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Biological Research

versão impressa ISSN 0716-9760

Biol. Res. v.34 n.3-4 Santiago  2001

http://dx.doi.org/10.4067/S0716-97602001000300013 

VI CONGRESO DE LA

SOCIEDAD CHILENA DE INMUNOLOGÍA

 

17-19 de Octubre,
Hotel Termas de Cauquenes

 

 


Chile

 

 

S I M P O S I O

 

 

UNIQUE ENDOCYTIC TRANSPORT PATHWAYS FOR ANTIGEN PRESENTATION IN DENDRITIC CELLS. Sebastian Amigorena, INSERM U520, 12 rue Lhomond, Institut Curie, 75005 Paris, France.


The endocytic pathway in dendritic cells (DC) presents several unique features that contribute to DC's main biological function, antigen presentation for the initiation of immune responses. We have analyzed different aspects of endocytic transport in DCs, relevant to antigen presentation and T cell activation. First, we have examined the re-distribution of MHC class II molecules from endocytic compartments to the cell membrane, and identified an intermediate transport compartment where MHC class II molecules transiently accumulate before transfer to the cell surface. These vesicles contain VAMP8, a member of the SNARE family of cytosolic factors involved in membrane fusion. Second, we have analyzed the FcR-triggered signal transduction pathways, and, more specifically, the role of the protein tyrosine kinase (PTK) syk, in DC maturation. We found that this PTK is indispensable for FcR-mediated antigen presentation and DC maturation. Third, we recently found that DCs have developed a unique membrane transport pathway that allows export of internalized antigens into the cytosol, for MHC class I-restricted presentation to cytotoxic T cells. Antigen transport to the cytosol is specific to DCs, selective for internalized antigens. We now show that, like cross priming, transport to the cytosol is regulated during DC maturation. Finally, DCs produce small membrane vesicles of endocytic origin, exosomes, which induce strong immune responses in vivo. The mechanism of action of exosomes for T cell stimulation was analyzed. We found that exosomes can prime naive transgenic T cells, both in vivo and in vitro. T cell priming by exosomes, however, required standard mature or maturing DCs.

 


CELULAS DENDRÍTICAS DETERMINAN HOMING TEJIDO-ESPECÍFICO EN LINFOCITOS T.
(Dendritic cells determine tissue-specific homing of T-lymphocytes). J. Rodrigo Mora1,2, María Rosa Bono1,2, Ulrich H. von Andrian3 & Mario Rosemblatt1,2. 1Laboratorio de Inmunología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, Santiago. 2Fundación Ciencia para la Vida and MIFAB, Santiago. 3The Center for Blood Research and Department of Pathology, Harvard Medical School, Boston, USA.


Los linfocitos T (LT) naïve al ser activados, se diferencian a LT efectores y de memoria que migran preferentemente a los tejidos periféricos asociados a los órganos linfoides donde encontraron su antígeno. Así, antígenos administrados por vía oral generan LT de memoria/efectores que expresan altos niveles de los receptores de homing para mucosa intestinal, la integrina a4b7 y el receptor de quimioquina CCR9. Nosotros encontramos que el tropismo de LT a intestino es determinado por las células dendríticas (DC) de placas de Peyer (PP). Estimulación ex vivo de LT vírgenes transgénicos para el TCR por DC de PP pulsadas con el antígeno, pero no de ganglios linfáticos o bazo, inducen altos niveles de a4b7 y CCR9 (respuesta a TECK). Consistente con esto, LT activados con DC de PP migran dramáticamente más a mucosa de intestino delgado. En contraste, otras moléculas de adhesión, marcadores de activación, y actividad funcional fueron inducidas en forma equivalente en los LT por DC de todos los órganos linfoides estudiados. Estos resultados establecen que DC de PP confieren a los LT especificidad para el homing a mucosa intestinal, capacitándolos entonces para migrar al tejido periférico asociado a este órgano linfoide. Nuestros resultados identifican por vez primera un elemento tisular responsable de la determinación del potencial de homing tejido-específico en LT, y establecen un nuevo rol para las DC en la "educación" de LT.

 


UTILIZACIÓN DE CÉLULAS DENDRÍTICAS CARGADAS CON EXTRACTOS TUMORALES PARA EL TRATAMIENTO INMUNOTERAPÉUTICO DEL MELANOMA.
(Utilization of dendritic cells primed with tumoral extracts in the immunotherapy of melanoma). Flavio Salazar Onfray, Programa Disciplinario de Inmunología, Instituto de Ciencias Biomédicas. Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago.


En Chile aún no se ha intentado la utilización de la inmunoterapia como tratamiento alternativo en melanoma. Es sabido que la quimio y la radioterapia tienen sólo efectos paliativos en este tumor, por lo que el pronóstico de estos pacientes es sumamente pesimista. En colaboración con grupos clínicos, estamos desarrollando un protocolo adaptado a nuestra realidad, permitiendo una combinación de alta tecnología y bajos costos. La inducción de una respuesta mediada por linfocitos T contra las células tumorales requiere de una presentación antigénica en un contexto celular especial dado por las células dendríticas (DC). Altas cantidades de DC pueden obtenerse in vitro a partir de monocitos de PBMC estimulados con GM-CSF e IL-4. Estas células poseen una baja expresión de MHC y otras moléculas coestimuladoras como CD86 y CD40, pero están extremadamente bien equipadas para capturar antígenos. Los pacientes con melanoma en etapa II y IV son sometidos a leucaféresis. Monocitos de sangre periférica son cultivados durante 7-9 días en presencia de GM-CSF e IL-4. El día 9 las DC son pulsadas con extractos tumorales provenientes de líneas de melanoma alogénicas y luego maduradas con TNF-alfa durante 12 horas. Aproximadamente 5x106 DC maduras pulsadas con extractos de melanoma son inyectadas subcutáneamente. Luego de la cuarta dosis se evalúa el estado general del paciente mediante ensayos in vivo de hipersensibilidad de tipo retardada (DTH), además de ensayos in vitro que incluyen, la detección de precursores CTL anti melanoma mediante ELISPOT, producción de citoquinas, ensayos de proliferación, y ensayos de cuantificación de la relación CD4/CD8 mediante citometría de flujo.
Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1000888

 

 

LÍNEAS DE INVESTIGACIÓN

 

1. Dr. Angel Oñate
2. Dr. Flavio Salazar
3. Dra. M. Antonieta Guzmán
4. Dr. Rosario Billetta
5. Dr. Mario Rosemblatt
6. Dr. Arturo Ferreira
7. Dr. J. Carlos Aguillón
8. Dr. Eduardo Parra


ANÁLISIS DE LA RESPUESTA INMUNE INDUCIDA POR VACUNAS ADN PARA Brucella abortus.
(Analysis of the immune response induced by DNA vaccines against Brucella abortus). Oñate, A., Andrews, E. y Folch, H.*. Departamento de Microbiología, Laboratorio de Inmunología, Facultad de Ciencias Biológicas, U. de Concepción. Concepción. *Instituto de Inmunología, Facultad de Medicina, U. Austral de Chile. Valdivia.


