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Boletín de la Sociedad Chilena de Química

versión impresa ISSN 0366-1644

Bol. Soc. Chil. Quím. v.44 n.4 Concepción dic. 1999

http://dx.doi.org/10.4067/S0366-16441999000400012 

DETERMINACION DE METAMIZOL-SODICO EN SUPOSITORIOS
POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA DE ALTA
EFICIENCIA (HPTLC)

SAURA MENDOZA MARIN, VICTOR HUGO JARAMILLO MENA Y MARIO VEGA HERRERA*

Facultad de Farmacia, Universidad de Concepción, Casilla 237, Concepción, Chile.
(Recibido: Septiembre 4, 1998 - Aceptado: Agosto31, 1999)

RESUMEN

En el presente trabajo se propone y valida un método de análisis por Cromatografía en Capa Fina de Alta Eficiencia (HPTLC), para la determinación cuantitativa del metamizol-sódico en supositorios de Witepsol H-15 como matriz tipo grasa.

Se empleó el procedimiento de validación de Rosemont, basado en el análisis estadístico de la precisión, exactitud, linealidad, proporcionalidad a través de ensayos con seis réplicas a tres niveles de concentración que representan el 90, 100 y 110% de la concentración declarada.

De acuerdo a los procedimientos de validación, el método propuesto reune las características de conveniencia y confiabilidad, por cuanto demostró ser exacto porque el Límite de Confianza de la media contempla el 100% de recuperación, preciso (CV = 2,45), lineal (RV = 7,77 < F = 8,66) y proporcional porque el intervalo de confianza del intercepto incluye el 0.

Se demostró estadísticamente que el método cromatográfico (HPTLC) propuesto no difiere significativamente del método espectrofotométrico, oficial de la Faracopea Alemana para la cuantificación del metamizol-sódico en supositorios comerciales fabricados con Witepsol H-15.

PALABRAS CLAVES: Metamizol-sódico, cromatografía en Capa Fina de Alta Eficiencia (HPTLC), densitometría, cuantificación, validación de método analítico.

SUMMARY

A quantitative method for metamizol-Na in suppositories made with Witepsol H-15 as fatty matrix, using High Performance Thin Layer Chromatography (HPTLC) is proposed and validated.

Rosemont procedure based on statistical analysis of accuracy, precision, linearity and proportionality through the analytical assay of six replicates and three concentration levels representing 90, 100 and 110% of declared concentration was used.

Accordingly validation procedure, the method is convenient and trustful because the Confident Limit of mean includes 100% of recovery, precise (CV = 2.45), linear (RV = 7.77 < F = 8.66), and proportional since Confident interval of intercept includes zero.

The HPTLC method, proposed for quantitative analysis of metamizol-Na in suppositories do not differ statistically from the Official Method described in the German Pharmacopeia.

KEY WORDS: Metamizol-Na, High Performance Thin Layer Chromatography (HPTLC), densitometry, quantitative analysis, validation of analytical method.

*A quien debe dirigirse la correspondencia

INTRODUCCION

Los sistemas modernos de control de calidad en la industria farmacéutica buscan la reducción de los análisis en el producto final en favor de los controles durante el proceso. Esta tendencia ha producido un incremento en el número de análisis a realizar haciendo necesario la búsqueda de métodos rápidos seguros y confiables que permitan satisfacer esta necesidad1,2). En el presente estudio se plantea un método por Cromatografía en Capa Fina de Alta Eficiencia (HPTLC) para el análisis de metamizol-sódico incorporado a una matriz tipo grasa.

El metamizol sódico se presenta como un polvo blanco cristalino o ligeramente amarillo. Muy soluble en agua y alcohol e insoluble en cloroformo y éter3). Corresponde al sulfonato sódico de la Amidopirona, tiene actividad farmacológica como analgésico y antipirético4). La incorporación del principio activo en una matriz tipo grasa le ofrece una mayor protección frente a los agentes que causan su degradación.

