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Boletín de la Sociedad Chilena de Química

Print version ISSN 0366-1644

Bol. Soc. Chil. Quím. vol.47 no.3 Concepción Sept. 2002

http://dx.doi.org/10.4067/S0366-16442002000300009 

Bol. Soc. Chil. Quím., 47, 259-263 (2002) ISSN 0366-1644

PROPIEDADES ANTIVIRALES DE COMPUESTOS
NATURALES Y SEMI-SINTETICOS DE LA RESINA DE
HELIOTROPIUM FILIFOLIUM

RENE TORRES*, BRENDA MODAK, ALEJANDRO URZÚA1,
FRANCO DELLE MONACHE2 , ELSA DAMONTE Y CARLOS A. PUJOL3.

1Departamento de Ciencias del Ambiente, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile,
Avda. Bernardo O'Higgins 3363, Santiago, Chile; e-mail: rtorres@lauca.usach.cl
2
Centro Chimica dei Reccettori del CNR, Istituto di Chimica , Universitá Cattolica del Sacro Cuore,
Largo Francesco Vito 1, Roma, Italia
3
Laboratorio de Virología, Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales,
Pabellón 2, piso 4, Ciudad Universitaria, Buenos Aires,Argentina

(Recibido: Enero 11, 2002 - Aceptado: Mayo 28, 2002)

RESUMEN

Del producto mayoritario del exudado resinoso de Heliotropium filifolium ( Fam. Boraginacea), el inusual alcohol espiránico filifolinol 1, se sintetizó el compuesto, no previamente descrito, filifolinona 3. Estos dos, junto al también aislado previamente de H. filifolium , senecionato de filifolinol 2, fueron ensayados en sus antividades antivirales frente a cepas de cinco virus, productores de enfermedades en seres humanos. El filifolinol resultó ser el más activo frente al virus de la poliomelitis, pero con una estrecha relación entre la dosis antiviral y la citotóxica.

PALABRAS CLAVES: Heliotropium filifolium, exudado resinoso, filifolinol, sintesis de filifolinona, propiedades antivirales

ABSTRACT

A new compound called filifolinone 3 was synthesized from the unusual spiranic alcohol filifolinol 1, the principal compound isolated from the resinous exudate of Heliotropium filifolium. (fam.Boraginaceae) Both compounds and the ester derivative of 1, filifolinyl senecionate 2 were tested as antiviral agents against five virus species of importance in human diseases. The most active compound resulted 1, specially against polio virus, but with a tight relationship between antiviral dosis/cytotoxic dosis.

KEYWORDS: Heliotropium filifolium, resinous exudate,filifolinol, filifolinone synthesis, antiviral properties.

INTRODUCCION

De la resina de Heliotropium filifolium hemos aislado y caracterizado un inusual compuesto con un anillo espiránico, formado posiblemente desde un derivado aromático O-geranilado oxidado por la ciclación de esta cadena. A tal compuesto lo hemos denominado filifolinol 11)

Un nuevo examen de la resina, ha permitido aislar el éster senecionílico del alcohol mencionado 22) Dada la apreciable cantidad disponible del alcohol, en esta comunicación se describe la síntesis de la cetona respectiva, a la cual hemos denominado filifolinona 3.

Por el interés que puede presentar el esqueleto nuevo en la descripción de propiedades biológicas, como la influencia que sobre ellas puede traer el cambio de grupos funcionales, hemos examinado la actividad antiviral de los tres compuestos mencionados

RESULTADOS Y DISCUSION

La filifolinona se obtuvo por la oxidación convencional con CrO3 en piridina y posterior purificación en columna de sílica gel con mezcla de benceno-acetato de etilo. Los datos espectroscópicos fueron los esperados para la estructura, basados en los compuestos 1 y 2 1-2), dando una señal en el espectro de ir a 1720 cm-1 correspondiente al grupo carbonilo, que apareció a d 212,35 ppm en el espectro de rmn de 13C. El espectro de masa dió la señal del ión molecular a m/z de 302, correspondiente a la FM C18H22O4.

Tabla I. Valores de desplazamientos químicos de RMN de 13C
de compuestos 1, 2 y 3 (100,6 MHz, CDCl3, TMS).

Se ensayaron las actividades antivirales de filifolinol 1, senecioato de filifolinol 2 y filifolinona 3 midiendo la actividad inhibitoria de los tres compuestos sobre la replicación de los siguientes virus humanos: Herpes simplex tipo 1 (HSV-1) cepa F; Herpes simplex tipo 2 (HSV-2) cepa G; Junín cepa IV4454; Polio cepa Sabin y virus respiratorio sincinial (RSV) cepa Long. En cada caso se determinó la dosis inhibitoria 50% (DI50), concentración en mg/ml que red uce al 50% el efecto citopático viral y el índice de selectividad (IS), relación entre el DC50 y el DI50. Los resultados obtenidos (ver Tablas II y III) indicaron que los compuestos poseen un cierto efecto antiviral, especialmente el filifolinol en su acción contra el virus de la poliomelitis, pero también presentaron un grado de citotoxicidad que provoca que la relación entre la dosis citotóxica y la dosis antiviral sea muy estrecha. Estudios adicionales sobre nuevos derivados del filifolinol y exploración más profunda sobre la importancia de la citotoxicidad están en desarrollo.

