Resumen

LAFARGA-DE LA CRUZ, Fabiola et al. EVALUACION DE INTEGRIDAD GENOMICA EN ESPERMATOZOIDES DE CHOROMYTILUS CHORUS (MOLINA, 1782) MEDIANTE ENSAYO COMETA. Gayana (Concepc.) [online]. 2008, vol.72, n.1, pp. 36-44. ISSN 0717-6538.  doi: 10.4067/S0717-65382008000100006.

El ensayo cometa o gel de electroforesis de única célula es un procedimiento sencillo, rápido, relativamente barato y un método muy sensible para evaluar la integridad del genoma (ADN o daños) en los animales acuáticos expuestos a diversos agentes físicos y químicos. Sin embargo, la precisión para evaluar los ensayos cometas han sido el principal obstáculo para determinar el daño específico sufrido por estrés celular. El objetivo de este estudio fue evaluar la fragmentación del ADN en espermatozoides basado en análisis de imágenes fluorescente. La especie utilizada fue el choro zapato, Choromytilus chorus. Los experimentos in vitro se llevaron a cabo por estrés oxidativo con cinco concentraciones de peróxido de hidrógeno (0, 50, 100, 500 y 1000 mM). Para evaluar el daño del ADN se utilizaron dos grupos de parámetros: (1) parámetros morfológicos de los cometas como la longitud de la cola, el diámetro nuclear (cabeza) y el tail moment, y (2) Cuantificación de la fragmentación de ADN mediante análisis de imagen fluorescentes. El daño del ADN en el esperma se correlacionó positivamente con los parámetros morfológicos, a medida que fue expuesto a una mayor dosis de H2O2 y negativamente correlacionado con el diámetro nuclear. Además, el análisis de fluorescencia mostró que los tamaños de los fragmentos y la intensidad de la fluorescencia pueden ser relacionados con el nivel de daño en el ADN independiente de la variación intercelular. Los fragmentos grandes disminuyen con la dosis de H2O2, mientras que los medianos y pequeños aumentan a mayor concentración de peróxido. Este estudio apoya futuras investigaciones para examinar el ensayo cometa en conjunto con enfoques moleculares, especialmente en referencia a la integración de FISH para evaluar si la fragmentación del ADN incluye genes específicos.

Palabras clave : Electroforesis de gel de única célula; daño en el ADN; análisis de imágenes.