La brucelosis es una enfermedad de alta incidencia y prevalencia en el mundo, causante de importantes problemas de salud humana y animal. Además, el agente etiológico representa un buen modelo para el estudio de vacunas contra infecciones bacterianas de vida intracelular. La necesidad de contar con vacunas de avanzada tecnología que no ofrezcan riesgo para los animales inmunizados, protectoras, de fácil manejo y administración son es cada día mayor. Nuestro interés esta enfocado hacia el estudio de la inmunidad inducida en ratones y posteriormente en bovinos, por la vacunación con secuencias nucleotídicas de B. abortus, incorporadas a vectores con capacidad de replicarse en células eucarioticas (vacunas genéticas). En la actualidad estamos trabajando con los genes de dos proteínas de Brucella, con demostrada capacidad protectora, los cuales se han ligado a un vector de expresión eucariotico (pcDNA3), construcción que se está utilizando para la inmunización de ratones. Se han obtenido resultados promisorios de linfoproliferación, anticuerpos y protección para uno de las construcciones, el de la proteína Cu/Zn superóxido dismutasa (Cu/Zn SOD), subclonadas en pCDNA3. Dentro de la misma línea, se iniciarán los estudios pertinentes en bovinos, evaluando respuesta inmune humoral y celular, analizando el rol de las células Tgd reactivas, sub población importante dentro de los linfocitos circulantes de los bovinos.
Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1010851.

 


EL SISTEMA INMUNE: POTENTE HERRAMIENTA EN LA LUCHA CONTRA EL CÁNCER. (The immune system: a powerful weapon in the struggle against cancer). Salazar-Onfray, F. Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina. Universidad de Chile. Santiago.


Los linfocitos T reconocen antígenos asociados a tumores procesados y presentados en asociación con las moléculas MHC. La gran mayoría de los antígenos asociados a tumor (TAA) son péptidos derivados de proteínas expresadas, no solamente en las células de tumor, sino que también en el tejido normal que les dio origen. Es así como en melanoma existen antígenos como MART-1, gp100, tirosinasa, derivados de proteínas involucradas en la síntesis de melanina y expresadas tanto en el tumor como en los melanocitos. Nosotros hemos identificado y analizado la distribución de un nuevo antígeno de melanoma, el Receptor Melanocortina 1 (MC1R). Utilizando distintas técnicas hemos evaluado la expresión de este receptor en diferentes tejidos y hemos demostrado la existencia de linfocitos T citotóxicos dirigidos contra este antígeno. La paradoja entre la existencia de células anti-tumorales y la progresión sistemática de la enfermedad, sugieren la existencia de mecanismos mediados por el tumor para evadir la respuesta inmune. Estas estrategias van desde la secreción por parte del tumor de factores inmunoinhibidores, hasta mutaciones de moléculas relacionadas con la presentación antigénica, especialmente las moléculas MHC. En estudios recientes hemos descrito el papel que juega la citoquina inmunoinhibidora IL-10 en la regulación de la presentación antigénica y en el escape de los tumores al reconocimiento por el sistema inmune. La comprensión más acabada de los mecanismos inmunológicos involucrados en la respuesta anti-tumoral permitirá el desarrollo de inmunoterapias anti cáncer como tratamientos alternativos.
Financiamieno: Proyecto FONDECYT 1000888.

 

PROYECTO: "CENTRO DE ALERGIAS". SECCION INMUNOLOGIA, HOSPITAL CLINICO UNIVERSIDAD DE CHILE. (The "Allergy Center" project of the Immunology Section of the Universidad de Chile Hospital). Guzmán, M.A. Unidad de Inmunología, Depto. De Medicina, Hospital José Joaquín Aguirre, Universidad de Chile. Santiago.


Este proyecto, tiene fines asistenciales, docentes y de investigación, y consta básicamente de la creación de un centro de estudios de patologías alérgicas, en el mencionado centro asistencial.
Los aspectos básicos que estudiaremos son los siguientes:
- Alergia a fármacos
- Alergias inhalatorias y cutáneas
- Alergia alimentaria
- Alergia por picadura de insectos, etc.
Para ello, implementaremos técnicas diagnósticas, in vivo e in vitro, que incluirán test de provocación con fármacos, cuando ello corresponda, para lo cual estamos definiendo, con los distintos grupos de especialistas interesados en el tema, los mejores protocolos a desarrollar. Además efectuaremos reintroducción de alimentos, según protocolo, en pacientes con alergias alimentarias seleccionadas, como la alergia a proteína de leche de vaca, y desarrollaremos además tratamientos de inmunoterapia, según las pautas internacionalmente recomendadas. Damos a conocer esta iniciativa en el importante grupo de especialistas en inmunología a los que estas patologías atañan directamente.


USE OF FUNCTIONAL GENOMICS AND ANTIGEN ENGINEERING FOR VACCINE DEVELOPMENT AGAINST MICROBIAL PATHOGENS. Billetta, R., Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago.


Advance in Structural Genomics has provided access to complete genome sequences of many pathogens and their vertebrate hosts. However the impact of such information will have to meet the ultimate challenge of assigning function to these isolated genes. This emerging area has been referred to as Functional Genomics and its application in the field of "vaccine design" has prompted the development of techniques aiming at the screening of a large number of candidates for their ability to stimulate an immune response. For the prevention of microbial infections, we aim at defining novel gene-antigens suitable as potential vaccines using a newly developed version of the Expression Library Immunization (ELI) screening method. Our modified ELI approach entails the use of in vivo genetic immunization with cDNA expression libraries, followed by the direct assessment of the resulting immune response using standard immunological assays. Another relevant step in vaccine development is the procedures used for the delivery of the selected genes by DNA immunization. Genetic immunization is influenced by many factors and antigen cellular location and its delivery-site certainly have quantitative and qualitative effects on the resulting immune response. We will discuss data about the induction of in vivo immune response using our modified ELI approach and on the isolation of novel gene-antigens able to induce antigen-specific immune response. Also, we will report on the use of novel techniques of antigen engineering and delivery aiming at improving the immunological potency, of anti-malarial immune response using DNA vaccines. Methods based on ELI screening assays and novel antigen-engineering and gene delivery strategies may offer a systematic approach towards vaccine development to various infectious microorganisms.
Financiamiento: Proyecto FONDECYT Nº 1990914.

 

MECANISMOS CELULARES Y MOLECULARES QUE DETERMINAN EL HOMING DE LINFOCITOS T E IDENTIFICACIÓN DE LOS MECANISMOS MOLECULARES QUE REGULAN LA EXPRESIÓN DE LOS ANTÍGENOS DE HISTOCOMPATIBILIDAD DE CLASE II. (Cellular and molecular mechanisms that determine T-lymphocyte homing and the identification of molecular mechanisms regulating the expression of Class II histocompatibility antigens). Rosemblatt, M1,2, Bono, MR1. 1Facultad de Ciencias, U. de Chile. 2Fundación Ciencia para la Vida. Santiago.