Tabla II. Ensayo de citotoxicidad.

Tabla III. Actividad antiviral de filifolinol y derivados naturales y sintéticos.

* DI50 en mg/mL
** IS = DC50/DI50

PARTE EXPERIMENTAL

Extracción, aislamiento y caracterización de filifolinol 1.- Heliotropium filifolium (Miers) Reiche (fam. Boraginaceae) fue recolectado en Octubre de 1994 en las cercanías de Carrizal Bajo (III Región, 29° 57' S, 71° O). Muestras de la especie están depositadas en el herbario de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Pontificia Universidad Católica de Chile.

El exudado resinoso fue obtenido por extracción del material aéreo fresco de la especie, sumergiéndola por 30 segundos en diclorometano. Los extractos logrados fueron concentrados a presión reducida dando un residuo pegajoso (225 g, 7,3% sobre planta seca). Parte de este extracto (20 g) fue fraccionado por CC de sílica gel, usando hexano con cantidades crecientes de acetato de etilo como solventes de separación. Las fracciones de la columna fueron controladas por ccf en sílica gel, utilizando los sistemas hexano-acetato de etilo(4:1), cloroformo-metanol (95:5) y cloroformo-metanol (85:15), aislándose 1 y 2.

Preparación y caracterización de filifolinona 3.- 230 mg de 1 fueron disueltos en 5 mL de piridina anhidra y se agregaron 240 mg de CrO3. La mezcla se dejó a temperatura ambiente por 18 horas y se volcó sobre 5 mL de metanol y luego se agregó agua. Se extrajo la capa acuosa con éter y se lavaron los extractos con abundante agua acidificada con ácido clorhídrico. El compuesto se purificó en columna de sílica gel, utilizando la mezcla de benceno-acetato de etilo (95:5). Luego de recristalizar de metanol, se obtuvieron 190 mg de 3.

Filifolinona se obtuvo como cristales blancos de p.f. 95-98°, rmn de 1H (3OO MHz en cloroformo deuterado) en ppm: 0,90 (d, 3H, J=7 Hz, H-4'), 0,93 (s, 3H, H-9'), 1,32 + 1,92 (m, 2H, H-5'), 1,39 (s, 3H, H-10'), d2,29 + 2,74 (m, 2H, H-6'), 2,68 (m, 1H, H-3'), 2,76 (d, 1H, J=17,2 Hz, H-1'A), 2,92 (d, 1H, J=17,2 Hz, H-1'B), 3,86 (s, 3H, OCH3), 6,77 (d, 1H, J=8,1 Hz, H-2), 7,80 (d, 1H, J=1,2 Hz, H-5), 7,86 (dd, 1H, J=8,1 y 1,2 Hz, H-3); rmn de 13C , ver Tabla I, emie, m/z (int. relativa): 302 (M+, C18H22O4, 15).

Actividades citotóxicas y antivirales de filifolinol, senecioato de filifolinol y filifolinona.- Ensayo de citotoxicidad.4)- Se incubaron cultivos de células Vero y Hep-2 en presencia de distintas concentraciones de los tres compuestos y luego de 48 horas a 37° se contó el número de células viables, por exclusión con azul Tripan. En cada caso se determinó la dosis citotóxica 50% (DC50), concentración que reduce el número de células viables al 50%. Para resultados, ver Tabla 2.

Ensayo de actividad antiviral.5-6).- Se ensayó la actividad inhibitoria de los tres compuestos sobre la replicación de los siguientes virus humanos: Herpes simple tipo 1 (HSV-1) cepa F; Herpes simplex tipo 2 (HSV-2) cepa G; Junín cepa IV4454; Polio cepa Sabin; virus respiratorio sincicial (RSV) cepa Long. Los cuatro primeros se ensayaron en células Vero y RSV en células Hep-2, determinándose el efecto inhibitorio de cada compuesto sobre la citopatogenicidad viral a los tres días post-infección para HSV-1, HSV-2, Polio y RSV y a los siete días post-infección para virus Junín. En cada caso se determinó la dosis inhibitoria 50% (DI50), concentración en m/mL que reduce al 50% el efecto citopático viral y el índice de selectividad (IS), relación entre DC50 y DI50. Para resultados ver Tabla III.

AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen a DICY (USACH) y al convenio de ayuda internacional CONICYT (CHILE)/CNR(ITALIA) a ANCPyT (Argentina) y al Ministerio de Salud (Argentina) por el financiamiento.

BIBLIOGRAFIA

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