-transferasa (GST), y con las enzimas antioxidantes guayacol peroxidasas (GPOX), glutatión peroxidasa (GP) ascorbato peroxidasa (AP), dehidroascorbato reductasa (DHAR) y glutatión reductasa (GR). Las plantas tratadas con Poli-Ma presentaron un incremento en la actividad de las enzimas de defensa PAL y LOX. El tratamiento con Poli-Ga aumentó la actividad de PAL y GST. Por el contrario las plantas tratadas con poli-Gu no presentaron cambios en la actividad de estas enzimas. Contrariamente a lo observado con las enzimas de defensa, las enzimas antioxidantes no presentaron variaciones frente a estos tratamientos. Además se observó una disminución en el glutatión total en el tratamiento con Poli-Ma y Poli-Ga, mientras que el ascorbato total se mantuvo constante.
Por otra parte, se estudió el efecto de estos polisacáridos sobre el crecimiento de tomate, observándose que ninguno de estos tuvo efecto en las plantas tratadas.
Financiado por FONDECYT 1010594

106.- POLISACÁRIDOS DE MACROALGAS MARINAS ESTIMULAN EL CRECIMIENTO Y LA RESPUESTA DE DEFENSA A TMV EN TABACO. (Polysaccharides from marine macroalgae stimulate growth and defense response against TMV in tobacco) 1Laporte D., 1Vera J., 2Matsuhiro B., 2Chandía N., 2Zúñiga E. y 1Moenne A. 1Lab. Biología Molecular de Algas y 2Lab. Hidratos de Carbono, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile.

Plantas de tabaco (n= 6) fueron asperjadas con agua (controles) y con soluciones acuosas de polisacáridos (500 µg/mL) obtenidos de macroalgas chilenas, una vez por semana, durante un mes. De Lessonia vadosa se obtuvo, por hidrólisis ácida, una fracción enriquecida en ác. polimanurónico (Poli-Ma, 5 KDa). De Lessonia trabeculata se obtuvo, por hidrólisis ácida, una fracción enriquecida en ác. poligulurónico (Poli-Gu, 5 KDa) y de Schyzimenia binderi se obtuvo, por hidrólisis vía radicales libres, una fracción de galactanos sulfatados (Poli-Ga, 8.5KDa). El tratamiento de las plantas con Poli-Ga y Poli-Ma estimuló el crecimiento en 20% y 49%, respectivamente. Estos tratamientos activaron las enzimas de defensa fenilalanina amonia-liasa (PAL) y glutatión-S-transferasa (GST), así como varias enzimas antioxidantes (ascorbato peroxidasa, glutatión peroxidasa y guayacol peroxidasa) y aumentaron la cantidad de glutatión total y de dehidroascorbato. Por el contrario, el tratamiento con Poli-Gu no indujo cambios en el crecimiento y el sistema de defensa de tabaco. Por otro lado, plantas controles y tratadas con Poli-Ga fueron infectadas con virus TMV observándose una disminución en el número de lesiones necróticas, de aproximadamente un 70% en las plantas tratadas.
Financiado por FONDECYT 1010594.

Neurociencia

107.- Oscilaciones RÁpidas (600Hz) en el tectum Óptico de Columba livia. (Fast Oscillations (600Hz) in the Optic Tectum Columba of livia). Maureira, C., Bernucci, L., Vargas, S., Mpodozis, J. y Letelier, J.C. Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

La conducta visual en aves es asombrosa, en particular la sensibilidad que muestran en la detección de movimiento. En aves, el Tectum Optico (TO) es el núcleo visual principal, posee 14 capas, de las cuales las capas superficiales (1-7) reciben aferencias retinianas, mientras que las células ganglionares tectales (CGT, capa 13) son la principal eferencia tectal y proyectan al núcleo rotundo. Las respuestas visuales de las células tectales son complejas y no han sido descritas adecuadamente. Aquí caracterizamos cuantitativamente las respuestas visuales de las capas superiores (capas 1-10) del TO dorsal mediante registros electrofisiológicos simultáneos de 1, 4 o 16 electrodos. Las respuestas visuales tectales parecen trenes de espigas separados por 20 ms, tiempo que no es modulado por características de los estímulos. A mayor resolución temporal se observa que las "espigas" corresponden a eventos de oscilaciones complejas (>600Hz), de 2-8ms de duración y de amplitudes >500µV moduladas gaborianamente y que no corresponden a un registro multiunitario. Se propone que estas oscilaciones son generadas por la propagación dendrítica de un potencial de acción generado en el soma de las CGT o son el reflejo de la activación de las miles de ramificaciones axonales de las neuronas con axones "en cola de pincel" provenientes del núcleo istmo.
Fondecyt 1030761 y 1030522

108.- Segregación morfológica y dimorfismo sexual en el bulbo olfatorio accesorio (AOB) del roedor Histricognato Octodon degus. (Morphological segregation and sexual dimorphism in the accessory olfactory bulb (AOB) of the Hystricognath rodent Octodon degus.) Suárez, R.1, Márquez, N.2, Mpodozis, J3. 1Escuela de Postgrado, Facultad de Medicina, 2Departamento de Ciencias Ecológicas, Facultad de Ciencias, 3Departamento de Biología, Facultad de Ciencias. Universidad de Chile.

El AOB es el primer centro de relevo del Sistema Vomeronasal (SVN) en mamíferos. Se encuentra dorso-caudal al bulbo olfatorio principal y se relaciona con conductas sexuales mediadas por feromonas.
En el SVN de roedores se ha descrito una segregación dicotómica de distintos tipos neuronales. Las neuronas vomeronasales que expresan receptores tipo V1R inervan la zona rostral del AOB y aquellas que expresan V2R inervan la zona caudal.
En los roedores estudiados hasta ahora, principalmente Sciurognatos con AOB lentiforme, es posible detectar tal dicotomía exclusivamente mediante estudios de inmunorreacción. Aquí presentamos por primera vez un modelo animal que posee un AOB con estructura bilobular, con una clara segregación morfológica de las zonas rostral y caudal. Además encontramos un dimorfismo sexual en el cual tanto el volumen del AOB rostral, como la razón de volúmenes del AOB rostral v/s caudal es mayor en el macho que en la hembra. Estos resultados presentan a Octodon degus como un modelo animal para el estudio del SVN de tipo segregado.
Agradecimientos: Vásquez, R., Sentis, E.
Financiamiento: FONDECYT 1030522, beca ICBM, beca Mecesup UCO0214)

109.- EFECTO DE LA DESNUTRICIÓN PRENATAL EN LAS INTERACCIONES EXCITATORIAS RECÍPROCAS ENTRE LOS NÚCLEOS PARAVENTRICULAR DEL HIPOTÁLAMO Y LOCUS COERULEUS. ESTUDIO ELECTROFISIOLÓGICO. (Effect of prenatal malnutrition on reciprocal excitatory interactions between the hypothalamic paraventricular and locus coeruleus nuclei). Pérez, H.1, Ruiz, S. 2, Núñez, H. 1, Gotteland, M.1 1INTA, Universidad de Chile; 2Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Diego Portales.