Dos líneas de investigación: A) Inmunología fundamental y B) Aplicaciones. A) Las líneas de Inmunología básica se realizan en la Facultad de Ciencias bajo un Proyecto Fondecyt de Líneas Complementarias (MR Bono, IR). Estas son: 1) Mecanismos de homing en linfocitos T (R. Mora, P. Escobar, C. Ruiz), 2) Sistemas de transducción de señales inducidos en células endoteliales columnares por adhesión linfocitaria (L. Reyes), 3) Mecanismos moleculares que regulan expresión de moléculas de MHC II (C. Cortés, P. Vargas), 4) Intervención de la adhesión linfocitaria en la regulación de la expresión de MHC II en el endotelio (L. Reyes, L. Vargas). B) En el área de aplicaciones se realizan en la Fundación Ciencia para la Vida y son financiados por el Instituto Milenio de Biología Fundamental y Aplicada. Estos son: 1) Con la Fundación Chile y Cobequid, generación de vacunas genéticas contra la Piscirickettsia Salmonis. 2) Con el ISP, estudios del virus Hanta para la generación de anticuerpos monoclonales para diagnóstico rápido y la neutralización del virus. 3) Con el Dr. Alfonso González, mecanismos de adhesión de linfocitos-endotelio en la artritis reumatoídea y el efecto de las drogas anti-inflamatorias (Rodrigo Naves), 4) Con los Dres. Alberto Fierro y Jorge Morales, Unidad de Trasplante, Clínica las Condes, efectos de drogas inmunosupresoras sobre la expresión de receptores de adhesión y de citoquinas y otras moléculas relacionadas con el rechazo al injerto (D. Sauma).

 


CALRETICULINA DE Trypanosoma cruzi: MODULACIÓN DE INTERACCIONES HUÉSPED /PARÁSITO.
(Trypanosoma cruzi calreticulin: role in the modulation of host/parasite interactions). Ferreira, A. Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago.


Hemos identificado, clonado, secuenciado y expresado el gen que codifica calreticulina de T. cruzi (TcCRT). Por otra parte, CRT humana (HuCRT) es muy pleiotrópica: Capta calcio, es chaperona de tipo lectina, participa en adhesión celular, es autoantigénica, inhibe la angiogénesis y crecimiento tumoral, regula la actividad lítica de perforinas, participa en la fagocitosis de células apoptóticas y, relevante en nuestra línea de investigación, se une a C1q y MBL, inhibiendo la activación del complemento. Dadas las homologías estructurales entre TcCRT y HuCRT, investigamos 4 aspectos relevantes a la enfermedad de Chagas: 1: Inmunomodulación: Si TcCRT interactúa con C1q y/o MBL, puede interferir con la activación del complemento. Además, podría interferir con la capacidad de C1q para unir complejos inmunes, afectando el procesamiento de éstos, posiblemente patogénicos en la enfermedad de Chagas; 2: Inmunización: Si TcCRT recombinante (rTcCRT) y/o el gen que la codifica, inducen inmunidad en ratones, ésta pudiera ser protectora, mediada por linfocitos T citotóxicos y/o por anticuerpos (Acs) que podrían bloquear la unión de C1q y MBL a TcCRT; 3: Diagnóstico: Si rTcCRT es un Ag inmunodominante, debiera ser reconocido por la gran mayoría, sino todos, los sueros provenientes de individuos infectados y, 4: Autoinmunidad: Como TcCRT induce Acs específicos en la gran mayoría de los individuos infectados, es posible que estos Acs reaccionen cruzadamente con HuCRT, con complicaciones autoinmunes e implicancias inflamatorias.
Financiamieno: FONDECYT 1010930; SAREC/SIDA/Sweden .

 

 

VARIABILIDAD EN LA EXPRESIÓN DE FACTOR DE NECROSIS TUMORAL Y PATOLOGÍA. (Variability of tumor necrosis factor expression and its role in pathology). Aguillón, J.C. Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM., Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago.


El factor de necrosis tumoral (TNF) es una citoquina pleiotrópica, con actividades inmunológicas y neuroendocrinas. Los niveles de TNF séricos y de expresión in vitro poseen alta variabilidad entre los individuos, demostrando ésta tener un origen en que participarían genes asociados al complejo mayor de histocompatibilidad y el polimorfismo genético del promotor de TNF. Recientemente, demostramos que aún cuando el patrón de secreción de TNF, in vivo y en cultivo ex vivo de sangre completa varía inter-individualmente, no habría un comportamiento cíclico durante el día. La producción de TNF está regulada a niveles transcripcional, post-transcripcional y traduccional, afectando a la primera el polimorfismo de su gen mediante modificación de la capacidad de unión de factores de transcripción específicos. En el promotor del gen de TNF existen varios polimorfismos, siendo el más importante el _308 (TNF-308), con una sustitución de G por A. En estudios in vitro, el polimorfismo denominado TNF2, conduce a una mayor transcripción del gen de TNF que el alelo silvestre TNF1. Además, se le ha relacionado con un aumento de la susceptibilidad a varias enfermedades. Así, estudiamos la asociación entre el polimorfismo TNF-308, la expresión de TNF en cultivo y la presencia de Artritis Reumatoide y Periodontitis asociada a Diabetes tipo 1. En ambos casos, hemos encontrado que el polimorfismo TNF-308 no estaría asociado, con la presencia de las patologías estudiadas, ni con un incremento de TNF circulante o la capacidad de producir la citoquina en el sistema de cultivo ex vivo.
Financiamieno: Proyecto FONDECYT 1990936.

 

 

VIAS DE ACTIVACION DEL LINFOCITO T: COESTIMULACIÓN VIA B7-1, LFA-3 Y ICAM-1 CREAN PERFILES DE ACTIVACIÓN ÚNICOS EN LAS CELULAS T. (T-lymphocyte activation pathways: costimulation by B7-1, LFA-3 and ICAM-1 results in unique activation profiles in T cells). Parra, E. Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago.


Los linfocitos T requieren como mínimo dos señales para ser activados a proliferar y a producir citoquinas. La señal uno es mediada a través de la interacción del TCR con su ligando fisiológico MHC/Ag situado sobre la célula presentadora de antígeno. La señal dos es provista por la interacción de receptores presentes en la superficie de las células T con sus co-receptores presentes en las superficie de la APC. Entre los receptores más importantes para la activación de los linfocitos T se encuentran las CD28, CD2, LFA-1, CD40L. Estas moléculas reconocen y se asocian a sus respectivos ligandos B7, LFA-3, ICAM-1 y CD40 presentes en las APC. Nosotros hemos usado un modelo fisiológico basado en el requerimiento de las dos señales mínimas que imita la presentación natural del Ag a las células T a través de presentar el Superantigen "SEA" en células CHO genéticamente modificadas para expresar el MHC II humano (HLA-DR) en su superficie en conjunto con moléculas coestimuladoras humanas, tales como B7-1, LFA-3 y ICAM-1. Usando este sistema nosotros demostramos que la expresión de las moléculas adhesivas son requeridas para inducir una eficiente activación de las células T, tanto a nivel adhesivo, en la inducción de las quinasas ERK-2, JNK-1 y p38 así como también a nivel de factores nucleares y regulación transcripcional. La suma de nuestros resultados sugiere fuertemente que las diferentes vías de activación ejercen diferentes y múltiples efectos en la activación de las células T determinando el perfil de una respuesta inmunológica.