Los métodos analíticos para el metamizol5,6), incluidos los oficiales de diferentes farmacopeas, la mayor parte titrimétricos y espectrofotométricos, se caracterizan por ser poco eficientes principalmente por el tiempo requerido para cada ensayo lo que limita el número de muestras a analizar.

La cromatografía en capa fina de alta eficiencia (HPTLC), resulta el método de elección para muestras complejas que contienen impurezas que quedan retenidas en la fase estacionaria7). Resulta eficiente en cuanto al tipo y número de muestras a analizar en forma simultánea con la ventaja adicional de la economía de solventes a utilizar1). Tiene una mayor resolución y eficiencia, debido al menor tamaño y uniformidad de las partículas de la placa cromatográfica, la automatización en la aplicación de muestras y patrones en la superficie de la placa y la alta sensibilidad de los densitómetros usados para el análisis cuantitativo de las muestras8).

Este trabajo, propone y valida de un método de análisis rápido, sensible y simple por Cromatografía en Capa Fina de Alta Resolución (HPTLC) para la determinación cuantitativa del metamizol-sódico en supositorios fabricados con Witepsol H15, se compara con un método oficial en cuanto a repetibilidad, reproducibilidad y porcentaje de recuperación.

PARTE EXPERIMENTAL

Materiales y reactivos

Estándar de metamizol-sódico (Sigma, USA), Witepsol H15 (Marsing Co., Dinamarca), metamizol-sódico grado farmacopea (Chemomédica, Alemania).

Eter, metanol, acetato de etilo, hidróxido de amonio concentrado, todos de grado analítico de procedencia Merck, Darmstadt, Alemania.

Placas cromatográficas HPTLC (10x10, Kieselgel 60 F254), Merck.

Aplicadores de muestra Linomat III y ATS III, Espectrofotodensitómetro Scanner II acoplado a un PC con Software CATS versión 3.17, Cámara de desarrollo vertical. Todos, procedentes de Camag, Muttenz, Suiza.

Espectrofotómetro dobe haz, UV-150-02, Shimadzu Corp., Kioto, Japón.

Preparación de la muestra y el estándar

Se preparó una solución estándar de metamizol sódico de 1 mg/mL, con agua destilada, herbida y fría. A partir de ella, por dilución con metanol se preparó la solución de trabajo de concentración 50 µg/mL.

Para la muestra, y de acuerdo a los requerimientos del procedimiento de Rosemont9) la validación de un método analítico, se mezcló materias primas (metamizol-Na - Witepsol H-15) en proporción tal que la concentración fuera de 90%, 100% y 110% de la dosis declarada, semejando la forma farmacéutica. A partir de la cual se obtuvo una solución metanólica de concentración similar (50 µg/mL).

Para el análisis de los supositorios, la base grasa se disolvió con 50 mL de éter etílico en un embudo de decantación, el principio activo liberado se extrajo con 50 mL de agua destilada herbida y fría, separada la fase acuosa se enrasó a 100 mL con metanol. La solución hidro-metanólica resultó estable guardada en refrigeración.

Cromatografía

Las muestras y los estándares fueron aplicados por duplicado, en bandas de 3 mm y a una distancia de 5 mm. Ocho pistas se utilizaron para los estándares y las ocho restantes para cuatro muestras en duplicado por cada lado de la placa.

Como fase móvil se utilizó: acetato de etilo - metanol - hidróxido de amonio concentrado (75/24/1, v/v/v), en cámara de desarrollo vertical saturada con la fase móvil, con un recorrido de 5 cm.

Espectrograma de absorción

Establecidas las condiciones crmatográficas, se obtuvo el espectro de absorción con el objeto de determinar la longitud de onda de máxima absorción del metamizol sódico. La Figura 1 muestra el espectro de absorción del metamizol entre 200 y 400 nm obtenido directamente de la placa después de la cromatografía.

FIG. 1. Espectrograma de absorción del metamizol sódico. Espectrograma de absorbancia de metamizol realizado in situ, después de la separación cromatográfica: cantidad = 253,4 ng. Fase móvil: etil acetato + metanol + NH4OH (25%); (75+24+1, v/v). Condición del solvente = alcalino. Desarrollo en cámara de desarrollo lineal vertical, saturada. Distancia de migración = 17,5 mm, Rf = 0,18 - Longitud de onda de máxima absorción = 270 nm.