La expresión de CRF está aumentada en el núcleo paraventricular del hipotálamo (NPH) en ratas jóvenes prenatalmente malnutridas. Este incremento podría conducir a hiperactividad de neuronas noradrenérgicas del tronco cerebral, sobre la base que existen conexiones excitatorias recíprocas entre NPH y estas neuronas noradrenérgicas. Se investigó en ratas anestesiadas, tanto controles como malnutridas, la actividad neuronal multiunitaria espontánea en NPH y en el locus coeruleus (LC), antes y después de la microinyección de agonistas y antagonistas noradrenérgicos a1 en NPH, y de agonistas y antagonistas de CRF en LC. A diferencia de los controles, en los animales malnutridos: (A1) CRF intra-LC no produjo aumentos en la actividad bioeléctrica del LC y del NPH; (A2) CRF intra-LC posterior a prazocin intra-NPH indujo una disminución de la actividad neuronal en este núcleo; (B1) fenilefrina intra-NPH solo indujo incrementos de la actividad neuronal en este núcleo; (B2) fenilefrina intra-NPH posterior a a Helical-CRF intra-LC produjo un descenso de la actividad neuronal en LC, pero no impidió el alza de la actividad bioeléctrica inducida por fenilefrina intra-NPH. Se concluye que en animales prenatalmente malnutridos las conexiones excitatorias recíprocas se hacen insensible a CRF pero no a agonistas noradrenérgicos a1.
FONDECYT 1030626

110.- EXPRESIÓN POSTNATAL EN RATA DE LA HORMONA LIBERADORA DE CORTICOTROPINA DETERMINADA MEDIANTE PCR EN TIEMPO REAL (Rat postnatal expression of corticotropin releasing hormone determined by Real Time PCR). Núñez, H.1, Pérez, H.1, Ruiz, S.2, Navarrete, M.1, Gotteland, M.1 1INTA, Universidad de Chile; 2Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Diego Portales.

En el hipotálamo CRH es uno de los principales moduladores de eje Hipotálamo-Hipófisis-Adrenal. En la rata, los RNAm de CRH, evaluados por Northern blot, comienzan a expresarse en el hipotálamo durante la última semana de vida prenatal. Al nacimiento los niveles de expresión hipotalámica de los RNAm de CRH descienden, valores que se mantienen bajos hasta el día 10 de vida postnatal. Sin embargo, no se han cuantificado por métodos de mayor exactitud los niveles de expresión de CRH en este periodo. En este estudio determinamos la expresión de RNAm de CRH en tejido hipotalámico de ratas de 2 y 40 días de vida postnatal, iniciando la extracción de RNA total con solución de fenol guanidina isotiocianato (TRIZOL), transcripción reversa y posterior cuantificación de los productos de amplificación por PCR en Tiempo Real mediante el sistema Fast Start DNA Master SYBR Green 1. Al día 2 de vida postnatal se encontró una expresión reducida de los RNAm de CRH en comparación a los 40 días, lo que sugiere una pobre regulación en la síntesis de CRH debido a una vía neuronal inmadura en el cerebro o a una retroalimentación de glucocorticoides aumentada durante el período perinatal.
FONDECYT 1030626.

111.- DISTRIBUCIÓN ESPACIAL DE LA SEÑAL DE Ca2+ INTRACELULAR EN CÉLULAS CROMAFINES DIFERENCIADAS CON MEDIO CONDICIONADO DE ASTROCITOS: CONTRIBUCIÓN DE LOS CANALES DE Ca2+. (Spatial distribution of intracellular calcium in chromaffin cells differentiated with astrocyte conditioned medium: calcium channels contribution) Ardiles, A., Toro, R., Mora, I. Centro de Neurociencias de Valparaíso, Universidad de Valparaíso.
Patrocinio: Pablo Caviedes.

Las células cromafines adrenomedulares adquieren una morfología neuronal en presencia de factores neurotróficos secretados por los astrocitos, pero no se han estudiado los cambios en la distribución de la señal intracelular de Ca2+ ([Ca2+]i) y la contribución de los distintos subtipos de canales de Ca2+ voltaje-dependientes (CCVD) a dicha señal en células cromafines diferenciadas. Por ello, comparamos el efecto de un medio condicionado de astrocitos (MCA) en ausencia y presencia de KCl 17mM (MCA-K+). Imágenes de Ca2+ con Fluo-4, muestran que las células diferenciadas con MCA-K+ exhiben mayor fluorescencia en los terminales neuríticos que en el soma. Tal patrón de distribución se mantuvo cuando la entrada de Ca2+ ocurrió a través de CCVD tipo-N y tipo-P/Q. La cuantificación de la [Ca2+]i utilizando Indo-1 en presencia de bloqueadores selectivos de CCVD, mostró que el MCA-K, pero no el MCA, aumenta la contribución relativa del canal tipo-N a la [Ca2+]i inducida por KCl 70mM. Nuestros resultados indican que el MCA en combinación con la despolarización producen un cambio en el patrón de distribución espacial de la [Ca2+]i y en la contribución relativa de los distintos subtipos de CCVD.
Proyecto Fondecyt 1020812.

112.- EFECTO DEL ENRIQUECIMIENTO AMBIENTAL TEMPRANO EN LA ACTIVIDAD EXPLORATORIA DE LA RATA DURANTE LA LACTANCIA Y EN EL APRENDIZAJE VISUO-ESPACIAL DURANTE LA VIDA ADULTA. (Effect of early environmental enrichment on exploratory activity of the rat during lactation and on visuo-spatial learning at adulthood). Castillo, A.1, Fernández, V. 2, Hernández, A. 3, Burgos, H.1. 1Escuela Psicología, Universidad Santo Tomás, 2ICBM, Facultad Medicina, Universidad de Chile, 3Facultad Química y Biología, USACH.

Pocos trabajos han estudiado la influencia de la poliestimulación predestete en el comportamiento exploratorio y aprendizaje. Se determinaron los efectos de un ambiente polisensorial enriquecido en el comportamiento motor-exploratorio durante la lactancia y en el aprendizaje visuoespacial en ratas adultas. Las crías fueron expuestas a un procedimiento de poliestimulación sensorio-motora entre el día 2 y 22 de vida postnatal, tres sesiones diarias de 30 minutos cada una, y se evaluó la conducta motora en un test de nado y la conducta exploratoria en dos tests ad-hoc, a los 9 y 19 días de edad respectivamente. A los 60 días de edad se evaluó el aprendizaje visuoespacial en el laberinto de Olton. Los resultados mostraron que el enriquecimiento ambiental aceleró la conducta de nado en dos a tres días, e incrementó significativamente la conducta exploratoria en las crías. En la edad adulta, los animales poliestimulados cometieron un menor número de errores y presentaron un menor tiempo de recorrido en el laberinto radial octogonal. Los resultados enfatizan la importancia del enriquecimiento ambiental durante el período de lactancia para un mejor desempeño conductual.
Proyecto INV-5-03-04 UST.

113.- LOCALIZACIÓN SUBCELULAR DIFERENCIAL DE LOS EXONES III y IV DE BDNF EN HIPOCAMPO DE RATA in vitro e in vivo. (In vitro and in vivo differential sub-cellular localization of BDNF exon III and IV in the rat hippocampus). Mena, W. Cortés, M. and Aliaga, E. Centro de Neurociencia, Facultad de Ciencias, Universidad de Valparaíso.

El factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF) es una Neurotrofina que ha sido relacionada con neuroprotección y neuroplasticidad en el SNC adulto. Su gen origina 4 transcritos diferenciados en sus regiones 5´ no traducidas (5´UTRs) que codifican un único péptido. Al igual que para otros ARNms relacionados a plasticidad, se ha descrito una localización dendrítica para los ARNms de BDNF (panBDNF). Sin embargo, se desconoce si esta localización está dada por algún transcrito particular.
Hemos analizado la localización somatodendrítica de dos transcritos de BDNF (exones III y IV), mediante hibridación in situ no-radioactiva en neuronas de hipocampo de rata in vitro e in vivo. En cultivos primarios el ARNm exon IV se distribuye somatodendríticamente (similar a panBDNF) mientras que el exón III muestra localización somática. Esto último se exacerba al aumentar los días en cultivo. Por otro lado, en hipocampo de rata adulta, los exones III y IV muestran escasa distribución dendrítica. Sin embrago, en ratas tratadas con Kaínato observamos un desplazamiento del Exon IV a las dendritas del CA3, mientras que el Exon III se mantiene somático.
Estos resultados muestran una localización dendrítica del ARNm exón IV de BDNF, lo que permitiría asociarlo a fenómenos de plasticidad sináptica.
(Fondecyt 1040306, Fundación Andes, DIPUV 11-2003)

114.- AUMENTO DE LA EFICACIA SECRETORA EN EL TERMINAL NEURÍTICO DE CÉLULAS CROMAFINES DIFERENCIADAS CON MEDIO CONDICIONADO DE ASTROCITOS (Enhancement of secretory efficacy in neurite terminals of chromaffin cells differentiated with astrocyte conditioned medium). Maripillán, J., Lagos, V., Cárdenas, AM. Centro de Neurociencias de Valparaíso, Universidad de Valparaíso.
Patrocinio: Pablo Caviedes

Los astrocitos liberan factores difusibles que promueven cambios morfológicos en células cromafines adrenomedulares, favoreciendo la elongación de procesos neuríticos. Nuestro objetivo fue demostrar que tal diferenciación morfológica es también funcional, producto de un cambio en la eficacia secretora y del patrón de distribución de zonas activas de secreción.
Las células cromafines fueron diferenciadas con medio condicionado de astrocitos (MCA). Las catecolaminas liberadas se midieron amperométricamente con microelectrodos de carbono.
En células diferenciadas con MCA la secreción ocurre prioritariamente en el terminal neurítico. Aunque el patrón de los eventos individuales no cambia, la frecuencia con que ocurren aumenta 5 veces en comparación con la secreción de células espontáneamente diferenciadas. La relación secreción/[Ca2+]i es mayor para las células diferenciadas con MCA. El análisis de la distribución de vesículas secretoras, inmunomarcando la enzima intravesicular Dopamina-beta-hidroxilasa, mostró que las vesículas se acumulan en la membrana del terminal neurítico. Mediante inmunoblotting observamos que MCA, en presencia de KCl 17mM, aumenta la expresión de la enzima limitante de la síntesis de catecolaminas, tiroxina-hidroxilasa, y la proteína de anclaje vesicular SNAP-25. Concluimos que MCA aumenta la eficacia secretora, promueve la redistribución de zonas secretoras activas y probablemente aumenta el pool de vesículas de liberación inmediata.
Fondecyt 1020812

115.- Transducción olfativa en neuronas receptoras ciliadas de la Cabinza, Isacia conceptionis (Teleostei: Haemulidae), (Olfactory transduction in ciliated receptor neurons of the Cabinza grunt, Isacia conceptionis (Teleostei: Haemulidae), Schmachtenberg1 O., Bacigalupo2 J., 1Centro de Neurociencias de Valparaíso (CNV), Universidad de Valparaíso, y 2Millennium Institute for Advanced Studies in Cell Biology and Biotechnology y 3Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, Santiago de Chile

The ciliated receptor neurons of fish olfactory organs are thought to transduce amino acids through a cAMP-dependent transduction pathway, but direct physiological evidence for this hypothesis remains scarce and is confined to catfish and trout. We investigated olfactory transduction in a marine fish, the Cabinza grunt Isacia conceptionis (Perciformes, Teleostei). The olfactory epithelium was characterized by light and electron microscopy and isolated ciliated receptor neurons were recorded with the perforated patch clamp technique. Cells were stimulated with puffer pipettes containing amino acid odorants, IBMX plus Forskolin or 8Bromo-cAMP. All three stimuli triggered transient inward currents at a holding potential of _70 mV and responses with outward-rectifying current-voltage relations. The characteristics of the transduction currents induced by each stimulus were similar across cells and indistinguishable within the same cell, supporting the hypothesis of a cAMP pathway mediating transduction of amino acids in ciliated olfactory receptor neurons.
Patrocinado por FONDECYT 3030070 (OS) y 1020964 (JB), y MIDEPLAN ICM P99-037-F (OS) y P99-031-F (JB).

116.- EFECTOS DE MDMA EN LA INDUCCIÓN DE PLASTICIDAD SINÁPTICA EN HIPOCAMPO Y CORTEZA VISUAL (Effects of MDMA on the induction of synaptic platicity in hippocampus and visual cortex) Encina M.1, Rozas C.1, Reyes-Parada M.2 y Morales B1. 1Facultad de Química y Biología y 2Facultad de Ciencias Médicas, Universidad de Santiago de Chile.
Patrocinio: Alejandra Moenne.

3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA, éxtasis) es una droga recreacional que provoca euforia y empatía. Estudios conductuales muestran que MDMA provoca pérdida en el aprendizaje y memoria espacial de largo plazo. Sin embargo, los mecanismos celulares y moleculares involucrados son aún desconocidos. Nosotros estudiamos el efecto de la aplicación aguda de MDMA sobre los modelos de memoria: potenciación y depresión de larga duración (LTP, LTD).
En rebanadas de hipocampo de 400 µm, LTP y LTD evocadas desde las colaterales de Schaeffer fueron extracelularmente registradas en CA1 después de una estimulación tetánica y de baja frecuencia, respectivamente. En corteza visual, LTP y LTD fueron evocadas desde la capa IV y registradas en capa II/III.
En hipocampo la aplicación de MDMA indujo reversiblemente un aumento de la LTP y una disminución de la LTD de manera dosis-dependiente. Por otro lado, en corteza visual esta droga disminuyó también de manera dosis-dependiente y reversiblemente la potenciación de ambas; de LTP y LTD. Las evidencias sugieren que el MDMA modula diferencialmente la plasticidad sináptica en hipocampo y corteza visual posiblemente mediante la liberación de serotonina endógena. En hipocampo el efecto de MDMA podría estar asociado con déficit de memoria y aprendizaje observado en modelos animales.
FONDECYT:1030220, DICYT.