 

P O S T E RS

1. Tamara Pérez
2. Mónica Kurte
3. Marcelo López
4. Jimena Cuenca
5. Sara Navarro
6. Marcelo González
7. Edilia Andrews
8. Mónica Silva
9. Jesica Salinas
10. K. Hidalgo
11. Leda Guzmán
12. Adam Aguirre
13. Nevenka Juretic
14. Alejandro Escobar
15. Claudio Pérez
16. Pamela Luttges
17. Soledad Silva

RECEPTORES FcgIIA EN PACIENTES CHILENOS PORTADORES DE LUPUS ERITEMATOSO SISTÉMICO (LES). (FcgIIA receptors in Chilean systemic lupus erythematosus (SLE) patients). Wainstein, E.*, Carrión, F. **, Figueroa, F. **, Foster, C.*, Guzmán, L.*, Mancilla, C. *, Martínez, M. ***, Massardo, L.***, Neira, O.*, Pérez, T.* y Valezuela, V. **. * Reumatología Hospital Salvador - U. de Chile; ** Medicina U. De los Andes; *** Reumatología U. Católica. Santiago.


En el LES se ha descrito un defecto en el cleareance de complejos inmunes. Esta alteración se ha correlacionado con un aumento de la frecuencia génica del alelo R131 del receptor para fragmento Fc de inmunoglobulinas; FcRgIIA, lo que confiere una menor afinidad para IgG2, y consecuentemente favorecería el depósito de inmunoglobulinas. MÉTODOS: con el fin de estudiar la distribución génica de este alelo, heredado codominantemente, se reclutaron 59 pacientes con LES y 39 controles. Se determinó el polimorfismo alélico, utilizando una PCR alelo específica y se correlacionó con los antecedentes clínicos de los pacientes. RESULTADOS: La distribución de alelos en pacientes lúpicos fue: 18, 20 y 21 ( H/H 131,H/R 131,R/R 131 respectivamente) y la de controles: 12,20 y 7 ( H/H 131, H/R 131,R/R 131).No hubo diferencias estadísticamente significativas entre los 2 grupos (chi2), sin embargo existe una tendencia a una mayor expresión del alelo R131. Se analizaron datos clínicos en 43 pacientes, no encontrando diferencias entre los pacientes con y aquéllos sin compromiso renal (5,7,8 versus 5,10,8).CONCLUSIÓN: Contrariamente a reportes previos, no logramos demostrar diferencias en la distribución de alelos del gen de FcgRIIA en la población lúpica chilena. Sin embargo existe un incremento en la frecuencia del alelo R 131. El número limitado de pacientes estudiados puede haber contribuido a estos resultados.

 

IT9302, UN PÉPTIDO HOMÓLOGO AL DOMINIO FUNCIONAL DE INTERLEUQUINA 10 (IL-10) INHIBE LA EXPRESIÓN DE LA CADENA ALFA DEL MHC-I Y DE LAS MOLÉCULAS TAP EN CÉLULAS DE MELANOMA HUMANO. (IT9302, an homologous peptide to the functional domain of interleukin 10 (IL-10 ) inhibits the expression of the MHC-I alpha chain and TAP molecules in human melanoma cells). Kurte, M.*, Levitskaia, J.#, Aguirre, A.*, López, M.*, Petersson, M.#, Charo, J.#, Kiessling, R.# y Salazar-Onfray, F*. * Programa de Inmunología, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Santiago, Chile. # Departamento de Oncología y Patología, Radiumhemmet, Hospital Karolinska, Estocolmo, Suecia.


Las células tumorales poseen numerosos mecanismos para evadir el sistema inmune. Uno de estos mecanismos es la producción de factores inmunosupresores como interleuquina 10 (IL-10). Tumores tratados con rIL-10 son más resistentes a la lisis por CTL y más sensibles a las NK, lo cual puede explicarse por una menor expresión de MHC-I en la superficie celular y/o una disminución en TAP1/2. Se ha visto que un pequeño péptido sintético, IT9302 (AYMTMKIRN); homólogo al dominio funcional de IL-10, conserva varias de sus propiedades. Hemos observado que IT9302 es capaz de inhibir de manera dosis dependiente la expresión de MHC-I en diferentes líneas de melanoma. Mediante técnicas de RT-PCR y westernblot, observamos que IT9302 inhibe en más de un 60% la expresión de la cadena alfa MHC-I y también las moléculas TAP1/2, no así de LMP2, en melanomas humanos. Finalmente, hemos visto que melanomas tratados con IT9302 se vuelven más sensibles a la lisis mediada por células LAK. Estos resultados demuestran que un péptido sintético derivado de IL-10 es capaz de inhibir la expresión de moléculas involucradas en la presentación antigénica como MHC-I y TAP1/2 en células de melanoma humano, lo que podría constituir un importante mecanismo de evasión de los tumores.

 

POLIMORFISMO DEL PROMOTOR DEL FACTOR DE NECROSIS TUMORAL ASOCIADO A ARTRITIS REUMATOIDE. (Tumor necrosis factor promoter polymorphism associated to rheumatoid arthritis). Cuenca, J.1, Ferreira, L.1,3, Pérez, C.1, Aguirre, A1, Cuchacovich, M.3, Soto, L.3, Schiattino, I.2 y Aguillón, J.C.1 1Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM. 2Escuela de Salud Pública, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. 3Servicio de Reumatología, Hospital J. J. Aguirre. Santiago.


El TNF posee un importante rol en la patogénesis de artritis reumatoide (AR). De los polimorfismos que afectan la región promotora del gen de TNF, la transición de guanina (G) por adenina (A) en la posición _308, genera los alelos TNF1 (G) y TNF2 (A). Estudios in vitro e in vivo correlacionan la presencia del alelo TNF2, con una elevada expresión de TNF y con la severidad de algunas enfermedades, respectivamente. El objetivo del presente estudio es determinar la asociación entre el polimorfismo _308, la expresión de TNF estimulada con LPS, en un cultivo ex vivo y la presencia de AR. Para este propósito se reclutaron 79 pacientes y 35 individuos sanos, como controles. El alelo TNF2 estuvo presente en un 19% de los pacientes AR y 11% de los controles. En ambos grupos, se observó una alta variación interindividual de los niveles de TNF séricos y los inducidos con LPS. La concentración de TNF en suero, fue 6 veces mayor en los pacientes que en los controles (p= 0.000). Los niveles espontáneos e inducidos de la citoquina en estudio, no fueron estadísticamente distintos al comparar pacientes y controles. En conclusión para pacientes AR y controles, el polimorfismo _308 de la región promotora del TNF no estaría asociado con la presencia de AR, ni con el incremento de TNF circulante o la capacidad de producir TNF en un sistema de cultivo ex vivo. Otros factores podrían ser importantes para determinar la relación de estos parámetros con artritis reumatoide.
Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1990936.