Curva de calibración

Para establecer el rango de linealidad, se elaboró una curva de calibración mediante la aplicación de concentraciones del estándar entre 5 ng y 300 ng por mancha. Los distintos niveles de concentración se aplicaron en bandas de 3 mm.

Método de ensay oficial

Se basó en el método de la Farmacopea Alemana, DAB IC6), en el que se hace reaccionar el metamizol sódico con cloruro de cobre al 5% en medio tamponado con Buffer cloruro de sodio/acetato de sodio/ácido clorhídrico, pH 4,5, formándose un complejo de color verde que se mide en espectrofotómetro a 340 nm.

El metamizol se extrajo desde el supositorio con 50 mL de agua recién hervida y fría, previa disolución de la base grasa con 50 mL de éter. La fase acuosa se recibió en un matraz aforado de 100 mL y se completó a volumen con agua. A partir de esta solución se tomó una alícuota a la que se agregó la solución de cloruro de cobre y se completó el volumen con la solución tampón. En paralelo se trató de igual manera el estándar y el blanco.

RESULTADOS Y DISCUSION

Cromatografía

El sistema cromatográfico seleccionado permitió la separación del metamizol de compuestos que corresponderían a productos de degradación, sin interferencia de la matriz grasa. La Figura 2 muestra el cromatograma de un barrido donde se observa la separación del metamizol y un probable producto de degradación.

FIG. 2. Separación del metamizol [1] y probable producto de degradación [2]. Cromatograma del barrido realizado a 270 nm de una pista cromatográfica de la solución de metamizol mantenida 72 horas a temperatura ambiente. Fase móvil: etilacetato + metanol + NH4OH (25%); (75+24+1; v/v), cámara de desarrollo lineal vertical, saturada con los vapores de la fase móvil.

Ls compuestos descritos como probables productos de degradación10) aparecen en las soluciones de patrones y/o extractos, después de 48 horas expuestas a la luz y a temperatura ambiente.

La Figura 1 representa el espectrograma de absorción del metamizol sódico. Se observa un máximo de absorción a 270 nm, longitud de onda que se utilizó para el análisis cuantitativo.

Linealidad

La curva resultó lineal entre 50 y 250 ng/mancha con una ecuación de regresión: y = 3,585x + 139,05 y con coeficiente de regresión, R = 0,997. En el análisis cuantitativo por HPTLC, la cuantificación se hace por interpolación en una curva hecha en cada lado de la placa cromatográfica.

Límite de detección y cuantificación

Se utilizó el procedimiento de la USP XXIII11), haciendo una cromatografía a tres concentraciones en triplicado por debajo de la menor concentración de la curva de calibración. Este ensayo permitió determinar el límite de detección en 10,9 ng/mancha y el de cuantificación en 16,1 ng/mancha.

Porcentaje de recuperación

Se trabajó con mezclas de principio activo (metamizol) y matriz tipo grasa (Witepsol H15), con tres concentraciones del principio activo de: 225, 250 y 275 mg. Se hicieron determinaciones con seis réplicas para cada una de las concentraciones. La concentración del principio activo encontrada y el porcentaje de recuperación, se detallan en la Table I.

TABLA I. Ensayo de recuperación del metamizol sódico desde una matriz tipo grasa (Witepsol H15).


Concenración
Ensayada (mg)
n=6
 
Concentración
Encontrada (mg)
Promedio
 
Porcentaje de
Recuperación
%

225
250
275
 
230,59
246,96
276,88
 
102,48
98,78
100,.69
Prom. = 100,64

a2,45%

b98,9-102,30%
c(-142,30) - 200,06
d0,5827
aCoeficiente de variación. bLímite de confianza de la media. cIntervalo de confianza del intercepto. dError estándar relativo.