117.- ANÁLISIS MORFOLÓGICO comparaDO de la habénula de vertebrados (Comparative analysis of habenular morphology in vertebrates) Villalón, A., Ahumada, P., Aguayo, C., Concha, M.L. Programa de Morfología, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Financiamiento: FONDECYT 1020902, Wellcome Trust IRDA, ICM P01-007-F.

La habénula es un núcleo diencefálico bilateral altamente conservado en la evolución de vertebrados que conecta a regiones del telencéfalo con núcleos motores del cerebro medio, y que ha sido implicado en la modulación de conductas tan diversas como recompensa, ansiedad, sueño, dolor y conductas maternas. Una de las características más notorias de este núcleo es la marcada asimetría de tamaño entre sus lados izquierdo y derecho, fenómeno que es más evidente en vertebrados basales y que en algunas especies se acompaña de un desarrollo asimétrico intrahabenular y de sus eferencias hacia el núcleo interpeduncular. En este trabajo hemos realizado un análisis morfológico (a través de cortes histológicos teñidos con cresil violeta y reconstrucciones tridimensionales) y de conectividad eferente (mediante tinción con los trazadores lipofílicos DiI y DiA) de los núcleos habenulares en una variedad de grupos vertebrados donde las asimetrías habenulares se manifiestan con una distinta intensidad: ciclostómos (Eptatretus stouti), peces teleósteos (Oryzias latipes), lagartijas con y sin ojo parietal (Liolaemus tenui y Homonota dorbignyi), y roedores (Rattus rattus, Mus musculus, Octodon degus). El objetivo del trabajo es verificar la hipótesis evolutiva de que el grado de asimetría morfológica habenular se correlaciona con una creciente segregación dorso-ventral de los eferentes habenulares en el núcleo interpeduncular.

118.- MEDAKA COMO MODELO DE ASIMETRÍA CEREBRAL. (Medaka as a model organism of brain asymmetry) Signore, I.A., Guerrero, N., Wittbrodt, J., y Concha, M.L. Programa de Morfología, ICBM Facultad de Medicina, Universidad de Chile. *EMBL, Heidelberg, Alemania. Financiamiento: FONDECYT 1020902, PCCI BMBF/CONICYT 2003-4-124, Wellcome Trust IRDA, ICM P01-007-F.

El pez teleósteo Medaka (Oryzias latipes) ha surgido recientemente como un modelo vertebrado en el cual investigar los mecanismos que controlan el desarrollo del sistema nervioso central. En este trabajo investigamos si Medaka es un buen modelo donde estudiar el desarrollo de las asimetrías cerebrales. Inicialmente, verificamos la existencia de asimetrías en la habénula, un núcleo bilateral del diencéfalo dorsal que en otros peces teleósteos exhibe asimetrías morfológicas izquierda-derecha. Mediante el análisis de inmunocitoquímica contra a-tubulina acetilada y la tinción con los trazadores lipofílicos DiI y DiA detectamos marcadas asimetrías tanto en el contenido de neuropila como en la conectividad eferente, entre las habénulas izquierda y derecha. Asimismo, encontramos que pitx2, un efector de la vía de señalización TGFb Nodal, se expresa solo a la izquierda del SNC previo al desarrollo de asimetrías morfológicas. Todo lo anterior, junto con el análisis por microscopia confocal de peces transgénicos de Medaka generados por enhancer trap y que expresan la proteína fluorescente verde (GFP) en la habénula en desarrollo, nos confirma el carácter asimétrico de la habénula, y demuestra que Medaka es un excelente modelo en el cual investigar los eventos genéticos y morfogenéticos que participan en el establecimiento de las asimetrías cerebrales.

119.- PATRÓN DE EXPRESIÓN GÉNICA EN EL CUERPO CAROTÍDEO SOMETIDO A HIPOXIA CRÓNICA. (Gen pattern expression of carotid body under chronic hypoxia). Mosqueira, M., *Velásquez, L., Iturriaga, R. Lab. Neurobiología, Facultad Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile y *Lab. Inmunología- Reproducción, Facultad Química y Biología, Universidad de Santiago.

La hipoxia crónica (HC) aumenta la respuesta quimiosensorial a la hipoxia aguda y el tamaño del cuerpo carotídeo (CC), probablemente debido a cambios de expresión génica. Luego, estudiamos el efecto de HC sobre el patrón de expresión génica del CC y de las neuronas sensoriales que lo inervan. El RNA, extraído de cultivos normóxicos e hipóxicos de 1 semana del CC y del complejo ganglionar petroso-yugular-nodoso (PYN) de ratas, se amplificó, marcó con 32P y se hibridó en membranas de macroarray de 1.176 genes. Se consideró como cambio de expresión significativo una razón hipoxia/normoxia de 2.0 y una diferencia de 15.000 pixeles. En CCs, se expresaron 132 (11,2%) genes en ambas condiciones, 203 (17,3%) en normoxia y 252 (21,4%) en hipoxia. La hipoxia aumentó la expresión de c-jun, ciclina-c, factor precursor intrínseco y rab-GDI-b y disminuyó acil-CoA deshidrogenasa, citocromo oxidasa, arginasa, Fte-1, subunidad RC7-1 proteosoma y polipéptido gástrico inhibitorio. En PYNs se expresaron 81 (6,9%) genes en ambas condiciones, 104 (8,8%) en normoxia y 149 (12,7%) en hipoxia. La hipoxia aumentó la expresión de ciclina-específica-G y serina-proteinasa-rPC7 y disminuyó alcohol dehidrogenasa-A, transportador de dopamina y Fte-1. Estos cambios de expresión génica podrían estar involucrados en las respuestas morfológicas y fisiológicas inducidos por la hipoxia crónica.
Financiamiento CONICYT AT403105 (MM), DICYT (LV), FONDECYT 1030330 (RI)

 

Biotecnología -Biología Molecular

120.- PRESENTACION DE ANTÍGENOS DE Brucella abortus POR MACROFAGOS TRANSFECTADOS CON VACUNA pcDNA-SOD. (Antigens presentation of Brucella abortus in transfects macrophages with pcDNA-SOD vaccinia.) Salgado, P., Céspedes, S., Andrews, E. y Oñate, A Laboratorio de Inmunología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción.

La brucelosis es una zoonosis de alta incidencia y relevancia en el mundo, cuyo agente etiológico es Brucella abortus. La inmunización con vectores ADN representa uno de los más eficaces métodos que permiten otorgar protección contra esta enfermedad, existiendo proteínas capaces de inducir una respuesta inmune celular. Entre estas se encuentra la proteína superóxido dismutasa Cu/Zn, capaz de otorgar protección frente al desafío con una cepa patógena de Brucella abortus. Con el objetivo de dilucidar algunos mecanismos envueltos en la presentación de antígenos entregados por vectores ADN, hemos evaluado in vitro la capacidad de macrófagos, transfectados con el gen sodC, de presentar este antígeno vía MHCI y MHCII. Para esto, los macrófagos fueron transfectados con el vector pcDNA/SOD y utilizados en ensayos de linfoproliferación y citotoxicidad de esplenocitos de ratones BALB/c, previamente inmunizados con B. abortus y E. coli expresando SOD. Los resultados indican que macrófagos transfectados son capaces de inducir actividad citotóxica, debido a los altos niveles de lisis específica y los ensayos de linfoproliferación muestran que existe una activación de linfocitos por parte de los macrófagos transfectados. Esto nos permite sugerir que los macrófagos transfectados con el gen sodC son capaces de presentar antígenos a través del MHCI y MHCII.
Financiado por Proyecto Fondecyt 1010851.