 

CARACTERIZACION MOLECULAR DE ENFERMEDAD GRANULOMATOSA CRONICA (EGC). INFORME PRELIMINAR. (Molecular characterization of chronic granulomatous disease (CGD). Preliminary report). Navarro, S.1, Cornejo, M.1, Quezada, A.2, Navarrete, C.3, Gonzalez, P.4 , Lüttges, P1. 1 Laboratorio de Inmunología, Escuela de Medicina.Universidad de Valparaíso. 2 Servicio de Pediatría Sur, Hospital Exequiel González Cortez.Santiago. 3 Hospital Roberto del Río, Santiago. 4 Servicio de Pediatría, Hospital Gustavo Fricke, Viña del Mar.


La EGC es causada por defectos en el complejo NADPH oxidasa de los fagocitos. Las alteraciones en cualquiera de los 4 componentes del sistema enzimático conducen a infecciones bacterianas y fúngicas recurrentes. La presunción de EGC puede ser confirmada por el estudio molecular de dicho complejo enzimático. Se estudiaron 22 personas (entre pacientes con sospecha de EGC y familiares directos). Como screening se realizó la prueba de reducción de NBT para descartar a los individuos con el complejo NADPH oxidasa normal. A los pacientes con reducción de NBT disminuida se les extrajo DNA genómico y se realizó PCR para los exones 10 de la gp91 phox y 2 de la p47 phox utilizando los partidores respectivos. Los productos de PCR se analizaron mediante SSCP. Los resultados muestran 2 pacientes de sexo masculino con alteración en el exón 2 de la p47 phox, uno de los cuales ya fue secuenciado, presentando una delección homocigótica del dinucleótido GT al inicio de este exón. Otros 2 pacientes de sexo masculino presentaron alteración en el exón 10 de la gp91 phox y 4 mujeres mostraron una alteración distinta (posibles portadoras) para este mismo exón. El estudio molecular permite entregar un diagnóstico definitivo a los pacientes con sospecha de EGC así como un adecuado consejo genético.
Financiamieno: Ingresos Laboratorio Inmunología.

 

CARACTERIZACIÓN DE UN NUEVO PÉPTIDO DEL TIPO DEFENSINA CON ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA EN Mytilus chilensis. (Characterization of a new peptide of the defensin type, with antibacterial activity, in Mytilus chilensis). Díaz, M., López, E., González, M., Monzón, H., Marshall, S. y Arenas, G.. Laboratorio de Genética e Inmunología Molecular. Instituto de Biología. Universidad Católica de Valparaíso. Av. Brasil 2950. Valparaíso.


Diversos péptidos con potente actividad antimicrobiana han sido identificados en numerosos organismos vertebrados e invertebrados. Basados en esta información este trabajo pretende: a) purificar, caracterizar y evaluar la actividad antibacteriana de péptidos de bajo peso molecular; b) Clonar secuencias nucleotídicas que codifican para péptidos antimicrobianos de hemocitos de M. chilensis. Se realizó una extracción ácida a un homogenizado de hemocitos. La fracción ácida se sometió a extracción en fase sólida en cartuchos Sep-pak C18 y elución con 40% de acetonitrilo (ACN). Esta última fracción fue liofilizada y purificada por HPLC en una columna C18. A cada fracción se le evaluó su actividad antibacteriana contra bacterias gram _ y +. La fracción correspondiente al 32% de ACN del gradiente de elución, presentó actividad contra V. anguillarum, V. alginolyticus, M. luteus y S. epidermidis. Esta fue analizada en geles Tris-Tricina-Urea detectándose la presencia de dos bandas de aproximadamente 6,5 y 4 kDa. Mediante amplificación por PCR o RT-PCR, empleando partidores diseñados a partir de regiones conservadas de defensinas de invertebrados, se logró una banda de 120-130 pb cuya secuencia y posterior traducción a aminoácidos, permitió identificar este producto como una nueva defensina con un elevado nivel de similitud con otras descritas. La evidencia genética obtenida permite proponer una identidad como defensina a los péptidos obtenidos desde hemocitos de M. chilensis.

 

 

VACUNA ADN PARA SUPEROXIDO DISMUTASA DE Brucella abortus RB51 PROTEGE RATONES BALB/c. (A DNA vaccine against superoxide dismutase from Brucella abortus RB51 protects Balb/c mice). Andrews, E., Céspedes, S., Cabrera, A., Menacho, C., Folch, H.*, y Oñate, A., Dpto. de Microbiología. Laboratorio Inmunología Molecular. Universidad de Concepción, Concepción. Instituto de Inmunología *Universidad Austral de Chile, Valdivia.


Una respuesta inmune protectora frente a la infección por Brucella abortus dependerá del adecuado inmunógeno que estimule la respuesta inmune celular. En el estudio de antígenos proteicos a utilizar como vacuna alternativa, se destaca la Superóxido dismutasa Cu/Zn (SOD Cu/Zn) de B. abortus, que ha demostrado proteger a ratones. Actualmente, se evalúa la vacunación con plásmidos ADN insertados con genes de antígenos relevantes. En este trabajo, hemos evaluado inmunológicamente la administración, vía intramuscular, de plásmidos con origen de replicación eucariótico (pCDNA3), que portan el gen de SOD Cu/Zn (pCDNA/SOD) a ratones BALB/c. El vector recombinante obtenido de cultivos de E. coli trasformadas, fue purificado por sistemas de columnas de purificación Concert. Se estudió la respuesta inmune celular mediante ensayos de linfoproliferación de ratones vacunados y la capacidad de protección frente al desafío con la cepa patógena de B. abortus 2308. Los resultados obtenidos nos muestran que la administración a los ratones de los plásmidos con el gen para la SOD Cu/Zn, induce proliferación de linfocitos esplénicos cuando éstos son enfrentados a proteínas totales de Brucella y SOD recombinante, comparados con animales que fueron vacunados con el plásmido sin ese gen. También se pudo demostrar que la vacunación con pCDNA/SOD, induce producción de IgG2a y protege a los ratones frente al desafio con la cepa virulenta B. abortus 2308.
Financiamieno: Proyectos Fondecyt 1010851.

 

 

INMUNIZACIÓN GENÉTICA MEDIANTE "SOMATIC-TRANSGENE-TARGETED-EXPRESSION" CONTRA LA PROTEÍNA DEL CIRCUMSPOROZOÍTO DE MALARIA MURINA. (Genetic Immunization by "Somatic-Transgene-Targeted Expression" against the Circumsporozoite protein of murine malaria). Silva, M., Lanza, P., Puga, G., Ferrer, P. y Billetta, R. Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago.