Análisis de Varianza


Intercepto: 28,8811
Pendiente: 0,8926
Pendiente: 0,9476

RV = 7,77
F0,01;1;15 = 8,66
 

De acuerdo con los resultados reportados en las tablas anteriores, se puede concluir que el método de análisis propuesto, el HPTLC, es un método preciso, exacto, proporcional, lineal y sensible, por cuanto satisface los requerimientos del procedimiento de validación de métodos analíticos de Rosemont.

Comparación de ambos métodos

Se aplicó el estadígrafo t de student, para comparar el método de ensayo propuesto, el HPTLC y el oficial de la Farmacopea Alemana. Con este objetivo se ensayaron 10 supositorios fabricados en el laboratorio. Los porcentajes de recuperación obtenidos por ambos métodos de ensayos se muestran en la Tabla III.

TABLA III. Porcentaje de recuperación del principio activo por ambos métodos de ensayo.


aMétodo I
 
bMétodo II
 

Promedio
Desv. estándar
000000000tc
= 103,33
= 3,436
= 1,168
Promedio
Desv. estándar
000000000t0,05
= 101,88
= 1,895
= 2,101

000000000qMétodo oficial. bHPTLC

Con un 95% de confianza, se puede concluir que no hay evidencia estadística para demostrar que los dos métodos de análisis aplicado a la determinación cuantitativa del metamizol sódico incorporado a una matriz tipo grasa sean diferentes. Por lo tanto, se propone la cromatografía planar de alta resolución como método de determinación de dicho principio activo en producto terminado por las ventajas que presenta: su mayor rapidez, el menor consumo de solventes y la posibilidad de analizar un alto número de mestras.

Aplicación del método en el análisis de supositorios comerciales de metamizol-Na

Se analizaron supositorios comerciales de metamizol producidos por el Laboratorio Pasteur utilizando el método descrito. El procedimiento se aplicó por duplicado a seis supositorios de la Serie N 911333. Los resultados del análisis se describen en la Tabla IV.

TABLA IV. Resultados del análisis de supositorios comerciales de metamizol-Na.

TABLA V. Estadígrafos de los resultados experimentales

Los resultados experimentales, aún cuando, presentan un valor promedio inferior al valor nominal declarado, se encuentra dentro de los límites aceptados (85% - 115%), establecidos por la Farmacopea para la forma farmacéutica supositorio.

CONCLUSIONES

El método por cromatografía planar de alta resolución HPTLC, propuesto para la determinación cuantitativa del metamizol sódico incorporado en una matriz tipo grasa (Witepsol H15), satisface los requerimientos de validación de un método analítico, por cuanto mostró ser: exacto, preciso, reproducible, sensible, lineal y proporcional. Además, resultó un método simple y rápido, por lo tanto una buena alterntiva de análisis para el metamizol sódico en la forma farmacéutica supositorio como quedó demostrado en el análisis practivado a un preparado comercial.

REFERENCIAS

1. B. Renger. J. of AOAC International, 76, 7-12 (1993).         [ Links ]

2. B. Renger. Ibid, 81, 333-338 (1998).

3. The Pharmaceutical Press. "Clark's Isolation and Identification of Drugs". Second Edition. Ed. Staff, London (1996).         [ Links ]

4. Flores Jesús. "Farmacología Humana". Segunda Edición, España (1992).         [ Links ]

5. Pharmacopea Japonesa. Séptima Edición, 1961, Japón.         [ Links ]

6. Pharmacopea Alemana DA-D VIII, 1964, Alemania.         [ Links ]

7. "Simple Thin-layer Chromatographic Identification of Active Ingredients in Essential Drugs". De. By Pachaly P., Treutner A., Schick W., and Radau G. Gesundheitshilfe Dritte Welt-German Pharma Health Fund e.V (1994).         [ Links ]

8. Sherma Joseph, Fried B. "Handbook of Thin-Layer Chromatography". Marcel Dekker, Inc. (1991).         [ Links ]

9. Biopharmaceutical Statistic for Drug Development. Peace K.E. Ed. Marcel Dekker Inc., N.Y. (1988).         [ Links ]