121.- ADHESIÓN DE CEPAS DE Lactobacillus spp. VAGINALES CON PROPIEDADES PROBIÓTICAS. A SOPORTE DE SONDA LATEX SILICONA. (Adhesion to silicone-rubber probe by vaginal Lactobacillus strains with probiotic properties) Pérez, L., Sánchez, M., Castro, E. Universidad de Concepción. Fac. Ingeniería. Depart. Ingeniería Química. Laboratorio de Bacterias Lácticas.

En el ambiente intrahospitalario la morbilidad desencadenada por bacterias uropatógenas, origina elevados costos terapéuticos en su manejo y control. A su vez, el género Lactobacillus, ha sido ampliamente utilizado en la elaboración de probióticos con fines terapéuticos o preventivos. En esta investigación se evaluó la capacidad de adherencia y la formación de biopelícula en soportes de látex-silicona empleadas para las caterizaciones vesicales en los centros hospitalarios, de cepas de Lactobacillus spp. vaginales con propiedades benéficas. Se prepararon viales de cultivo con trozos de sonda de látex-silicona (SILKOLATEX de Rüsch, Alemania), de 0.5 cm de largo por 0.47 cm de diámetro, los cuales fueron incubados con las cepas de Lactobacillus spp. a 37° C con una agitación constante de 150 rpm. El tiempo total de incubación de las cepas con el soporte fue de aproximadamente 13 a 14 horas. Todos los viales fueron monitoreados con recuentos bacterianos, tanto del sobrenadante como del soporte. Con los datos obtenidos, se calcularon constantes de crecimiento (m) y se graficaron los Ln(UFC/UFCo) en función del tiempo de las fase de crecimiento bacteriano exponencial. Se obtuvieron cepas de Lactobacillus capaces de colonizar el soporte de látex - silicona en forma rápida y con buenos índices de recuento bacteriano en el soporte. Los resultados obtenidos pueden aplicarse para la elaboración de un soporte biológico sustentado con estas cepas probióticas, que pueda reducir los patógenos del tracto urinario nosocomiales.
Esta unidad de investigación fue desarrollada con aportes del Proyecto FONDEF N° DO1I1121.

122.- ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE METABOLITOS LIQUÉNICOS SOBRE LA LÍNEA CELULAR DE CÁNCER DE MAMA, MCF-7. (Cytotoxicity of lichenic metabolites on the MCF-7 breast cancer cell line). 1Weinstein-Oppenheimer, 1C.R., Barrios, 2Y., Rubio, C. 2Quilhot,W. 1Departamento de Bioquímica y 2Departamento de Química y Recursos Naturales, Facultad de Farmacia, Universidad de Valparaíso.

Los líquenes producen una variedad de metabolitos con potencial farmacológico; sin embargo no existen estudios suficientes que hayan evaluado la capacidad citotóxica de estos compuestos en cáncer de mama, uno de los cánceres más comunes que afecta a las mujeres. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad citotóxica de trece productos liquénicos, que incluyen derivados de acetato polimalonato, ácido mevalónico y ácido chiquímico, aislados en el Laboratorio de Líquenes de la Facultad de Farmacia de la Universidad de Valparaíso. Se utilizó una línea celular epitelial de cáncer de mama, células MCF-7. El ensayo consiste en la determinación del contenido proteico, por reacción con sulforodamina, de las células incubadas durante 72 horas con los metabolitos liquénicos o con solvente. Los resultados se expresan como la diferencia en absorbancia entre las células tratadas y el control. Los compuestos evaluados exhibieron una actividad citotóxica que fluctuó entre -0,8 y -0,1. Los ácidos girofórico y divaricático, atranorina (dépsidos)y el (+)-ácido úsnico mostraron la mayor actividad. Se continuarán estudiando aspectos mecanísticos de la acción citotóxica de aquellos metabolitos que presentan un mayor potencial de convertirse en nuevos antineoplásicos.
Agradecimientos: Dirección de Investigación y Postgrado de la Universidad de Valparaíso.

123.- EFECTO ESTROGÉNICO DE EXTRACTO ORGÁNICO OBTENIDO DE AGUA MEDIO AMBIENTAL A LA LÍNEA CELULAR REPORTERO MMV-LUC. (Estrogenic effect of organic extracts from environmental water samples on reporter cell line MMV-Luc) Grothusen, H., Muller, M.*, Figueroa, J., Kausel, G. (gkausel@uach.cl), Instituto de Bioquímica, Universidad Austral de Chile; *Laboratoire de Biologia Moleculaire et de Genie Genetique, Universite de Liege, Belgium.

La actividad hormonal de compuestos en muestras de agua del medio ambiente se determinó aplicando un test basado en una línea celular reportera (Willemsen et al., 2004). Los MMV-Luc, la línea celular derivada de células tumorales mamarias humanas establemente transformada con el promotor del gen vitelogenina frente el reportero luciferasa, responden a concentraciones de hasta 10-11 mol/l 17-b-estrógeno. Esta alta sensibilidad hizo necesario desarrollar un protocolo novedoso para la extracción orgánica de las muestras de agua evitando la introducción de trazas de posibles reactivos durante el procesamiento. En paralelo se evaluó la línea celular TGRM-Luc, que responde a estímulos androgénicos. La aplicación a muestras de agua de los alrededores de Valdivia, reveló claramente una respuesta diferencial del test celular.
Estos resultados de estimulación de expresión génica in vitro complementan nuestros estudios sobre efectos ambientales a la expresión génica en el organismo Cyprinus carpio, que habita estas aguas.
Proyecto AGCI/CGRI 10/01068-3.4, DID-UACH S2004-57.
Ref: Willemsen, P., Scippo, M.-L., Kausel, G., Figueroa, J., Maghuin-Rogister, G., Martial, J.A., Muller, M. (2004). Use of reporter cell lines for detection of endocrine-disrupter activity. Anal. Bioanal. Chem. 378, 655-663.