La "Site-Directed-Immunogenesis" (SDI), es una estrategia de inmunización genética, que consiste en la entrega del gen que codifica la proteína antigénica directamente a los órganos linfoides. Siguiendo esta estrategia experimental, se construyó un vector "cassette" de entrega a células B, CS/pCASSETTE, con el gen de la proteína del circumsporozoíto de Plasmodium yoelii (PyCSP) bajo control de un promotor de inmunoglobulinas. Esta técnica, llamada "Somatic-Transgene-Targeted-Expression" (STTE) busca dirigir transcripcionalmente la expresión de proteínas exógenas en las células B mediante inmunización intra-esplénica (i.s.). La proteína CS es el antígeno de la malaria mejor caracterizado en las especies de Plasmodium y representa el principal blanco de la respuesta humoral del huésped vertebrado en la fase de infección del parásito. Distintas líneas celulares fueron transfectadas con la construcción CS/pCASSETTE, comprobándose la expresión diferencial del transgen a nivel de mRNA, además de la expresión y secreción de la proteína PyCSP. Se inmunizaron ratones mediante STTE y posteriormente se estudió la respuesta inmune humoral generada, demostrándose que la técnica de inmunización genética mediante STTE a células B, podría ser aplicada para la obtención de respuesta inmune humoral contra PyCSP. Por otra parte, no se observó un efecto potenciador de la respuesta inmune al co-inyectar el gen de GM-CSF.
Financiamieno: Proyecto FONDECYT-Rosario Billetta-1990914

 

PRODUCCIÓN DE CITOQUINAS INTRACELULARES EN PREECLAMPSIA. (Production of intracellular cytokines in the course of preeclampsia). Salinas, J.1, Iglesias, M.1, Fernández, J.2, Sepúlveda, C.1, Osorio, A.3. 1 Unidad de Inmunología, Hospital Clínico U. de Chile. 2 Programa Virología ICBM, Facultad de Medicina, U. de Chile. 3 Alumna de Medicina, U. de Chile.


La preeclampsia, hipertensión inducida por el embarazo, se presenta después de las 20 semanas de gestación, y es causa del 8% de las muertes perinatales. En su etiología se ha planteado una activación exagerada de la inmunidad innata, con aumento de IL-12 y TNF-a responsables del daño endotelial. Las células NK productoras de TNF-a no han sido evaluadas en este cuadro. Objetivos: Describir inmunofenotipo y medir citoquinas intracelulares por citometría de flujo en células NK de sangre periférica. Metodología: Estudio de casos y controles, en pacientes con preeclampsia (PE), embarazadas normales (EN) y no embarazadas (N). Posterior a cultivo corto y permeabilización de linfocitos, se midieron citoquinas intracelulares por citometría de flujo (análisis de 2 colores FACscan). Resultados: Según test de Kruskall-Wallis, la mediana del nº de células NK y NKT en los tres grupos, no presentaron diferencias estadísticamente significativas. La síntesis de TNF-a basal en las células CD56+ fue mayor en PE, rango = 0,3-27% (p< 0,0384). Post estimulación sólo hubo diferencias en los linfocitos totales (p < 0,0185): PE = 4,8% (0-35%), EN = 35,8% (10,5-69%) y N = 12,5% (0-18,8%). Discusión: Estos resultados confirman la mayor producción de TNF-a en embarazadas, ya descrita. El aumento basal de su síntesis en PE es concordante con la activación de la inmunidad innata postulada; esperamos reclutar un mayor número de pacientes para explicar su falta de incremento en PE, luego de la estimulación.
Financiamieno: Proyecto DID - Universidad de Chile

 

 

ESTUDIO DE LA CITOTOXICIDAD DE LAS CÉLULAS NK EN LA PRE-ECLAMPSIA: EFECTO IN VITRO DE LPS Y CITOQUINAS. (Cytotoxicity of NK cells during preeclampsia: in vitro effect of LPS and cytokines). Hidalgo, K.1, Miranda, D. 1, Salinas, J. 2, Iglesias, M. 2, Sepúlveda, C. 2 & Puente, J. 1Laboratorio de Inmunobioquímica. Depto. de Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas.Unidad de Inmunología. Hospital Clínico. Universidad de Chile. Santiago.


La preeclampsia es una patología del embarazo en la que se ha observado un aumento de citoquinas pro-inflamatorias circulantes. Las células NK, se caracterizan por la citotoxicidad frente a una variedad de células y son estimuladas por diversos mediadores. Estudiamos la citotoxicidad basal de células sanguíneas mononucleares (CMN) y estimulada en cultivo por LPS (lipopolisacárido bacteriano) y las citoquinas IL-12 e IL-15 en muestras normales (N), con embarazo normal (EN) y con diagnóstico de pre-eclampsia (PE). Los cultivos de CMN se efectuaron por 72 h en presencia de LPS (E.coli, 0127:B8) 0,1_10,0 mg/mL; IL-12, 3,0 ng/mL; IL-15, 15 ng/mL. La citotoxicidad se determina utilizando CMN y células K-562 radiomarcadas con 51Cr. Los resultados se expresan como % de Lisis específica. La citotoxicidad basal de los grupos N, EN y PE no presenta diferencias significativas. La citotoxicidad del grupo N es altamente estimulada por LPS y por las citoquinas, especialmente la mezcla, IL-12 + IL-15. Sin embargo, en resultados preliminares, las muestras del grupo PE no son estimuladas por LPS y el efecto de las citoquinas es ligeramente menor a lo observado en el grupo N. Esta acción podría deberse al fenómeno de inactivación por la estimulación de la funcionalidad de las células NK, descrita para los linfocitos en condiciones normales y patológicas.
Financiamieno: Proyecto SAL-15, DID - Universidad de Chile.

 

 

DETECCIÓN DE CLONALIDAD DE LAS CÉLULAS B EN INFILTRADOS LINFOCITARIOS EN GLÁNDULAS SALIVALES LABIALES DE PACIENTES CON SÍNDROME DE SJÖGREN. (B-cell clonality detection in lymphocytic infiltrates of labial salivary glands in patients with Sjögren's syndrome). Guzmán, L.1, Aguilera, S.2 y Castillo, D.1 (1) Instituto de Salud Pública, (2) Clínica Indisa. Santiago.


El Síndrome de Sjögren (S) es una enfermedad autoinmune caracterizada por: infiltración linfocítica de las glándulas salivales y lagrimales, los pacientes presentan sicca-queratoconjuntivitis y xerostomia., hipergamaglobulinemia, altos niveles sanguíneos de autoanticuerpos Ro/La y factor reumatoideo (IgMk). Puede presentarse solo (primario, Sp) o asociado a otras enfermedades como Artritis Reumatoidea (secundario, Ss). Sobre un 10% de los pacientes con Sp, desarrollan linfoma de non-Hodgkin, y un 20% linfoma de tipo MALT. Los infiltrados linfocitarios en las glándulas salivales labiales (GSL) de estos pacientes, contienen linfocitos T (70%) y linfocitos B (20%). Se ha demostrado que la tercera región de complementariedad (CDRIII) de los genes de la cadena pesada de la inmunoglobulina (IgH), exhiben un reordenamiento clonal de sus genes. La clonalidad de las células B fue determinada amplificando por PCR la región CDRIII de la cadena pesada de la Ig, usando primers homólogos a los segmentos V y J de la IgH. Se observó que 12/13 pacientes con Sp presentaron monoclonalidad de las células B en biopsias de GSL y un 2 % de ellos una translocación cromosómica 14:18. Pacientes con Ss presentaron monoclonalidad y ausencia de translocación 14:18. Estos resultados confirman la alta prevalencia de monoclonalidad en lesiones linfoepiteliales y su predisposición a un linfoma. Además, estos resultados muestran la utilidad del PCR para identificar monoclonalidad de las células B, en S, como en otros desórdenes inmunoproliferativos.