124.- ELIMINACIÓN DE COMPUESTOS COLOREADOS UTILIZANDO JACINTO ACUÁTICO, EICHHORNIA CRASSIPES (Color removal by Eichhornia crassipes). Lagos, C., Decap, J., Urrutia, R. y Vidal, G. Centro de Ciencias Ambientales EULA-Chile, Universidad de Concepción. Casilla 160-C, Concepción, Chile. E-mail: cer_anton@hotmail.com. Patrocinio: Dr. Oscar Parra

Los sistemas de tratamiento con plantas acuáticas son una variante poco explorada para la depuración de aguas residuales. En estos, las plantas acuáticas funcionan como filtros biológicos removiendo sustancias biodegradables, tóxicas y microorganismos patógenos contenidos en aguas residuales. De todas las macrófitas, el jacinto acuático (Eichhornia crassipes) es una de las especies más prometedoras y estudiadas debido a su gran productividad y proliferación en regiones tropicales y subtropicales. El objetivo de este trabajo es evaluar la capacidad depuradora de Eichhornia crassipes, para tratar efluentes altamente coloreados. Se inocularon 8 lagunas (3 L) con 36 g de Eichhornia crassipes (tamaño promedio de la raíz 40 ± 10 mm y longitud promedio total 98 ± 20 mm) expuestos a distintas concentraciones (0,2; 0,1 y 0,05 g/L) de Poly R-478, tinte usado como colorante de referencia. Al sistema se le alimentó una razón de nutrientes N:P:K de 1:1:0,6. Cada experimento se realizó por triplicado, más un control. Los resultados preliminares indican que el color disminuyó entre 2 y 6% para los distintos tratamientos. El recuento total de las colonias bacterianas en las raíces de Eichhornia crassipes, aumentó entre 30 y 60%. Se observó un crecimiento de la biomasa de las plantas de un 4,9%.
Financiado por el proyecto Fondecyt 1040879.

125.- MICROORGANISMOS USADOS COMO BIOINDICADORES DE EFICIENCIA DE DEPURACIÓN DE UN EFLUENTE DE CELULOSA KRAFT A TRAVÉS DE UNA LAGUNA AIREADA. (Microorganisms used as bioindicadores of the kraft mill effluent treated by aireated lagoon). Chamorro, S., Xavier, C., Decap, J. y Vidal, G. Centro de Ciencias Ambientales EULA-CHILE, Universidad de Concepción. Casilla 160-C, Concepción, Chile. E-mail: schamorr@udec.cl. Patrocinio: Dra. María E. Casanueva.

Los efluentes provenientes de la industria de celulosa Kraft deben someterse a un tratamiento secundario, principalmente, por lagunas aireadas, para eliminar materia orgánica. Una forma de evaluar el comportamiento de estas es mediante los microorganismos presentes, que reflejan en mayor o menor proporción una cadena trófica. Cada grupo desempeña una función concreta en el sistema, su aparición y abundancia indican las condiciones de la laguna aireada. El objetivo de este trabajo es evaluar el funcionamiento de una laguna aireada por medio de microorganismos, considerando además los parámetros de eficiencia del efluente tratado. La estrategia de trabajo consistió en aumentar progresivamente la carga orgánica alimentada en la laguna aireada, evaluando los parámetros físico químicos de eficiencia (por ejemplo: carga orgánica, fenoles, color, entre otros) y el comportamiento de los microorganismos presentes en el sistema. Se identificaron 4 grupos de organismos: flagelados, ciliados libres y fijos, vermes y bacterias. Los resultados finales muestran que existe una relación entre el aumento de la velocidad de carga orgánica y la presencia/ausencia de ciertos microorganismos fundamentales para la depuración del efluente.
Financiado por proyecto Fondecyt 1040879.

126.- COMPORTAMIENTO DEL ÁCIDO ABIÉTICO EN UN TRATAMIENTO BIOLÓGICO AERÓBICO. (Abietic acid behavior in an aerobic biological treatment). Belmonte, M.1; Decap, J.1; Martínez, M.2; Vidal, G.1. 1)Centro de Ciencias Ambientales EULA-Chile. 2) Depto. Microbiología, Universidad de Concepción. Casilla 160-C, Concepción, Chile. E-mail: mbelmont@udec.cl. Patrocinio: Dr. Oscar Parra.

Los sistemas de tratamiento aeróbicos (por ejemplo lagunas aeróbicas) pueden minimizar los impactos generados a un ecosistema acuático, debido a la degradación de componentes específicos (ácidos resínicos), contenidos en efluentes provenientes del proceso de celulosa Kraft blanqueada. El objetivo de este trabajo es evaluar el comportamiento del ácido abiético (AA) presente en efluentes de la industria de celulosa Kraft, cuando es sometido a un tratamiento mediante laguna aeróbica. La metodología de trabajo consistió en operar una laguna aeróbica (332 mL) constituida por una zona aireada y una zona de decantación. Como estrategia de operación se consideró el aumento progresivo de la carga de AA (de 0,151 g AA/L†d a 0,604g AA/L†d) con 2 días de tiempo de retención. Se determinó la eficiencia de operación del sistema evaluando parámetros físico químicos (carga orgánica, fenoles, color, AA, entre otros). En cada estado estacionario se evaluó las características de biodegradación de la biomasa determinando una cinética en batch a diferentes concentraciones de AA (25, 50, 100, 250 y 500 mg/L). Los resultados indican que la eficiencia de eliminación de materia orgánica biodegradable del sistema es del 90%, mientras que la eliminación del AA es del 45%.
Financiado por proyecto FONDECYT 104987.

127.- EL MEDIADOR ES REQUERIDO PARA ACTIVACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN EN UN SISTEMA IN VITRO EN Schizosaccharomyces pombe (Mediator is required for activated transcription in S. pombe). Evelyn Tamayo, Giuliano Bernal y Edio Maldonado. Programa de Biología Celular y Molecular, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Santiago, Chile

La activación de la transcripción requiere, además del activador, de complejos proteicos denominados Mediador. El Mediador transduce las señales desde el activador a la maquinaria basal de transcripción. Nosotros hemos purificado el Mediador de S. pombe mediante el uso de extractos celulares de cepas de S. pombe que contenían un tag en una de las subunidades del Mediador. El Mediador en S. pombe consiste de RNAPII y una serie de polipéptidos adicionales, los cuales son capaces de activar transcripción por los activadores Gal4-VP16, Gal4-AP2 y Gal4- CTF. Estos experimentos fueron ejecutados usando un sistema de transcripción in vitro con TFIIB, TBP, TFIIE y TFIIF recombinantes. TFIIH y RNAPII fueron purificadas por cromatografía de afinidad. En contraste al requerimiento del Mediador para activación de la transcripción, los TBP-associated factors (TAFs) no tienen ningún efecto en activación de la transcripción. Se discuten las implicancias de estos resultados.
Fondecyt 1010824

128.- CAMBIOS EN EL PERFIL TRANSCRIPCIONAL EN DURAZNOS DURANTE POSCOSECHA: EN BUSCA DE LAS CAUSAS MOLECULARES DE LA HARINOSIDAD (Transcriptional profile changes during postharvest of peaches: searching for the molecular causes of woolliness). Tittarelli, A., Meisel, L. y Silva, H. Laboratorio de Genética Molecular Vegetal, Núcleo Milenio en Biología Celular Vegetal, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, Las Palmeras 3425, Ñuñoa, Santiago. Iniciativa Genoma Chile, FDI-Corfo G02P1001.

Chile es uno de los principales exportadores de fruta del hemisferio sur, por lo cual las frutas de exportación son sometidas a prolongados períodos de almacenamiento y transporte, generando problemas en su calidad, siendo el más serio el daño por frío que sufren duraznos y nectarines. Uno de los signos más claros de este problema es la harinosidad de los frutos. Cambios en la expresión génica durante el almacenamiento en frío de los frutos podrían explicar las causas moleculares de la harinosidad. En este trabajo, se realizó un análisis del perfil transcripcional global en estadios de poscosecha de duraznos variedad O'Henry, mediante la aproximación de Northern electrónico, utilizando el programa estadístico Winflat. Estos experimentos se realizaron a través de la construcción de cuatro genotecas de cDNA provenientes de cuatro estadios que representan las condiciones de exportación y la secuenciación de aproximadamente 50.000 EST's. Los resultados evidenciaron la inducción y el apagamiento de numerosos genes involucrados en diferentes procesos metabólicos. Además, se aislaron e identificaron cuatro promotores putativos que regularían la expresión de genes inducidos por frío e inducidos en frutos harinosos con el objetivo de futuras aplicaciones biotecnológicas.

129.- FRECUENCIA DEL POLIMORFISMO RAD51-135G>C EN MUJERES CHILENAS CON CÁNCER DE MAMA FAMILIAR (Frequency of the RAD-135G>C polymorphism in Chilean women with familial breast cancer). Acevedo ML., Santibáñez E., Jara L. Programa de Genética Humana, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

En Chile el cáncer de mama (CM) presenta la segunda tasa de mortalidad por cáncer. Las mutaciones en los genes BRCA1/2 solo explican alrededor del 15% del cáncer de mama familiar (CMF). Otros genes que participan en la reparación del DNA podrían contribuir a la susceptibilidad al CMF. Se ha sugerido que el gen RAD51 se asocia con el desarrollo de CMF. Se ha planteado que el SNP 135G>C de RAD51 podría modificar la penetrancia de las mutaciones en BRCA1/2, aumentando el riesgo para el desarrollo de esta enfermedad. Este polimorfismo se localiza en la región 5' no traducida (5'UTR) de RAD51, y podría afectar la eficiencia de su traducción, alterando los niveles de la proteína.
Se realizó un estudio caso-control en mujeres pertenecientes a 64 familias con CMF. De estas, 71 eran afectadas y 101 no presentaban la enfermedad. Los controles incluyeron 58 individuos sanos sin antecedentes de CMF.
El alelo C se detectó en el 12,2% de los casos y en el 6,8% de los controles (odds ratio`= 1.88; IC 95%, 0.57-6.79; p = 0,2609). Sin embargo, las diferencias no fueron significativas. Se requiere de mayores estudios para establecer si RAD51-135G>C modifica el riesgo para CMF o altera la penetrancia de las mutaciones en BRCA1/2.
Fondecyt 1010800, AVON-Breast Cancer Crusade (CONAC)

 

130.- CAMBIOS AMBIENTALES AFECTAN LA EXPRESIÓN DE PITX2 EN LA HIPÓFISIS DE CARPA, Cyprinus carpio. (Environmental effect on the expression of Pitx2 in hypophysis of carp, Cyprinus carpio). Vera, T., Castro, L., Figueroa, J., Kausel, G. (gkausel@uach.cl), Instituto de Bioquímica, Universidad Austral de Chile.

Con el objetivo de identificar factores de respuesta temprana a cambios ambientales en teleósteos caracterizamos Pitx2 de Cyprinus carpio, el factor de transcripción con homeobox que pertenece a la familia bicoid-like. Pitx2 en mamíferos está implicado en la regulación de prolactina, la hormona que en carpa muestra variación de su expresión durante la adaptación a cambios estacionales.
La secuencia parcial del cDNA y la estructura primaria derivada de Pitx2 de carpa muestra alta homología en el dominio de los dedos del zinc respecto a las secuencias de cDNA y del gen del pez cebra y otras especies.
Los transcritos de Pitx2 se detectan por RT-PCR en RNA total de la glándula pituitaria de carpa. En cortes sagitales de hipófisis de carpa las sondas moleculares Pitx2 específicas localizan mayoritariamente en la proximal pars distalis. En la rostral pars distalis, la región de las células lactótropas, se observa escasa reacción y ninguna señal en la pars intermedia. Resultados preliminares indican una represión de la expresión de Pitx2 en carpas de verano.
En paralelo detectamos factores hipofisiarios en cortes del pez cebra, Danio rerio, que se utilizarán para complementar los estudios de efectos xenobióticos en organismos teleósteos.
DID-UACh S-2004-57

Farmacología

131.- TOXICIDAD DEL COBRE Y SUS POSIBLES MECANISMOS. (Possible mechanisms of copper toxicity). M. Gutiérrez-Mostafá, A. M. Lepe, M. Faúndez, R. Marín, M. E. Letelier. Departamento de Química Farmacológica y Toxicológica, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de Chile. E-mail: mel@ciq.uchile.cl

La toxicidad del cobre ha sido relacionada principalmente con la capacidad de los iones cobre libres para catalizar, vía Haber-Weiss/Fenton, la producción de O2.- y HO., especies que inducen cambios oxidativos en las biomoléculas. La metalotioneína, proteína hepática que mayoritariamente une cobre, contiene 30% de residuos cisteínicos. La ceruloplasmina y la albúmina, proteínas que transportan cobre a través de la circulación portal, poseen también un alto contenido de residuos cisteínicos. Estos residuos están presentes en una gran variedad de proteínas, por lo que la unión inespecífica de cobre a ellas podría ocurrir e inducir así, modificaciones en sus funciones biológicas.

Nuestros resultados mostraron que Cu2+ µM era capaz de unirse a fracciones subcelulares de membrana; la cantidad de cobre unido aumentó significativamente en presencia de Zn2+, Hg2+, Cd2+, Ag+1, As3+. Además, Cu2+ µM disminuyó el contenido de tioles microsomales, en cambio la lipoperoxidación microsómica fue despreciable en presencia de cobre 50 µM/ascorbato 1 mM. No obstante, concentraciones nM de Cu2+/ascorbato indujeron significativamente la lipoperoxidación microsómica. La preincubación de Cu2+ con EDTA, TTM y NEM inhibieron estos efectos. La O-demetilación de p-nitroanisol y la conjugación de 1-cloro-2,4-dinitrobenceno con GSH, reacciones catalizadas por el sistema del citocromo P450 y la GSH-transferasa respectivamente, fueron inhibidas en igual porcentaje, tanto por Cu2+ µM como por Cu2+ µM/ascorbato. Estos resultados muestran que los mecanismos involucrados en la toxicidad inducida por cobre estarían representados por su capacidad de inducir estrés oxidativo y además, por la unión inespecífica de este metal a proteínas.