 

 

EL RECEPTOR DE MELANOCORTINA 1 (MC1R) SE EXPRESA EN LA MAYORÍA DE LOS MELANOMAS Y EN BAJOS NIVELES EN TEJIDOS NORMALES, INCLUYENDO CÉLULAS DENDRÍTICAS INMADURAS. (Melanocortin 1 receptor (MC1R) is highly expressed in melanomas and at low levels in normal tissues, including immature dendritic cells). Aguirre, A., Escobar, A., Pérez, C., Korenblit, C., López, M. y Salazar-Onfray, F. Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago.


MC1R se describió originalmente en melanomas y melanocitos. Posteriormente, mediante RT-PCR, se demostró la presencia del RNAm en otros tejidos como hipófisis y testículo. El uso potencial de MC1R como blanco en inmunoterapia depende de la expresión de este receptor en tejidos malignos versus normales, por lo que es crucial determinar su distribución. Utilizando un anticuerpo monoclonal específico para la región extracelular de MC1R, probamos un panel de melanomas, carcinomas y células B transformadas por EBV. MC1R se detectó en el 81% (17/21) de los melanomas pero no en otros tumores (0/12). Mediante inmunohistoquímica, se detectó una fuerte expresión de MC1R en melanomas primarios (n=12) y metastásicos (n=11), también se demostró bajos niveles en otros tejidos incluyendo médula adrenal, cerebelo, hígado y queratinocitos, detectándose una mayor expresión de MC1R en melanomas que en melanocitos normales. Al utilizar citometría de flujo, MC1R fue detectado en monocitos/macrófagos activados in vitro y en la línea de leucemia THP-1 en niveles cercanos a 1/3 a 1/8 de lo encontrado en melanomas. Células dendríticas inmaduras (DCi), en contraste a las maduras (DCm), también expresaron niveles significativos de MC1R. Al parecer la sobreexpresión de MC1R en melanomas primarios y metastásicos es suficientemente alta como para estudiar este receptor tanto desde un punto de vista de diagnóstico como terapéutico.
Financiamieno: Proyecto FONDECYT 1000888.

 

SOBREEXPRESIÓN DEL RECEPTOR DE MELANOCORTINA 1 (MC1R) EN TEJIDOS Y LÍNEAS CELULARES DE MELANOMA OCULAR. (Over-expression of melanocortin receptor 1 (MC1R) in ocular melanoma tissues and cell lines). *Juretic, N., López, M., Serrano, A., Escobar, A., Salazar-Onfray, F. Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago.


Recientemente, nuestro grupo demostró que péptidos nonaméricos derivados de MC1R, pueden generar CTL péptido-específicos capaces de reconocer líneas de melanomas HLA-A2+ y que este receptor se encuentra sobreexpresado en melanomas cutáneos primarios y en sus metastásis. El melanoma uveal es el tumor ocular más frecuente en la vida adulta y se desarrolla en un sitio de privilegio inmune donde las respuestas inmunes adaptativas están finamente reguladas. Para estudiar la expresión de esta proteína en este tipo especial de melanoma, establecimos dos líneas celulares a partir de biopsias provenientes de enucleaciones, que denominamos OCM-4 y OCM-5. Mediante inmunohistoquímica, utilizando un anticuerpo monoclonal dirigido a la porción extracelular de MC1R, detectamos una fuerte expresión de este receptor en el 100% de los melanomas primarios uveales analizados (N=5). Mediante inmunocitoquímica, determinamos su expresión, en dos líneas celulares derivadas de melanoma uveal y dos líneas de melanocitos. Los niveles de expresión fueron significativamente más altos en las líneas celulares derivadas de melanoma uveal. Actualmente, estamos estableciendo líneas CTL específicas anti-MC1R, que sean capaces de reconocer líneas de melanoma ocular y de esta forma estudiar la sensibilidad de este tipo de tumor al reconocimiento por líneas CTL MC1R específicas. Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1000888 *Becado del Programa de Apoyo a la Participación de Estudiantes de Doctorado en Congresos Científicos en Chile - CONICYT 2001.

 

DETECCIÓN DE PRECURSORES CTL ESPECÍFICOS CONTRA MC1R EN PBMC Y TIL DE PACIENTES CON MELANOMA HLA-A2+. (Detection of specific CTL precursors directed against MC1R in PBMC and TIL of HLA-A2+ melanoma patients). *Escobar, A.1, Lundqvist, A.2, López, M.1, Kiessling, R.2, Salazar, F.1. 1 Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago, Chile. 2 Departamento de Oncología y Patología, Instituto Karolinska, Estocolmo, Suecia.


Recientemente hemos demostrado que tres péptidos nonaméricos derivados del receptor de melanocortina 1 (MC1R) pueden promover CTL péptido especificas a partir de PBL de donantes normales los cuales pueden reconocer blancos transfectados con MC1R y también un conjunto de melanomas MHC clase 1 en un contexto HLA-A2.1. En este trabajo evaluamos la presencia de precursores específicos contra MC1R, en CTL anti melanoma derivadas de linfocitos infiltrantes de tumor (TIL) y PBMC de pacientes con melanoma. Nosotros detectamos actividad citotóxica anti MC1R HLA-A2+ restringida en 5 de 10 CTL especificas para líneas celulares de melanoma HLA-A2+. Estas CTL reconocieron los péptidos MC1R 244(TILLGIFFL) y MC1R 291(AIIDPLIYA), y de estas 5, 2 también pudieron reconocer el péptido MC1R 283(FLALIICNA). Todas las líneas CTL que reconocieron péptidos MC1R, también mostraron actividad citotóxica contra uno o mas de los tres epitopos de gp100 probados, pero solo 3 de 6 co-reconocieron epitopos de MC1R y MART1/Melan-A. Finalmente, nosotros también demostramos la existencia de CTL reactivas contra MC1R en PBMC de un paciente con melanoma usando ELISPOT. Estos resultados demuestran que las CTL especificas contra MC1R no son clonalmente eliminadas en los pacientes con melanoma, y representan un componente inmunodominante del repertorio de CTL en TIL y PBMC. Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1000888. *Becado del Programa de Apoyo a la Participación de Estudiantes de Doctorado en Congresos Científicos en Chile - CONICYT 2001.

 

 

ASOCIACIÓN ENTRE POLIMORFISMO DEL PROMOTOR DEL FACTOR DE NECROSIS TUMORAL Y PERIODONTITIS ASOCIADA A DIABETES TIPO 1. (Association between tumor necrosis factor promoter polymorphism and periodontitis associated to type 1 diabetes). *Pérez, C., Pavez, V., Aguirre, A., Cuenca, J., Schiattino, I., Ferreira, A. y Aguillón, J.C. Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago.