 

132.- ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE EXTRACTOS NATURALES DE USO MEDICINAL: VALIDACIÓN DE SISTEMAS BIOLÓGICOS COMO ESTÁNDAR. (Antioxidant activity of natural products: Validation of biological systems as standard). Holst-Schlager, M. y Letelier, M. E. Departamento de Química Farmacológica y Toxicológica, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, Universidad de Chile. E-mail: mel@ciq.uchile.cl

Los principales usos de Buddleja globosa (matico) están relacionados con patologías inflamatorias las cuales provocan estrés oxidativo, proceso que se caracteriza por un aumento no controlado de ROS. Existen numerosas investigaciones que dicen relación con la acción antioxidante de polifenoles, principios activos abundantes en las hojas del matico y solubles en extractos hidroetanólicos. Los potenciales redox de los sustratos sintéticos utilizados para calificar actividad antioxidante de extractos naturales [ABTS, Trolox, DPPH, etc.], son diferentes a los de los sustratos biológicos. Más, los efectos antioxidantes de los extractos naturales in vivo no solo están dados por la capacidad de atrapar ROS, sino además entre otros mecanismos, inducen enzimas que participan en la remoción de ROS e inhiben otras que participan en la generación de ROS.
En este trabajo estandarizamos microsomas de hígado de rata para estudiar la protección de macromoléculas de un extracto hidroalcohólico de matico; se compararon los agentes prooxidantes, Fe3+/ascorbato (endógeno) y DPPH (sintético). Al incubar los microsomas con estos agentes prooxidantes, los efectos del extracto de matico fueron diferentes, como lo indican los IC50 obtenidos de la oxidación de lípidos y tioles, además de la protección del espectro de absorbencia de la citocromo P450 oxidasa. Nuestros resultados apoyan el uso de sistemas biológicos, y no sintéticos, para evaluar y comparar la actividad antioxidante de extractos naturales ya que nos dan una mejor aproximación a lo que ocurriría in vivo, más aún si se considera que las ROS son las principales especies radicalarias que inducen estrés oxidativo celular.
Financiado por Laboratorios Ximena Polanco

133.- CURSO TEMPORAL DEL EFECTO DEL NGF ENDONEURAL SOBRE LA EXPRESIÓN DE CGRP EN NEURONAS SENSORIALES PRIMARIAS. (Time course of the effect of endoneurial NGF on CGRP expression in primary sensory neurons) Ruiz, Gac. y Baños JEbc. aInstituto de Farmacia, Universidad Austral de Chile, Casilla 567, Valdivia, Chile. bDepartamento de Ciencias Experimentales y de la Salud, Universitat Pompeu Fabra, 08003 Barcelona, España. cDepartamento de Farmacología, Terapéutica y Toxicología, Escuela de Medicina, Universitat Autònoma de Barcelona, 08193-Bellaterra, España.

Tras una lesión parcial de nervio se observa una sobreexpresión de factor de crecimiento neuronal (NGF) en la zona de la lesión. En este estudio evaluamos el efecto del NGF sobre la expresión de péptido relacionado al gen de la calcitonina (CGRP), un neuropéptido sensorial, en el ganglio de la raíz dorsal (GRD) y la médula espinal.
Las ratas recibieron una inyección endoneural de 30 ng de NGF disuelto en vehículo (tampón fosfato 0,1 M, pH 7,4/ seroalbúmina 0,1%) o solo vehículo. Uno, 3, 5, y 10 días posinyección, grupos de 3 a 4 animales fueron perfundidos por vía transcardíaca y los GRD L4 -L5 del lado inyectado y los segmentos medulares L4 - L5 fueron retirados y procesados para inmunohistoquímica.
Entre los días 1 y 5 el NGF, pero no el vehículo, aumentó entre un 10 a 15% el porcentaje de neuronas CGRP-positivas en el GRD y en más de 100 µm2 el área ocupada por fibras CGRP-positivas en las láminas III y IV del asta dorsal (p <0,05, ANOVA). El día 10 el patrón de expresión de CGRP en el GRD fue normal, mientras en el asta dorsal se observó disminución de la inmunorreactividad a CGRP en el lado inyectado con NGF.
Nuestros datos indican que el NGF endoneural puede ser responsable del aumento en la expresión de CGRP en axones disponibles, observado tras una lesión parcial del nervio ciático.

 

134.- ACTIVIDAD GASTROPROTECTORA DE UN NUEVO DERIVADO DE SOLIDAGENONA (Gastroprotective activity of a new solidagenone derivative). Sánchez, M.a; Theoduloz, C.b; Schmeda-Hirschmann, G.a; Razmilic, I.a; Yáñez, T.b; Rodríguez, J.b. aInstituto de Química de Recursos Naturales, bFacultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Talca, Talca, Chile. E-mail: msanchez@utalca.cl; schmeda@utalca.cl

En estudios previos se ha informado el efecto gastroprotector de derivados del diterpeno solidagenona en modelos animales de úlcera inducida. Por reducción de solidagenona con DIBALH seguida por adición de metanol y reordenamiento, se obtuvo el compuesto 15,16-epoxi-8(9),13(16),14-labdatrien-7b-metoxi-6b-ol (ELMO), que se describe por primera vez. ELMO inhibió significativamente (p < 0.01) la formación de úlceras en el modelo de lesiones inducidas por etanol/HCl en ratones, a dosis orales de 10, 20 y 40 mg/kg. Para determinar el mecanismo de la acción gastroprotectora del compuesto se evaluaron: niveles de prostaglandina E2 sobre cultivos de células epiteliales gástricas humanas AGS y efecto sobre la proliferación de células AGS y fibroblastos de pulmón humano. Se determinó la citotoxicidad sobre fibroblastos (incorporación de rojo neutro, reducción del MTT y contenido de DNA) y sobre células AGS (incorporación de rojo neutro). El derivado ELMO incrementó en tres veces los niveles de PGE2 en células AGS. Además demostró poseer actividad estimulante de la proliferación celular, actuando selectivamente sobre estas células. Los valores de citotoxicidad, expresados como IC50, oscilaron entre 262 y 418 µM para fibroblastos y 261 µM para células AGS.
M. Sánchez agradece a la Universidad de Talca su Beca de Doctorado. Financiamiento: FONDECYT 1030792.

135.- GASTROPROTECTIVE AND CYTOTOXIC EFFECT OF DEHYDROABIETIC ACID DERIVATIVES (Efecto gastroprotector y citotoxicidad de derivados del ácido dehidroabiético). Sepúlveda, B.a, Astudillo, L.a, Rodríguez, J.b, Yáñez, T.b, Theoduloz, C.b, Schmeda-Hirschmann, G.a aInstituto de Química de Recursos Naturales, bFacultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Talca, Casilla 747, Talca, Chile. E-mail: schmeda@utalca.cl

Dehydroabietic acid derivatives have been reported to display antisecretory and antipepsin effect in animal models. Some 19 dehydroabietic acid diterpenes were prepared by semisynthesis and assessed for gastroprotective activity on experimentally induced gastric lesions in mice as well as for cytotoxicity in human lung fibroblasts (MRC-5) and human epithelial gastric (AGS) cells. At a single oral dose of 100 mg/kg, highest gastroprotective effect was provided by compounds 1, 7-9, 12-14, 18-19 being as active as lansoprazole at 20 mg/kg and reducing the lesion index by at least 75%. In the compound series 1-9, the best activity/cytotoxicity ratio was found for the aldehyde 7, with an IC50 of 250-300 µM and 84% inhibition of the gastric lesions. In the compounds 10-19, the best gastroprotective effect was observed for the aromatic amides 12-14 (75-85 % inhibition of gastric lesions) bearing a nitro or halogen function in the N-phenyl moiety. Lowest cytotoxicity was found for the amides, with IC50 values >1000 µM for fibroblasts and 200 to >1000 µM for AGS cells.
Supported by FONDECYT 1030583 and the Programa de Productos Bioactivos, Universidad de Talca. B. Sepulveda thanks the Universidad de Talca for a Doctoral grant.