Se ha descrito, una asociación entre la mayor producción de TNF y el genotipo de su promotor, especialmente en la posición _308 (cambio GA). Frente a un mismo estímulo, los individuos que presentan el genotipo G/A o A/A (TNF2) pueden producir más citoquina que aquéllos con genotipo G/G (TNF1). La presencia del alelo TNF2 ha sido reconocido como un importante factor de riesgo en el desarrollo de varias enfermedades, en las cuales se ha detectado una sobreproducción de TNF. En este trabajo abordamos la posible relación entre la Periodontitis asociada a diabetes tipo 1 y la presencia del genotipo TNF2. Para ello, seleccionamos 30 individuos diabéticos tipo 1, 12 de ellos con Periodontitis establecida (Grupo A, D+EP+) y 18 individuos con salud periodontal (Grupo B, D+EP-). Se reclutaron también, 14 individuos que sólo presentan Periodontitis (Grupo C, D-EP+) y 18 individuos sanos formaron el grupo control (Grupo N, D-EP-). Un 25% de los individuos del grupo D+EP+ presenta el alelo TNF2, mientras el resto de los individuos posee el alelo TNF1. El análisis estadístico demostró que no existe una relación significativa entre el haplotipo de TNF y los tres grupos en estudio. Por otra parte, la producción de esta citoquina y su actividad citotóxica, a cantidades equimolares, varían entre los grupos, sin embargo, no encontramos diferencias significativas al comparar el grupo de riesgo con el grupo control. Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1990936. *Becado del Programa de Apoyo a la Participación de Estudiantes de Doctorado en Congresos Científicos en Chile - CONICYT 2001.

 


ESTUDIO PRELIMINAR DE MUTACIONES EN EL GEN DEL CD40L POR SSCP EN 4 FAMILIAS CHILENAS CON DIAGNOSTICO DE INMUNODEFICIENCIA PRIMARIA. (Preliminary study of mutations in the CD40L gene by SSCP in 4 Chilean families with a primary immunodeficiency diagnosis). Lüttges, P., Cornejo, M., Navarro, S. Laboratorio de Inmunología. Escuela de Medicina. Universidad de Valparaíso. Valparaíso.


De acuerdo al Registro Chileno de Inmunodeficiencias, el 13% de los pacientes inmunodeficientes tienen diagnóstico clínico de Inmunodeficiencia Común Variable (IDCV). Esta es una enfermedad de origen diverso y su patogénesis es aún indeterminada. Se ha descrito que la heterogeneidad de sus características clínicas e inmunológicas permiten distinguir 4 grupos. Se postula que un paciente con diagnóstico clínico de IDCV correspondería a SHIgM con fenotipo no clásico. Para ello se estudió por SSCP el gen de la molécula CD40L, codificada en el cromosoma X y responsable del SHIgM tipo I, en 4 familias chilenas. Un caso clásico de AGB-X ( fam.1), una IDCV (fam.2), un SHIgM (fam. 3) y una familia con un varón con diagnóstico de IDCV, del cual se sospecha un SHIgM no clásico (fam.4). Se aisló DNA de los pacientes, sus familiares y controles. Se diseñaron los partidores de los 5 exones de la molécula CD40L, se amplificaron por PCR y se realizó SSCP para cada uno de ellos. El SSCP dio normal en las familias 1 y 2. Aún cuando se esperaba encontrar alguna alteración en la movilidad electroforética del gen de la molécula CD40L de la familia 3, ésta también dio normal. A la madre y hermana del paciente de la familia 4 se les encontró una alteración en el exón 2. Estos resultados preliminares sugieren que la madre y hermana del paciente de la familia 4 son heterocigotas para el gen de la molécula CD40L, que es necesario continuar el estudio de las familias 3 y 4.
Financiamieno: Dirección de Investigación - Universidad de Valparaíso. DIPUV 11/99.

 

MODIFICACIÓN GENÉTICA DE LA PROTEÍNA DEL CIRCUMSPOROZOITO DE Plasmodium yoelii Y SU INMUNOGENICIDAD POR INMUNIZACIÓN GENÉTICA (Antigen Engineering of the Circumsporozoite protein of Plasmodium yoelii and its immunogenicity by Genetic Immunization). Silva, S., Lanza, P., Puga, G., Ferrer, P., Leyton, L.,* Billetta, R. Programa Disciplinario de Inmunología, Programa de Morfología*, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Santiago.


La forma de entrega de un antígeno y su localización celular, tiene efectos cuantitativos y cualitativos en la respuesta inmune por inmunización genética. La proteína del circumsporozoito de Plasmodium yoelii (PyCSP) se encuentra en la superficie del parásito durante la etapa de infección y se ha demostrado que puede inducir una respuesta inmune humoral y celular. Con la finalidad de establecer el efecto de la localización celular del antígeno en la respuesta inmune en contra de PyCSP inducida mediante inmunización genética, se modificaron dominios de la región codificante de PyCSP para dirigir a este antígeno a diferentes compartimentos subcelulares. En particular, se introdujeron modificaciones en el gen de PyCSP en la secuencia líder de traslocación al retículo endoplasmático. Los efectos de estos cambios y la resultante localización intracelular de PyCSP se evaluaron en líneas celulares murinas mediante microscopía confocal. Se compararon los niveles de expresión de las distintas construcciones de PyCSP a nivel de RNA y los niveles de secreción de PyCSP. Con el fin de evaluar la inmunogenicidad de PyCSP conferida in vivo por la entrega diferencial de la proteína, se inmunizaron ratones BALB/c intra-muscularmente mediante inmunización genética.
Financiamieno: Proyecto FONDECYT-Rosario-Billetta-1990914

 

DETERMINACIÓN DE POLIMORFISMOS DE IL-1 EN INDIVIDUOS CON PERIODONTITIS AGRESIVA Y DIABETES MELLITUS TIPO 1. (Determination of IL-1 polymorphisms in patients with aggressive periodontitis and type 1 diabetes mellitus). González, F.E., Pérez, C., Cuenca, J., Aguirre, A., Pavez, V., y Aguillón J.C. Programa Disciplinario de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina , Universidad de Chile. Santiago.


La Periodontitis es una enfermedad de naturaleza infecciosa caracterizada por la destrucción de los tejidos de inserción del diente, y constituye una de las principales causas de pérdida de dientes en la población adulta, existiendo formas agresivas (PA) y asociada a diabetes mellitus tipo 1 (DM). Uno de los mecanismos de destrucción tisular es la interacción de endotoxinas bacterianas con células mononucleares con la producción de mediadores catabólicos que incluyen IL-1. De los polimorfismos descritos en el grupo de genes IL-1, los más importantes serían la transición de C por T en las posiciones _889 del gen IL-1A y +3953 del gen IL-1B. Se ha establecido una asociación entre el genotipo compuesto con presencia del alelo 2 en ambas posiciones y mayor severidad de la periodontitis crónica, no así en PA. El objetivo de este estudio fue la caracterización de los genotipos IL-1A e IL-1B asociados con periodontitis en pacientes DM, con PA y sanos. Para tal efecto, se genotipificaron 4 grupos de individuos: DM sin PA (n=8), DM con PA (n=10), PA sin DM (n=4), e individuos sanos (n=10). En la posición +3953, la mayor frecuencia observada fue para el genotipo 1.1, siendo mayor en el grupo DM con PA con un 77.7%. En la posición _889, el genotipo más frecuente fue el 1.1 en todos los grupos. El genotipo compuesto asociado a mayor severidad de la periodontitis crónica, se observó con baja frecuencia en los grupos DM (11.1% y 10% respectivamente), presentando el grupo control la mayor frecuencia (40%).
Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1990936.

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